- •Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
- •Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
- •Область применения ВЭЖХ
- •Модели аналитических
- •Условия ВЭЖХ:
- •Препаративные хроматографы с коллекторами фракций
- •Принцип «Подобное растворяется в подобном, а разделяется противоположным»
- •Классификация жидкостной хроматографии
- •Нормально-фазовая жидкостная хроматография:
- •Нормально-фазовая жидкостная хроматография:
- •Обращенно-фазовая жидкостная хроматография:
- •Обращенно-фазовая жидкостная хроматография
- •Порядок элюирования веществ на разных неподвижных фазах
- •Ионообменная хроматография
- •Эксклюзионная или гель-проникающая хроматография
- •Выбор состава элюента:
- •Свойства элюентов: смешиваемость
- •Свойства элюентов: элюирующая сила
- •Схема хроматографа для ВЭЖХ
- •Компоненты ВЭЖХ прибора: Система подачи элюентов
- •Низкие скорости потока 1-10 мл/мин
- •Схема плунжерного насоса возвратно-поступательного типа
- •Система дозирования проб
- •Колонки для ВЭЖХ
- •Колонки для ВЭЖХ
- •КОЛОНКА – «СЕРДЦЕ» ХРОМАТОГРАФА
- •ДЕТЕКТОР – «ГЛАЗА» ХРОМАТОГРАФА
- •Рефрактометрический детектор
- •Спектрофотометрически
- •ФотометрыТипыс наборомфотометрических детекторов:
- •СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ В ВЭЖХ
- •Масс-спектрометрический детектор в ВЭЖХ
- •Подготовка биологических образцов для хроматографических анализов
- •Методические приемы подготовки биологических образцов
- •смесь
- •Реакционная газовая хроматография
Компоненты ВЭЖХ прибора: Система подачи элюентов
ФильтрацияДегазацияСмешиваниеКонтроль давления (50-200 атм)
Низкие скорости потока 1-10 мл/мин
Схема плунжерного насоса возвратно-поступательного типа
двигатель |
уплотни- |
|
тель |
||
|
Возвратно- поступательный поршень
колонка
демпфер
пульсов
Шаровые
пропускные
клапаны
растворитель
- Содержат 1-3 головки, чем больше, тем лучше
Система дозирования проб
Петля объемом 5-100 мкл, 6-ходовый кран
Шприцевого типа
Колонки для ВЭЖХ
•Имеют указатель направления потока, который не следует менять
•Внутренняя поверхность – гладкий металл, давление до 300 атм.
•Плавный переход от большего внутреннего диаметра к малому внешнему диаметру (под штуцер)
•Фильтры с диаметром пор 2-5 мкм входе и выходе
•Возможно использование предколонки меньшей длины
Колонки для ВЭЖХ
Колонки для аналитических разделений
Длина |
5 |
– 30 см |
|
|
|
Вн.диаметр |
2- 8 мм |
|
|
|
|
Размер частиц |
3 |
– 10 ± 1 мкм |
|
|
|
Число т.т. |
5000 - 12000 |
|
|
|
|
КОЛОНКА – «СЕРДЦЕ» ХРОМАТОГРАФА
Успех разделения в ВЭЖХ во многом зависит от типа частиц и качества их упаковки им колонки.
«Идеальная» частица адсорбента с порами
Реальные частицы адсорбента, заполняющие колонку
ДЕТЕКТОР – «ГЛАЗА» ХРОМАТОГРАФА
В ВЭЖХ - это преобразователь концентрации анализируемого вещества, растворенного в подвижной фазе, в электрический сигнал, по изменению физических свойств жидкости
Детектор |
Измеряемое физическое |
Чувствитель- |
Селективность |
|
свойство |
ность, г |
|
|
|
|
|
Спектрофотометрический |
Оптическая плотность на |
10-9 |
Высокая |
|
определенной длине волны |
|
|
|
(фильтр или монохроматор) |
|
|
|
|
|
|
Рефрактометрический |
Разность показателя |
10-6 |
Низкая |
|
преломления |
|
|
|
|
|
|
Флуорометрический |
Излучение света на |
10-11 |
Очень высокая |
|
определенной длине волны |
|
|
|
|
|
|
Амперометрический |
Ток окисления или |
10-9 - 10-11 |
Очень высокая |
|
восстановления |
|
|
|
|
|
|
Кондуктометрический |
Электропроводность |
10-10 |
Низкая |
|
элюента |
|
|
|
|
|
|
Масс-спектрометрический |
Ионный поток, возникающий |
10-9 |
Средняя |
|
при различных |
|
|
|
энергетических |
|
|
|
воздействиях |
|
|
|
|
|
|