Вопрос 105 Фитохимический анализ и биологическая стандартизация сырья, содержащего сердечные гликозиды. Качественный анализ сырья, содержащего сердечные гикозиды

1. Общие реакции

1. Реакция с бычьей желчью в присутствии концентрированной серной

кислоты. При наличии сердечных гликозидов образуется пурпурное кольцо.

2. Реакция с танином: образуется осадок.

3. Реакция с фосфорно-вольфрамовой и фосфорно-молибденовой

кислотами (на терпеноиды): образуется соответственно фиолетовая или розовая окраска.

2. Цветные реакции Реакции на пятичленное лактонное кольцо

1. Реакция Балье (с пикриновой кислотой в щелочной среде). В этом

случае развивается желтая или оранжевая окраска

2. Реакция Легаля. К сухому остатку очищенного извлечения

добавляют метилового или этилового спирта нитропруссида натрия, затем осторожно по стенке (не взбалтывая) добавляют 1-2 капли 10% раствора едкого натра раствора. На границе двух растворов появляется красное окрашивание в виде.кольца.

3. Реакция Раймонда (с м-динитробензолом в щелочной среде).

Развивается синяя окраска.

4. Реакция Кедде (с 3,5-динитробензойной кислотой в щелочной среде).

Образуется синее окрашивание.

Реакции на стероидное ядро

1. Реакция Либермана-Бурхарда. Сухой остаток очищенного извлечения

растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты. Развивается розовая окраска, приобретающая через некоторое время зеленые и синие оттенки.

2. Реакция Розенгейма. К сухому остатку очищенного извлечения

добавляют в хлороформ и смешивают с 90% водным раствором трихлоруксусной к-ты. Появляются сменяющие друг друга окраски от розовой до лиловой и интенсивно синей.

Реакции на углеводную часть молекулы

1. Реакция Молиша: к 0,5 мл извлечения добавляют 1-2 капли

свежеприготовленного 20% спиртового раствора альфа-нафтола и осторожно по стенке пробирки наливают равный объем концентрированной серной кислоты. Появление кармино-красного окрашивания на границе слоев свидетельствует о наличии гликозидов.

2. Реакция Келлер-Килиани: к 0,5 мл извлечения добавляют 1 мл

ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,05% хлорида железа, перемешивают, и полученный раствор наслаивают на равный объем концентрированной серной кислоты. На границе соприкосновения жидкостей появляется красно-коричневое кольцо, а выше над кольцом, через несколько минут, появляется сине-зеленое окрашивание

3. Реакция Фелинга (на восстанавливающие сахара). Данная реакция

складывается из двух стадий – кислотного гидролиза при нагреваиии и непосредственно реакции (с реактивами Фелинга 1 и 2). В результате образуется кирпично-красный осадок закиси меди.

Методы количественного определения сердечных гликозидов:

I. Биологический метод: контроль биологической активности проводится ежегодно. вследствие легкой разлагаемости сердечных гликозидов ЛРС обладает непостоянным действием и НД на данный вид сырья требует обязательной стандартизации сырья биологическими и химическими методами.

Принцип метода биологической стандартизации основан на способности

сердечных гликозидов в токсической дозе, вызывать остановку сердца животных в систоле. Биологическая стандартизация проводится на лягушках, кошках, голубях. Активность оценивают по сравнению со стандартным кристаллическим препаратом и выражают в единицах действия (ЕД) – лягушачьих (ЛЕД), кошачьих (КЕД) и голубиных (ГЕД).

За единицу действия принято наименьшее количество испытуемого

вещества, которое в течение 1 часа вызывает у лесной лягушки-самца весом около 30 г систолическую остановку сердца. Эта доза называется единицей действия (ЕД или ЛЕД).

В НД на лекарственное растительное сырье, сод. сердечные гликозиды,

обязательно указывается валор (V).

Валор сырья – это количество единиц действия в одном грамме сырья.

Например, для наперстянки Фармакопея требует 50-60 ЕД на 1 г листьев.

Если сырье оказывается нестандартным, а содержит больше или меньше ЕД, то порошок смешивают с другой пробой, доводя его до стандарта. Готовые порошки расфасовывают по 100 г в предварительно высушенные склянки и заливают парафином. На этикетке отмечают дату анализов и число ЕД. В случае повышенного числа ЕД указывают также формулу перерасчета на нормальную дозу. При изготовлении галеновых препаратов пользуются и нестандартным сырьем с соответствующим перечислением, беря соответственно большее или меньшее количество исходного сырья.

II. Химический метод: используют: ВЭЖХ и ГЖХ. Среди других методов, которые используются для колич. оценки содержания сердечных гликозидов являются:

1. Фотоколориметрический метод. Основан на образовании различных

окрашенных комплексов. Например, в случае использования пикриновой кислоты в щелочной среде (реакция Балье) в анализируемом растворе примерно через 30 мин развивается оранжевая окраска, и этот окрашенный комплекс имеет максимум поглощения в определенной области спектра.

При использовании ксантгидролового реактива образуется комплекс

малинового цвета с максимумом в опр. обл.

2. Хроматоспектрофотометрический метод. Основан на сочетании

метода хроматографии, позволяющего разделять целевые сердечные гликозиды, и метода спектрофотометрии или фотоколориметрии, позволяющего измерять оптическую плотность окрашенного комплекса

3. Флуориметрический метод. Основан на способности сердечных

гликозидов флуоресцировать под действием сильных кислот (H2SO4) или окислителей после кратковременного облучения УФ-светом.

4. Полярографический метод. В основе данного метода лежит

способность сердечных гликозидов восстанавливаться на ртутно-капельном электроде с образованием диффузных токов, волны которых пропорциональны

концентрации сердечных гликозидов.