біотехнологія

Добра	.	5521	73
Середня		304	60
Незадовільна		76	41

Оцінка ембріонів з використанням люмінесцентних фарбників грунтується на різному ступені проникнення фарбників через прозору оболонку живих і мертвих ембріонів. Для фарбування використовують акридиноранж (АО), флуоресцеіндіацетат (ФДА), 4,6- діаміно-2-феніліндол (ДАШ), 2,7-діаміно-10-етіл-9-фенілфенантри- діум бромід (ЕБ), 1-аніліно-нафталін-8-сульфанат (1,8-АНС).

Акридиноранж готують на розчині Локка в концентрації 1 : 40000. Ембріони з рідиною розміщують на предметному склі і додають фарбник. Інкубацію ембріонів проводять на протязі 10 хв. при кімнатній температурі в темноті, після чого фарбник змивають розчином Локка і накривають покривним склом. Оцінку життєздатності проводять під люмінісцентним мікроскопом на протязі 1,5 хв. Живі клітини набувають червонуватого відтінку, а мертві

— зеленуватого.

Оцінку ембріонів методом культивування проводять виходячи з того, що в біологічно повноцінних ембріонів в оптимальних умовах продовжується розвиток. Для культивування ембріонів застосовують поживні середовища: ТС-199, Хемса Г-10, «Ігла», сольові розчини Дюльбекко, Бринстера з різними біологічними і синтетичними добавками.

Осмотичний тиск поживних середовищ повинен бути близько 300 міліосмолей, рН 7,2—7,4. Культивують ембріони в чашках Петрі в краплях поживних середовищ на годинникових скельцях під шаром вазелінового масла, і витримують їх у газовому середовищі, яке містить 90 % азоту, 5 % кисню, 5 %діоксиду вуглецю.

На стерильне годинникове скло наносять піпеткою 25 крапель стерильного вазелінового масла і тонкою голкою вводять під нього 0,1 мл поживного середовища. Годинникове скло поміщають в чашку Петрі і ставлять в ексикатор в термостат при температурі 37 °С. На протязі 10—20 хв через ексикатор пропускають газову суміш. Потім з-під шару вазелінового масла відсмоктують поживне середовище і в свіжій порції середовища розміщують ембріони. Знову пропускають газову суміш, попередньо її фільтрують і зволожують. Герметизують ексикатор і контролюють рН при допомозі поживного середовища з домішками рН — фенолового червоного.

Більш простий спосіб — культивування ембріонів в пробірках і соломинах. Ембріони переносять в пробірку з 1 мл поживного середовища і після додавання трьох крапель вазелінового масла закривають алюмінієвою фольгою.

Ембріони можна культивувати на протязі 95 год.

Пересадка і підсадка ембріонів відрізняються тим, що в першому випадку одержані ембріони вводять синхронізованому реципієнту, який не осіменявся паралельно з донором. Якщо ж реципієнта осіменяли одночасно з донором, то йому ембріони підсаджують в ріг матки, з боку якого в яєчнику немає жовтих тіл.

При хирургічній і нехірургічній пересадці та підсадці ембріонів їх намагаються помістити ближче до верхівок рогів матки.

Лізис (розсмоктування) жовтих тіл у донора проводять шляхом внутрім'язевого введення простагландинів.

Контроль результатів трансплантації ембріонів проводять методами діагностики вагітності.

ПРИНЦИПИ ВІДБОРУ ДОНОРІВ І РЕЦИПІЄНТІВ

Донорів відбирають виходячи з мети трансплантації, переважно після 1—2-х нормальних родів, серед реагуючих суперовуляцією тварин, з господарств благополучних по інфекційних та інвазійних хворобах. На кожну тварину оформляється ветеринарне свідоцтво (форма № 1) із зазначенням клінічного стану здоров'я і результатів досліджень на бруцельоз, туберкульоз, лейкоз, вірусні респіра-

31

торні захворювання, трихомоноз, вібріоз, інфекційний пустульозний вульвовагініт, ящур (з урахуванням виду тварин).

Тварини з порушенням пербігу вагітності, родів, післяродового періоду і статевих циклів не підлягають апробації на донорство.

При підборі реципієнтів виходять з таких вимог: можливість нормальних родів, економічний ефект, не розповсюдження інфекційних хвороб, можливість приживлення ембріонів.

Для забезпечення можливості нормальних родів відбирають самок, що досягли фізіологічної зрілості, стандартної або більшої ваги.

Економічний ефект від трансплантації ембріонів досягається при різниці потенціалу продуктивності донора і реципієнтів не менше 220 %.

З метою запобігання розповсюдження інфекційних та інвазійних хвороб реципієнтів досліджують за тими ж показниками, що й донорів.

Тварини, що мають порушення статевих циклів, морфологічні зміни в статевих органах як реципієнти не використовуються. Реципієнтами можуть бути самки різного віку, однак частіше беруть молодих, після досягнення фізіологічної зрілості.

Однією з головних умов одержання якісних ембріонів і добре розвиненого життєздатного потомства є науково обгрунтована годівля та утримання донорів і реципієнтів. Тому їх відокремлюють від основного стада, забезпечують тваринам повноцінну годівлю, активний моціон, відповідний мікроклімат і спостерігають за проявом статевих циклів.

ТРАНСПЛАНТАЦІЯ ЕМБРІОНІВ У РІЗНИХ ВИДІВ СІЛЬСЬКОГОСПОДАРСЬКИХ ТВАРИН

Трансплантація ембріонів у кролів

У кролів трансплантацію ембріонів виконують хірургічним способом.

Синхронізації донора і реципієнта досягають шляхом одночасного осіменіння донора і провокуючим овуляцію коітусом реципієнтів з вазектомованим кролем. Можна провокувати овуляцію у реципієнтів також і внутрім'яовим введенням лютеїнізуючого гормону (ЛГ) у вигляді препаратів сурфагон, овогон-ТІО та ін.

Через 3—4 дні після осіменіння, під загальним наркозом або після премедікації 2 %-ним рометаром в дозі 0,4—0,5 мл проводять лапаротомію по білій лінії черевної стінки, підраховують кількість жовтих тіл в яєчниках і вимивають з матки ембріони.

Техніка вимивання ембріонів така: у верхівку рога вводиться голка, приєднується до шприца з промивальною рідиною, потім пальцями або спеціальними зажимами стискають посередині ріг матки і вводять гумову або скляну канюлю поблизу місця стискання. Промивальну рідину вводять шприцом в порожнину рога і одночасно відсмоктують її через канюлю. Зразу ж після вимивання з одного рога, проводять вимивання з другого, і одночасно ведуть пошук ембріонів. В разі невідповідності кількості жовтих тіл і знайдених ембріонів вимивання повторюють.

Після повного вимивання ембріонів матку донора промивають дезинфікуючим розчином або розчином антибіотиків, виймають канюлю і закривають ранову поверхню матки і черевної порожнини.

Одночасно проводять лапаротомію, реципієнта і оцінюють ембріони. Знайдені і оцінені ембріони в 1—1,5 мл промивальної рідини з сироваткою (фетальною) вводять у верхівки рогів, після чого черевну порожнину зашивають.

Після трансплантації вагітність визначають через 5—6 днів рефлексологічним методом, в більш пізні строки — методом пальпації.

32

Таблиця 4

Реєстрація результатів трансплантації ембріонів

Дата осімен

вимиванняДатаембріонів

Результат

Якість ембріонів

реципієнтаНомер, порода

пересадкиДата

К-сть ем-

всього

Одержано

Процен прижиг ембріон

бріонів

самців

самок

кроленят

к-сть ж.

ембріо-

«5»

«4»

«3»

н

н/пр

тіл

нів

л

п

к а»

ння

л

п

л

ц

_,

•

Після родів по кількості новонароджених визначають ефективність трансплантації. По ходу роботи вносять записи в журнал.

Трансплантація ембріонів великої рогатої худоби

У корів ембріони одержують нехірургічним і хірургічним способами.

					Таблиця 5
			Методи викликання суперовуляції удонорів
День ста-			Послідовність роботи
тевого циклу			та арепарати		Доза препарату
1			2		3
			Схема 1
0	Вітамін А			150000 МО
	Вітамін Е			100 мг
	Йодистий калій			100—200 мг
10—12	Санація матки			100—150 мг
	гсжк			2500—3000 10
	Вітамін А			75000 МО
12—14	Вітамін Е			50 мг
	Простагландин			500—30 мкг-мг
14—16	Охота		і осіменіння	і
21—23	Вимивання ембріонів
	їх пересадка чи підсад-
24—26	ка			500—30 мкг-мг
	Простагландин
			Схема 2
0	Вітамін А			150000 МО
	Вітамін Е			100 мг
10—12	Санація матки			100—150 мг
	гсжк			2500—3000 ІО
	Вітамін А			75000 МО
12—14	Вітамін Е			50 мг
	Простагландин			500—30 мкг-мг
14—16	Охота і осіменіння

Гонадотропін релізінтормон при другому осі-

33

21—23		менінні	ембріонів	1—2 мг
		Вимикання		і
24—26		їх пересадка чи підсадка
		Простагландин		500—30 мкг-мг
			Схема 3
0		Вітамін А		150000 МО
		Вітамін Е		100 мг
10—12		Санація матки		150—100 мл
		ФСГ		14 мг	'
11—13		»		13 мг
				12 мг
12—14 Простагландин				500—30мкг-мг
	Продовження		табл. 5

13-15	ФСГ		11 мг
14—16	Охота і осіменіння
21—22 Вимивання ембріонів і
	їх підсадка	чи	пересад
	ка	*
24—26	Простагландин		500—30мг

За «0» день циклу приймають день спонтанної повноцінної статевої охоти. В цей день проводять дослідження статевих огранів і вводять внутрім'язово вітаміни.

На 10—12 день циклу проводять ректальне дослідження. Якщо в яєчнику є повноцінне жовте тіло, то приступають до гормональної обробки з метою суперовуляції. Введення препаратів повинно проводитись в один і той же час, краще вранці і ввечері.

Простагландин вводять з метою розсмоктування жовтого тіла статевого циклу і прояву охоти.

Статева охота у донора на 14—16 день циклу повинна збігатися з статевою охотою у реципієнта.

				Таблиця 6
		Методи синхронізації донора і реципієнта
День	Обробка		Методи синхронізації реципієнта
статевого	донора
циклу у			При співпаданні	При невідомому	При співпа-
донора			спонтанної статевої	дні статевого ци-	даняі спон-
			охоти з охотою до-	клу	танної охоти
			нора		з днем про-
					вокованої
					охоти у до-
					нора
0	Вітамін	А —	Тривіт — 15 мл	Тривіт — 15 мл	Охота Пе-
10—12	150000 МО Віта-		Простагландин —	Простагландин —
12—14	мін Е	— 100	500—30 мкг-мг	500—30 мкг-мг	ресадка
	мг Санація матки		Тривіт — 15 мл	Тривіт — 15 мл
14—16	ФСГ, тривіт Про-			Простагландин —
			Охота
	стагландин ~.		Пересадка	500—30 мкг-мг
21-22	500—30 мкг-мг			Охота
	Охота і	осіме-		Пересадка
	ніння Вимивання

15

34

Штучне осіменіння донорів проводять при наявності статевої охоти цервікальним способом з ректальною фіксацією шийки матки. В кожній дозі сперми вводять не менше 50 млн сперміїв з активністю не нижче 4 балів. Для цього беруть 2—3 звичайні дози. Повторно сперму вводять через кожні 10—12 годин до 4-х раз протягом статевої охоти. Остання у корів-донорів подовжена в зв'язку з великою кількістю Граафових пухирців.

Вимивання ембріонів хірургічним способом

На 14—16 день статевого циклу (6—8 день після осіменіння) проводять лапаротомію (по білій лінії або паракостально), знаходять матку, в яєчниках підраховують кількість жовтих тіл і по тій же методиці, що і у кролів, вимивають ембріони.

Вимивання ембріонів нехірургічним способом

Ембріони вимивають з вершин рогів матки при допомозі катетера Фолі. Спочатку роблять низьку сакральну анестезію 2 %-ним розчином новокаїну в об'ємі 5 мл. З допомогою стилета і при ректальному контролі положення статевих органів стерильний катетер Фолі вводять через канал шийки в верхівку рога матки. В балон катетера при допомозі шприца накачують 10—15 мл повітря. До задньої частини катетера через трійник приєднують промивну систему: поліетиленові трубки, зажими, флакони з промивальною рідиною і порожні флакони для збирання рідини з ембріонами. Посуд для збору рідини з ембріонами поміщають в термоізолюю-чий матеріал (поролон, ватно-марлевий чохол), а флакони з промивальною рідиною закріплюють на підставці вище висоти тварини.

Методика виконання роботи: промивальну рідину запускають у верхівку рога і перекривають зажимом трубку. Після легкого масажу верхівки рога матки рукою, введеною в пряму кишку, знімають зажим і випускають рідину з ембріонами в порожній посуд. Через ріг пропускають 500 мл рідини порціями по 50—100 мл. Потім з катетера Фолі випускають повітря і, витягнувши катетер, ще раз ретельно промивають систему, щоб змити ембріони з стінок. Після цього на етикетку заливного посуду наносять інформацію (лівий чи правий ріг, кількість жовтих тіл в яєчнику з цього боку, час закінчення вимивання) і при кімнатній температурі залишаюь для відстоювання. Аналогічно вимивають і другій ріг.

Кількість жовтих тіл в яєчниках повинна дорівнювати кількості одержаних ембріонів.

Після пошуку і оцінки ембріонів їх пересаджують чи підсаджують реципієнтам або ж закладають на зберігання, а донору проводять санацію матки.

Ембріони вводять у верхівки рогів матки через канал шийки або дорсопіхвовий маточний прокол стінок.

В першому випадку реципієнту роблять низьку сакральну анестезію 2 %-ним розчином новокаїну в об'ємі 5 мл. Потім через пряму кишку фіксують матку і підводять до шийки вміщений в захисний чохол катетер з ембріоном. Після цього перфорують чохол і проводять катетер через шийку до верхівок рогів матки, куди і вводять ембріон.

Транспіхвові способи (японський, французький) дозволяють вводити ембріони у верхівки рогів матки минуючи канал шийки

,:	матки. За японським способом спеціальним катетером
;	проколюють
	стінку піхви над шийкою матки, а потім стінку матки
ближче до
!	верхівки, куда й вводять ембріон. За французькою мето-

дикою вве-

}дення ембріонів проводять після лапаротомії.

.і-" Простагландини вводять донору для розсмоктування жовтих

тіл.

35

Повторне використання донора можливе після 2—3 повноцінних статевих циклів. Реєстрацію результатів трансплантації проводять в такому ж порядку, як і в кролів.

Діагностику вагітності у реципієнтів проводять при допомозі ректального дослідження через 2 місяці після трансплантації, враховують також і можливе проявлення статевої циклічності. В разі підсадки ембріонів новонароджених або новонародженого ідентифікують за допомогою імунних реакцій.

Уовець трансплантацію ембріонів хірургічним способом виконують у всі періоди розвитку ембріонів до 12— 13 дня і навіть в більш пізній час вагітності.

Усвиней також використовують хірургічний спосіб, однак кращі результати досягаються при трансплантації 6—8-денних блас-тоцист.

Уконей трансплантація ембріонів проводилась лише в експерименті нехірургічним способом.

ЗБЕРІГАННЯ ЕМБРІОНІВ

Крім зберігання ембріонів методом культивування, розроблено метод довготермінового зберігання із застосуванням глибокого заморожування (кріоконсервування) в рідкому азоті при температурі —196 °С. Перевагою останнього методу являється тривале зберігання ембріонів, можливість їх транспортування і введення реципієнтам при необхідності.

Заморожування ембріонів проводиться за допомогою автоматичних програмних приладів.Автоматичні програмні заморожувачі складаються із трьох основних частин: з електронного блоку, камери для заморожування і ємкості з рідким азотом. Як холодоагент використовуються пари рідкого азоту.

З вітчизняної апаратури для заморожування ембріонів використовується «Устройство охлаждения программа» УОП-12 (Харків).

Підготовка ембріонів до заморожування

Для заморожування використовують свіжоотримані ембріони відмінной та доброї якості. Роботи по заморожуванню проводять в стерильному боксі з використанням стерильних реактивів, посуду, обладнання.

Для захисту ембріонів готують фосфатно-сольовий буфер (ФБС), до складу якого вводять 100000 од/л пеніциліну і 20 % сироватки крові. Концентрація кріопротектора-гліцерину складає від 1,0 М до 1,4 М. Починають насичувати ембріони з меншої концентрації, а готують кріопротектор, починаючи з більших концентрацій.

							Таблиця 7
			Насичення ембріонів крюпротектором
	Концентрація		1,0 М розчин		Концентрація		1,4 М розчин
	кріо-				кріо-
	протектора		Співвідношення		протектора		Співвідношення
			компонентів				компонентів
	1,0		0,74 мл гліцерину+9,26		1,4 М	1 мл гліцерину+9 мл
		мл ФБС		(=10%)		Ї>БС
0,75			1 мл 1,0 М+1 мл 0,5 М	0,92 М		2 мл 1,4 М розчину глі-
		розчину гліцерину		(6,6 %)		церину+1 мл ФБС
0,50			2 мл 1,0 М розчину глі-	0,46 М		1 мл 1,4 М розчину глі-
		церину+2 мл ФБС		(3,3 %)		гліцерину+2 мл ФБС
0,25			1 мл 0,5 М розчину глі-		—
		церину+1 мл ФБС

36

Та б л и ц я 8 Схема насичення ембріонів глі-

церином

м о	1,0	М розчин	1,4 М розчин
	Й д	і .	Я в		і .
х а?
	&?&&	■ек.	ецн	іца
►д оо		я га
		и х	X Ь ь, &
1	0,25	5	0,46	5
2	0,50	5	0,92	5
3	0,75	5	1,4	10
4	1,0	10	_	_ -

Насичення ембріонів гліцеріном приводять при кімнатній температурі в малих чашках Петрі або на годинниковому склі, куди поміщають ембріони, що мають певну концентрацію. Ембріони відмінної якості можна насичувати в розчинах 1,0 або 1,4 концентрації гліцерину на протязі ЗО хвилин без попередньої проводки. Підготовлені до заморожування ембріони переносять в скляні пробірки 50X6 мл або ампули місткістю 1 мл чи пластикові соломинки об'ємом 0,25 мл.

В кожну пробірку чи ампулу поміщають 1—4 ембріони одного донора в 0,3—0,4 мл розчину кріопротектора. В соломинках заморожують 1—2 ембріони. Заправку компонентів в соломинку проводять в такій послідовності: розчин гліцерину (2/5 об'єму), пухирець повітря, ембріони в 1,4 М розчині глицеріну (2/5 об'єму соломинки) . Стовпчик розчину кріопротектора повинен доторкнутись ; до пижа в соломинці.

ГПробірки з ембріонами закривають фольгою, скляні ампули запаюють, соломинки закривають спеціальними пластиковими пробками. Ємкості маркірують і дані заносять в журнал.

Підготовлені ємкості з ембріонами поміщають у відповідне гніздо холодильної камери й охолоджують в режимі:

від +20 до —6 °С зі швидкістю 1 °С/хв; штучна кристаліза-

ція; ?• від —6 °С до —35 °С зі швидкістю 0,3 °С/хв; перенесення ємкостей !< в рідкий азот.

і, При використанні кріопротектора гліцерину в

.концентрації ; 1,0 М штучну кристалізацію проводять в межах від —5 °С до —6 °С, і в концентрації 1,4 М — від —6 °С до — 7 °С.

Для кристалізації доторкуються до верхнього краю стовпчика середовища подалі від ембріону пінцетом або іншим металевим предметом, переохолодженим в рідкому азоті.

Ембріони зберігають в ємкостях Дьюара типу X 34 Б місткістю 33 л в спеціальних каністрах із оргскла, фторопласту. Транспортують ембріони в посудинах Дьюара типу СДС-5 місткістю 5 л у вищезгаданих каністрах.

Розморожування ембріонів і підготовка їх до пересадки

Розморожування ембріонів проводять у водяній бані при температурі + 25 °С або 37 °С. Ємкість швидко витягують з каністри і опускають у водяну баню на 10—12 секунд до майже повного зникнення льоду. Під час розморожування ємкість поступово переміщують у воді маятникоподібними рухами.

37

Розморожені ембріони в краплі розчину переносять на годинникове скло і проводять попередню морфологічну оцінку якості, а потім проводять відмивку ембріонів від кріопротектора в послідовності від більшої до меншої концентрації.Т а б л и ц я 9 Схема відмивання ембріонів від кріопротектора

Порядковий	1 М розчин		1,4 М розчин
номеррозчи-
ну
	концентрація	витримка	концентра--■	витримка
	гліцерину	(хв)	ціягліцерину	(хв)

38

1	1,0 М	10	1,40 М	10
2	0,75 М	5	1,0 М	5	З
4	0,50 М	5	0,75 М	5	5	_
6	0,25 М	5	0,50 М	5	7
Після закінчення	ФБС	10—20	0,25 М	5	терміну	перебування ембріонів в
		____	ФБС	10—20

останньому розчині гліцерину з найбільш слабкою концентрацією їх тричі промивають в свіжих порціях середовища ФБС + 20 % сироватки крові, а потім поміщають в це ж середовище на 10—20 хвилин. Ембріони сумнівної якості витримують в термостаті при 37 °С до 2 годин, з подальшою їх морфологічною оцінкою.

Інструментарій для пересадки ембріонів готується в боксі в стерильних умовах.-Катетери- шприци стерилізують кип'тінням на протязі ЗО хв і до початку роботи з ембріонами витримують в настільному боксі під бактерицидною лампою. Перед початком роботи з ембріонами

вмикають бактерицидні лампи.

в

такій

послідовності:

1

см

середовища

Соломинки

заповнюють

(ФБС),

1 см повітря, 1 см

середовища з ембріоном, 1 см повітря,

1

см

середовища

(ФБС).

Соломинку

вставляють

в

підігрітий

до

37

°С

катетер для

введення,

поміщають

в чохол,

вставляють в

кон

тейнер

і

в

горизонтальному

положенні

переносять

до

місця

вве

дення. *

ВЕТЕРИНАРНО-САНІТАРНІ ПРАВИЛА РОБОТИ ПРИ ТРАНСПЛАНТАЦІЇ ЕМБРІОНІВ

В лабораторії і боксі, де працюють з ембріонами, а також в приміщенні для кріоконсервації та зберігання ембріонів мають право знаходитись тільки працюючі там співробітники.

Бокси для роботи з ембріонами повинні знезаражуватись на протязі ЗО хв, з розрахунку 2—3 хв на 1 м3 об'єму. Приміщення боксу не рідше одного разу в тиждень ретельно вимивають і протирають розчином 3 %-ного перекису водню з миючими засобами «Прогрес» або «Сульфанол».

Для приготування 10 л розчину беруть 1,2 л пергідролю, 50 г миючого засобу і 8,7 л теплої води. Норма використання дезроз-чину 70—100 мл/м2. Розчин готують безпосередньо перед дезинфекцією. В день роботи з ембріонами столи протирають ватно-марлевими тампонами, які змо-

чені в 96° етанолі.

і

посуд

ретельно

миють

при

допомозі

щіток

і

йор

Інструменти

жиків

миючим

порошком

«Чистоль»,

промивають

проточною

водою

і тричі дистильованою, висушують і стерилізують.

^

'

Стерилізація кип'ятінням проводиться на протязі ЗО хв після закипання води при закритій кришці стерилізатора.

Стерилізація сухим жаром проводиться в сушильних шафах. В шафі розміщують сухі чисті скляні інструменти, посуд, які завернуті в пергаментний папір або фольгу для харчових цілей.

Доводять до температури +140'-----Н170 °С і витримують 1—2 год, а потім дають охолонути. Пластмасові та гумові інструменти сухим жаром не стерилізуються.

Стерилізація в автоклаві (скляний посуд, металічні інструменти, халати та ін.) проводиться при 1,5 атм. на протязі ЗО хвилин. Скляні та металеві предмети закривають пергаментним папером.

Стерилізація хімічним методом (вироби з пластмаси, гуми тощо) проводиться з використанням 70° спирту, 5 % розчину хлораміну на протязі 24 годин. Перед використанням інструменти 2—З рази промивають дистильованою водою і ФБС.

Поверхню виробів із пластмаси і гуми можна також стерилізувати опроміненням лампи БУВ-30 на протязі 20 хв на віддалі ЗО см від джерела УФП. Треба мати на увазі, що промені не забезпечують повної стерилізації внутрішньої поверхні порожнинних предметів.

39

Література

1.Безуглый Н. Д. Сборник нормативних документов НПС «Змбрион».

—Харьков, 1988. — 75 с.

2.Горбунов В. И., Варнавский А. Н. Раннєє эмбриональное раз-

витие и методи оценки качества змбрионов крупного рогатого скота при их пересадке: Методические рекомендации для слушателей повьішения квалификации ВСГШ. — Бнково, 1989. — 14 с.

3.Инструкция по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота.

— Москва, 1987. — 91 с.

4.Клинский Ю. Д., Коновалов Н. Г. Методические рекоменда-

ции по синхронизации ошгодотворения телок на промншленних компле-

ксах по выращиванию нетелей. — Дубровицн, 1989. — 6 с.

5.Мадисон В. Л., Лебедев В. И., Сальникова И. М. Методи ческие рекомендации по веденню учета при трансплантации змбрионов крупного рогатого скота. — Дубровицн, 1987. — ЗО с.

6.Сергеев Н. И., Мадисон В. Л., Лебедев В. И. Методические рекомендации по многократному использованию коров в качестве доно-

ров змбрионов при трансплантации. — Дубровицн, 1983. — 13 с. 7.Сергеев Н. И. Методические рекомендации по гормональному

вызыванию суперовуляции у коров-доноров при трансплантации змбрио-

нов. — Дубровицн, 1988. — 22 с.

8.X а н т є р Р. X. Ф. Физиология и технология воспроизводства дома-

шних животных. — М.г Колос, 1984. — 320 с.

40