- •3 Раздела
- •История кафедры микробиологии и вирусологии.
- •Медицинская микробиология, ее задачи, связь с клиническими дис- циплинами.
- •Основные задачи:
- •Обязанности микробиолога:
- •Обязанности клинициста:
- •3. Структура бактериологической лаборатории.
- •Требования к осуществлению контроля биологической безопасности в бактериологических лабораториях
- •Основные методы лабораторной диагностики инфекционных заболе ваний.
- •Молекулярно-биологические:
- •Систематика и номенклатура микробов. Домены:
- •Основные формы:
- •Строение бактериальной клетки
- •Оболочечные структуры:
- •Цитоплазма, ее составные.
- •Поверхностные структуры: жгутики, пили.
- •Спорообразование у бактерий.
- •Стадии спорообразования:
- •Споры устойчивы за счет:
- •Тема 2 Влияние физических факторов на микроорганизмы.
- •Химические вещества:
- •Окраска структурных элементов микробной клетки
- •4.Для накопления чистой культуры
- •Способы создания условий:
- •Методы выделения чистых культур: Основанные на принципах механического разделения
- •Дыхание бактерий
- •Фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде.
- •Питание бактерий
- •Колонии:
- •4. Микроскопический метод проверки чистоты выделенной культуры :
- •1. Выявление сахаролитической активности
- •В составе микробиоты человека:
- •После рождения процесс колонизации толстого кишечника:
- •Положительная роль нормальной микрофлоры для организма
- •Эубиоз и дисбиоз.
- •Санитарная микробиология
- •Микрофлора воздуха. Санитарно-микробиологическое исследование воздуха.
- •Микрофлора воды.
- •Микробиологические показатели доброкачественности пищевых продуктов
Химические вещества:
Галогены (препараты йода и хлора).
Окислители (перекись водорода и др.).
Производные фенолов (резорцин и др.).
Красители (бриллиантовый зеленый, метиленовый синий и др.).
Соединения тяжелых металлов (серебра, ртути, цинка и др.).
Дезинфекция – это уничтожение в окружающей среде возбудителей инфекционных заболеваний. Гибнут только вегетирующие, загрязняющие обрабатываемые предметы.
Заключительная дезинфекция в очагах инфекционных заболеваний. Цель– обезвредить место после госпитализации больного, прервать пути передачи инфекции здоровым, уничтожить возбудителя везде, куда мог попасть во время пребывания больного на дому.
Текущая когда больной в очаге.
Профилактическая в больницах ежедневно.
Контроль бактериологический –бактериологические тесты (кишечной палочки, стафилококка, антракоида) в специальной упаковке, их в объекты, подвергают обработке, из тестов посев на стерильность.
Этапы приготовления мазков из нативного материала и выделенных бактериальных культур.
Простые и сложные методы окраски.
Простой способ - водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера.
Водный фуксин из фенолового фуксина Циля+ дист. вода 1:10.
РАСТВОР ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин - 1 г; спирт этиловый 96 % - 10 мл; фенол кристаллический - 5 г; глицерин - несколько капель; вода дист. - 100 мл.
Метиленовый синий Леффлера = 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дист. воды.
После окрашивания сливают, промывают и высушивают между листками фильтровальной бумаги. Наносят каплю масла и микроскопируют.
Тинкториальные св.= способность микробов воспринимать красители
По Леффлеру (3-5 мин) гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий темно-синие, а палочка - голубой цвет.
Сложные методы-два-три различных по цвету красителя= дифференцировать микробы и детали строения: окраска по Граму, Цилю-Нельсену, Нейссеру, Бурри-Гинсу, Романовскому-Гимзе.
По НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий в сине-черный, бактерия - в желтый.
Окрашивают 1 мин уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий - 0,1 г, спирт - 2 мл, ледяная уксусная кислота - 5 мл, дистиллированная вода - 100 мл); Сливают и промывают; На 20- 30 с раствор Люголя; 1 -3 мин окрашивают везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды).
По ГРАМУ=количественное содержание ПЕПТИДОГЛИКАНА.
Грам+=прочно удерживают комплекс краски генцианвиолета с йодом (раствор Люголя). Обработка бактерий спиртом вызывает разбухание муреина и уменьшает диаметр пор клеточной стенки, в результате кра- ситель оказывается как бы«запертым»и воздействие второго красителя не дает видимых результатов. много пептидогликана, в сине-фиолетовый.
Грам- = 5-20 % пептидогликана, поры до конца не смыкаются и спирт свободно проникает сквозь клеточную стенку и обесцвечивает бактерию. Они со- держат большое количество липидов, которые хорошо растворяются в спирте и способствуют обесцвечиванию микробных клеток, поэтому они окрашиваются в красный цвет в розовый.
Техника окраски:
1. Фиксированный мазок 1-2 мин окрашивают генцианвиолета (генцианвиолет - 1 г, этанол 96 % - 10 мл, фенол кристаллический - 2 г, вода дистиллированная - 100 мл; по методу Синева покрывают пропитанной красителем полоской фильтровальной бумаги, которую смачивают 2-3 каплями воды).
2. Слив генцианвиолет (сняв полоску бумаги Синева), мазок 1 мин обрабатывают раствором Люголя и, не промывая, сливают.
3. Обесцвечивают спиртом 0,5 мин, промывают.
4. Окрашивают 1-2 мин фуксином Пфейффера.
5. Ополаскивают водой и высушивают.
По методу ЦИЛЯ – НИЛЬСЕНА = выявление грам+ КИСЛОТО- И СПИРТОУСТОЙЧИВЫХ микобактерий туберкулеза и лепры.
Техника.
1. Фиксированный мазок покрывают полоской фильтровальной бумаги, наносят фуксин Циля, подогревают над пламенем горелки до паров, подливая краситель, бумагу снимают и промывают.
2. Препарат обесцвечивают 5 % серной кислоты и промывают.
3. Наливают водно-спиртовой раствор метиленового синего, спустя 3-5 мин промывают и высушивают.
Кислотоустойчивые окрашиваются в интенсивно красный, остальные, обесцвечивающиеся в процессе обработки кислотой, - в светло-синий.