5.5. Содержание днк в ядрах гепатоцитов

Для уточнения механизмов регенерации печени под влиянием ксенотрансплантации ККП было проведено количественное исследование содержания ДНК в ядрах ГЦ крыс основной и контрольной 1 групп на 2,4 сутки эксперимента. Результаты цитофотометрического исследования представлены в табл. 5.4.

Как видно из таблицы, ОТП привело к появлению ядер с разнообразным количеством ДНК. Относительное количество ядер с диплоидным набором ДНК у животных основной группы существенно (р=0,04) снижалось по сравнению с нормой, а в контрольной группе, напротив, несколько увеличивалось и значимо отличалось от показателя основной группы (р=0,002). К 4 суткам эксперимента количество ядер с диплоидным набором было минимальным у крыс основной группы (р=0,0001), а в контроле преобладало (р=0,002).

Таблица 5.4

Распределение ядер гепатоцитов по содержанию ДНК (%)

 

Плоидность ядер	Норма n=6	2 сутки		4 сутки
		ОГ (n=8)	КГ 1 (n=6)	ОГ (n=7)	КГ 1 (n=6)
Ди-плоидные 2с	44,4 42,5-46,3	40,1 38,5-41,7 p1=0.04 p3=0.002	48,7 46,2-51,2 p1=*	8,0 6,9-9,1 p1=0.0001 p2=0.0001 p3=0.0001	63,0 61,9-64,1 p1=0.002 p2=0.01
Тетра-плоидные 4с	50,0 47,2-52,8	33,5 31,8-35,2 p1=0.001 p3=*	38,4 33,6-43,2 p1=0.008	54,0 49,7-58,3 p1=0.04 p2=0.003 p3=0.001	31,0 24,0-38,0 p1=0.0001 p2=0.002
Окта- плоидные 8с	5,6 5,0-6,2	26,4 25,3-27,5 p1=0.0001 p3=0.002	12,9 11,7-14,1 p1=0.0001	38,0 37,4-38,6 p1=0.0001 p2=0.0001 p3=0.0001	6,0 3,8-8,2 p1=* p2=0.006

Примечания: значимость различий определена по критерию Манна-Уитни; * -различия незначимы (р>0,5); р1 – значимость различий показателей по сравнению с нормой; р2 - значимость различий показателей по сравнению с предыдущим в группе; р3 - значимость различий показателей в основной и контрольной группах.

В обеих исследованных группах было отмечено снижение количества тетраплоидных ядер на 2 сутки эксперимента (p<0,01), межгрупповые различия были незначимыми. К 4 суткам в основной группе отмечено существенное повышение удельного веса тетраплоидных ядер по сравнению с нормой (р=0,004), а в группе контроля этот показатель продолжал снижаться и был существенно ниже нормы (р=0,0001) и предыдущего значения (р=0,002).

Октаплоидные ядра встречались в одноядерных ГЦ основной группы на 2 сутки существенно чаще, чем в норме и в контроле (р=0,0001), между тем их количество в контрольной группе также было достоверно выше нормальных значений (р=0,001). К 4 суткам исследования удельный вес октаплоидных ядер продолжал нарастать в основной группе (р=0,0001 по сравнению со 2-ми сутками), а в контроле снижался до нормы и был существенно ниже, чем в основной группе (р=0,006).

Таким образом, при анализе содержания ДНК в ГЦ экспериментальных животных установлены 2 разнонаправленных процесса; при этом в основной группе происходит существенное нарастание октаплоидных ядер с одновременным снижением количества диплоидных и нормализацией уровня тетраплоидных ядер. В контроле отмечено закономерное повышение количества диплоидных ядер с уменьшением процентного соотношения тетра- и октаплоидных.

Резюме

В заключение главы уточним полученные результаты. Установлено, что ксеногенные эмбриональные ГЦ, пересаженные под кожу животного с индуцированной ОПН, частично выживают к 6 суткам после введения без развития перифокальной лейкоцитарной инфильтрации. Ксенотрансплантация ККП препятствует повышению массы печени, характерного для ОТП. При этом на светооптическом уровне определяется восстановление балочной структуры и предотвращение прогрессирующей жировой и гидропической дистрофии паренхимы печени. На протяжении четвертых-шестых суток эксперимента увеличивается количество неповрежденных ГЦ, а удельный вес вакуолизированных ГЦ снижается при стабильном (по сравнению с контролем) количестве непаренхиматозных фагоцитирующих клеток.

Ультраструктурные изменения ГЦ характеризуются нормализацией характеристик цитоплазмы и гранулярного ЭР, нарушение которых характерно для ОТП, а также явлениями повышенной активности ГЦ, что проявляется увеличением числа и объема митохондрий, размеров ядра.

При исследовании содержания ДНК в ядрах ГЦ обнаружено повышение митотической активности с одновременным увеличением количества клеток с октаплоидными ядрами.

Таким образом, саногенный механизм ксенотрансплантации криоконсервированной эмбриональной ККП включает в себя процессы протекции печени при ОТП и стимуляции регенераторной активности. К проявлениям защитных процессов можно отнести:

1. уменьшение отека органа;

2. сохранность балочной структуры;

1. уменьшение жировых включений;

1. преобладание неповрежденных гепатоцитов;

2. нормализацию объемной доли гранулярного ЭР;

3. нормализацию площади цитоплазмы.

Признаками стимуляции внутриклеточных регенераторных процессов в поврежденной печени являются:

1. увеличение количества митохондрий;

8) увеличение площади ядра;

9) увеличение количества ГЦ с октаплоидным набором ДНК.