Методические аспекты определения углеводов

Определение глюкозы – один из наиболее распространенных тестов КДЛ

(до 15% от общего числа исследований)

Энзиматические методы

Глюкозооксидазный метод

Достоинства:

можно проводить в любой биологической жидкости, на фотометре с термостатированием или на биохимическом анализаторе;

Антикоагулянты (гепарин, ЭДТА, оксалат натрия, цитрат), стабилизаторы (фторид и монойодацетат) практически не влияют на результат

Недостатки:

Перекись водорода, образующаяся в ходе реакции, окисляет не только хромоген, но и другие вещества, присутствующие в биологической жидкости – билирубин, аскорбиновую кислоту, мочевую кислоту

глюкозооксидаза Глюкоза + О2 Глюколактон + Н2О2

пероксидаза Н2О2 + восстановленный хромоген Н2О+ окисленный хромоген

Гексокиназный метод

Реакция регистрируется при 340 нм по образования НАДН (тест Варбурга)

Является референтным для определения глюкозы

Достоинства:

Метод высоко специфичен, не дает реакций с другими компонентами сыворотки крови

Гексокиназный метод

гексокиназа Глюкоза +АТФ Глюкозо-6-фосфат + АДФ

Гл-6-ф-ДГ Глюкозо-6-фосфат 6-фофоглюконат + НАДФН

C-пептид:

Содержание в сыворотке натощак – меньше 1,2 нмоль/л

После пероральной нагрузки глюкозой отмечается 5-6 кратное увеличение концентрации в крови

Величина молярного соотношения С-пептид/инсулин в крови равна 5:1 (в следствии большего периода полужизни С-пептида и медленного метаболизирования печенью)

C-пептид:

При инсулинозависимом сахарном диабете базальный уровень C-пептида, как правило, не определяется

При инсулинонезависимом сахарном диабете базальный уровень C-пептида нормальный или слегка повышен

Содержание C-пептида в суточной моче

У здоровых: ≥10 нмоль.

У больных инсулинозависимым сахарным диабетом:

<3 нмоль (обычно < 0,7 нмоль).

У больных инсулинонезависимым сахарным диабетом с относительным дефицитом инсулина:

<10 нмоль.

У больных инсулинонезависимым сахарным диабетом с ожирением и инсулинорезистентностью: ≥20 нмоль

Определение С-пептида:

1.Обеспечивает контроль за функционированием β-клеток и продукцией ими инсулина;

2.Позволяет оценить уровень эндогенного инсулина в присутствии экзогенно инсулина или при наличии к инсулину антител

Гликозилированный гемоглобин A

Для определения процента гликозилированного гемоглобина A эритроциты промывают физиологическим раствором, разрушают и исследуют выделенный гемоглобин путем высокоэффективной жидкостной хроматографии или электрофореза.

Поскольку в крови имеются эритроциты разного возраста, а срок их существования равен 120 сут, содержание гликозилированного гемоглобина A пропорционально среднему уровню глюкозы в крови за предшествующие 2—3 мес.

Для оценки эффективности контроля уровня глюкозы используют и другой показатель — содержание общего гликозилированного гемоглобина (общий гемоглобин A1 или гемоглобин A1a+b+c).