- •Методические рекомендации для студентов к практическому занятию
- •3. Цели занятия:
- •Режим работы в бактериологической лаборатории
- •2) При аварии без разбрызгивания пба:
- •3) При аварии, связанной с нарушением целостности кожных покровов:
- •Основные виды микроскопов
- •Дополнительные устройства к микроскопу
- •Приготовление и окраска микропрепаратов:
- •Способы фиксации мазков из микробов и смешанного материала
- •Существует два метода химической фиксации мазков:
- •Микроскопия препарата с иммерсионным объективом
Существует два метода химической фиксации мазков:
Предметное стекло с высушенным мазком погружают в банку с фиксатором, высушивают на воздухе и микроскопируют.
На горизонтально установленные предметные стекла с мазками наносят по капле фиксатор и дают высохнуть.
Время фиксации зависит от применяемых в качестве фиксаторов веществ.
Приложение 7
ОРИЕНТИРОВОЧНАЯ ОКРАСКА БАКТЕРИЙ ПРОСТЫМИ МЕТОДАМИ
Окраска выявляет морфологию и частично структуру клетки.
Для простой окраски используют только один краситель, чаще всего красного цвета – раствор фуксина (окраска 10 – 30 сек), фиолетового – генцианвиолет (окраска производится в течение 1 – 2 мин) или синего – метиленовый синий (окраска в течение 3 – 5 мин), далее препараты промывают водой и высушивают на воздухе.
При окраске мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, предложенной Синевым А.И. Для этого на высушенный и фиксированный препарат кладут красящую бумагу размером 2х4 см и наносят несколько капель воды. Продолжительность окрашивания мазка определяется методом окраски. По окончании окраски бумагу снимают пинцетом, мазок промывают водопроводной водой, высушивают на воздухе и микроскопируют.
Приложение 8
Микроскопия препарата с иммерсионным объективом
Иммерсионный объектив даёт увеличение х90 при условии отсутствия рассеивания потока лучей в связи с неоднородностью среды при их прохождении. В этой связи, во избежание такого дефекта применяется иммерсионное кедровое масло или его заменитель - вазелиновое масло. Процесс микроскопии с иммерсионным объективом х90 ведут с окулярами х7, х10, но чаще с первым из них.
Переносить микроскоп необходимо двумя руками: одной держать штатив, другой – основание микроскопа. Следует предохранять микроскоп от толчков, соприкосновения с сильнодействующими веществами типа кислот, щелочей.
Техника микроскопии состоит из нескольких этапов:
1. На готовый окрашенный мазок наносят каплю масла.
2. Под контролем глаза сбоку осторожно опускают тубус, погружая объектив в каплю масла. При неосторожном выполнении можно раздавить либо линзу объектива, либо предметное стекло.
3. После прикосновения объектива к маслу дальнейшее опускание тубуса ведётся с помощью микровинта микроскопа до появления микрообъектов в окуляре.
4. Просмотр препарата ведут только за счёт манипуляций с микровинтом и движения стекла.
5. После окончания микроскопии тубус поднимают, объектив выходит из капли масла.
6. Масло с объектива удаляют чистой марлей и протирают жирорастворителем - либо ксилолом, либо спиртом, либо хлороформом. Оставлять масло на линзе объектива нельзя.
7. Револьверную часть на тубусе устанавливают на объектив х8, конденсор и тубус опускают, переводя в нерабочее состояние, и закрывают микроскоп колпаком.