3.1.3. Культивирование вирусов

При изучении темы необходимо обратить внимание на то, что для репродукции вирусов нужна живая клетка, поэтому используют три основные модели: культуру клеток, организм чувствительных животных, ткани развивающихся эмбрионов птиц. Для успешного культивирования вирусов в лабораторных условиях необходимо освоить эти методы.

Культивирование вирусов в организме естественно-восприимчивых животных.

Данный метод имеет ограниченное применение; он используется в случаях, когда для изучаемого вируса нет биологической системы, на которой данный вирус успешно бы репродуцировался, минуя стадию адаптации, и когда есть заинтересованность сократить у выделенного вируса все исходные свойства (преимущественно патогенность и антигенные свойства).

Культивирование вирусов в организме лабораторных животных.

Многие виды лабораторных животных часто невосприимчивы в естественных условиях к определенному вирусу, однако при серийном пассировании и последующей адаптации он изменяет свои первоначальные свойства впроцессе репродукции в организме лабораторного животного. Этот метод до сих пор широко используется при диагностике и изучении ряда заболеванийживотных и человека, вызванных вирусами.

Однако надо иметь в виду, что пассирование ряда эпизоотических штаммов вирусов на лабораторных животных ведет к изменению исходных биологических свойств и в первую очередь к утрате исходной патогенности и иммуногенности для естественного хозяина. Кроме того, этот метод требуетзначительных материальных затрат и создания специальных условий для организации опытов и поддержания эпизоотической безопасности.

Культивирование вирусов в развивающихся эмбрионах птиц.

Использование эмбрионов птиц (главным образом куриных) для изоляции и культивирования вирусов - наиболее доступный и удобныйметод. В эмбрионах способны размножаться многие вирусы, а для некоторых эта система может быть единственной. Эта система содержит четыре субстрата (амнион, аллантоис, хорион-аллантоисная мембрана, желточный мешок), способные обеспечить репродукцию вирусов с различным тропизмом.

На размножение вирусов в эмбрионе оказывают влияние ряд факторов, из которых наиболее существенное значение имеют температура инкубации яиц, возраст эмбрионов, метод заражения, величина заражающей дозы вируса.

Для размножения большинства вирусов температура от+35до + 37⁰С является оптимальной.

Для культивирования вирусов используют эмбрионы в возрасте 8-13 дней. Эмбрионы более старшего возраста менее пригодны, так как они менее чувствительны к вирусам, что связано с большим содержанием в их жидкостях и тканях неспецифических ингибиторов, чем в более молодых эмбрионах.

Заражающая доза вируса оказывает существенное влияние на его размножение. Наиболее активное его накопление происходит при введении 1000 - 10000 ЭИД 50/мл.

Культивирование вирусов в культуре клеток.

Для выделения вирусов, их идентификации, накопления в качестве антигенов при изготовлении диагностикумов и противовирусных вакцин в вирусологических лабораториях и на биофабриках широко используют культуры клеток.

Культуры клеток применяются в исследованиях по генетике вирусов, при клонировании, получении ts - мутантов вирусов, селекции, контроле живых противовирусных вакцин, изучении проблемы вирус — клетка. Внедрение метода культур клеток в вирусологическую практику отодвинуло на задний план преимущественное использование лабораторных животных и эмбрионов птиц.

Культура тканей - понятие более широкое, включающее и понятие культура клеток, но главным образом отражающее методики культивирования переживающих тканей, т. е. не подвергнутых ферментативной обработке.

Наиболее широко распространено культивирование клеток в монослое, состоящее в том, что с помощью ферментативной обработке (раствором трипсина) выделяют живые клетки из свежих тканей (почечной, легочной,тестикулярной и др.), переносят их в специальные сосуды для культивирования в условиях подкормки этих клеток соответствующей питательной средой. Метод монослойной культуры позволяет выращивать клетки на стенках сосудов. Существует также метод культивирования разъединенных клеток всуспензии.

О наличии вирусных агентов в культуре клеток можно судить по цитопатическому действию, вызываемому этим или другим вирусом.

Вопросы для самоконтроля

1. Правила подбора естественно-восприимчивых и лабораторных животных для проведения биопробы.

1. Правила отбора, получения, транспортировки, хранения вируссодержащего материала.

1. Техника заражения, методы введения инфекционного материала.

2. Патологические изменения в тканях лабораторных животных под воздействием вирусного агента.

3. Условия инкубации яиц.

4. Методы заражения эмбрионов птиц.

5. Результаты воздействия вирусов на различные ткани эмбрионов птиц.

6. Условия для культивирования клеток, изолированных из организма.

9.Растворы и питательные среды для приготовления культуры клеток.

10.Виды монослойных культур клеток:

а) первично-трипсинизированные культуры клеток;

б) субкультуры;

в) перевиваемые культуры клеток;

г) диплоидные культуры клеток;

д) суспензионные перевиваемые клетки

11. Хранение культур клеток.

12. Цитопатическое действие вирусов на клетки, виды цитопатического действия.

12. Титрование вирусов в культуре клеток.

12. Выращивание вирусов в органных культурах.