14. Определение содержания кальция в сыворотке крови.

_{Нормальный уровень этого элемента в сыворотке (плазме) крови практически здоровых людей составляет 2,0.2,75 ммоль/л. У здоровых новорожденных нижний предел концентрации кальция равен 1,75 ммоль/л, у недоношенных детей – 1,25 ммоль/л.}

_{Повышение уровня кальция (гиперкальциемия) в сыворотке крови наблюдается при увеличении его поступления в кровь из резорбцируемой костной ткани или из пищи в условиях снижения почечного клиренса. Более 90% случаев гиперкальциемии обусловлено первичным гиперпаратиреозом и злокачественными новообразованиями.}

_{Снижение концентрации кальция (гипокальциемия) в сыворотке крови отмечается гораздо чаще, чем гиперкальциемия, и происходит по целому ряду причин, а именно:}

• _{гипопаратиреоз, развитие которого наблюдается при нарушении функций паращитовидных желез, например, в результате повреждения при операциях на щитовидной железе;}

• _{псевдогипопаратиреоз – наследуемая резистентность органов-мишеней к паратгормону;}

• _{нарушения всасывания или повышенного выведения кальция (синдром мальабсорбции);}

• _{дефицит витамина D;}

• _{тубулопатия (заболевания почек, сопровождающиеся нарушениями реабсорбции кальция в почечных канальцах);}

• _{острая и хроническая почечная недостаточность;}

• _{гипоальбуминемия;}

• _{острый алкалоз.}

_{Принцип метода. Использование флуорексона для комплексоно-метрического определения кальция основано на том, что его водные растворы в силыющелочной среде не флуоресцируют, по в этих же условиях флуорексон образует с кальцием флуоресцирующие комплексы. Комплекс индикатора с металлом менее прочен, чем комплекс металла с трилоном Б, поэтому по мере добавления последнего к раствору, содержащему металл и индикатор, происходит постоянный переход ионов металла к три-лону Б. При титровании трилоном Б в точке эквивалентности отмечается резкое «затухание» флуоресценции. 15. Определение активности каталазы крови по Л.И Баху и С.Р. Зубковой.}

_{Количественное определение активности каталазы крови методом А.Н. Баха и С.Р. Зубковой.}

_{Принцип метода. Метод основан на титровании избытка перекиси водорода, нерасщепленного каталазой, перманганатом калия в кислой среде.}

_{5Н2О2 + 2КМnО4 + 3Н2SО4 → 8Н2О + 5О2 + К2SО4 + 2MnSО4}

_{Активность каталазы выражается каталазным числом, которое представляет собой количество перекиси водорода в миллиграммах, разложенной 1 мл3 крови за 30 минут. Показателем каталазы называют соотношение каталазного числа к количеству миллионов эритроцитов в 1 мкл исследуемой крови.}

_{Ход работы. С помощью микропипетки берут кровь из пальца человека или хвоста/уха экспериментального животного и готовят гемолизат крови, разводя ее в 1000 раз в мерной колбе (0,1 мл в 100 мл дистиллированной воды).}

_{В 2 колбочки или широкие пробирки отмерить по 7 мл дистиллированной воды и по 2 мл 1% раствора пероксида водорода. В опытную колбу/пробирку прилить 1 мл разведенной в 1000 раз крови. Обе колбы/пробирки – опытную и контрольную – оставить на 30 минут при комнатной температуре. По истечении указанного времени в обе пробы добавить по 3 мл 10 % раствора серной кислоты, которая прекращает действие каталазы. Содержимое опытной и контрольной проб оттитровать 0,1 н раствором перманганата калия до слабо-розового цвета.}

_{Расчет. Допустим, что на титрование опытной пробы пошло 4,5 мл 0,1 н раствора КМnО4, а контрольной – 12,6 мл 0,1 н раствора КМnО4. 0,1 н раствора КМnО4 соответствует 1 мл 0,1 н Н2О2, а 1 мл Н2О2 соответствует 1,7 мг Н2О2. Следовательно, в данном случае каталазное число соответствует: (12,6 – 4,5) × 1,7 = 13,77 единиц.}

_{Показатели нормы. Каталазное число крови у людей колеблется в пределах от 11 до 20 единиц. В клинике чаще используется показатель каталазы, который в норме составляет 2-3×10-6.}

_{Клинико-диагностическое значение. Высокая активность каталазы наблюдается при пернициозной и макроцитарной анемии, а также при введении в организм кофеина, ацетоновых тел, алкоголя. Активность каталазы в крови снижается при ряде заболеваний: раке, анемии, туберкулезе и др}