Мед энзимология

Окончание таблицы 2

	Заболевание		Активность	Кратность пре-	Частота случа-
		Фермент		вышения нор-	ев повышения
	или состояние		фермента, Е/л
				мы	активности, %
		ГГТ	220	4,4	83
	Цирроз печени	ЩФ	945	3,5	100
		АсАТ	110	2,9	83
		АлАТ	36	0,9	33
		ГГТ	505	10,1	100
	Гранулема печени	ЩФ	1350	5,0	100
		АсАТ	57	1,5	100
		АлАТ	56	1,4	80
		ГГТ	500	10,0	100
	Острый панкреатит	ЩФ	1400	5,2	80
		АсАТ	57	1,5	80
		АлАТ	44	1,1	40
		ГГТ	30	0,6	–
	Здоровые подростки	ЩФ	890	3,3	100
		АсАТ	27	0,7	–
		АлАТ	12	0,3	–
		ГГТ	15	0,3	–
	Беременные женщины	ЩФ	430	1,6	100
	без патологий
		АсАТ	42	1,1	21
		АлАТ	12	0,3	–

Определение активности ГГТ основано на измерении скорости ферментативной реакции переноса гамма-глутамиловой группы с субстрата-донора на субстрат-акцептор. В первом методе определения активности фермента был использован его природный субстрат глутатион. Однако этот метод сложен в постановке, поэтому в клинической биохимии широкого распространения не получил. Современные лабораторные способы определения активности ГГТ основаны на применении синтетических хромогенных субстратов-доноров. Начиная с 1960-х годов в качестве такого субстрата большинство биохимических лабораторий использовало гамма-глутамил-р-нитроанилид, а в качестве субстрата-акцептора гамма-глутамиловой группы – глицилглицин. Данный колориметрический тест основан на следующей ферментативной реакции:

L-гамма-глутамил-р-нитроанилид + глицилглицин ¾¾¾ГГТ¾¾¾®

¾¾¾ГГТ¾¾¾® L-гамма-глутамилглицилглицин + р-нитроанилин

31

Активность ГГТ определяется по скорости расщепления хромогенного субстрата с образованием р-нитроанилина, интенсивность окраски которого (оптическая плотность при длине волны 405 нм) пропорциональна активности фермента в анализируемой пробе. Широкое применение данного метода на практике и в научных исследованиях позволило установить нормальные значения активности ГГТ в сыворотке крови пациентов различного возраста и пола, а также величин, соответствующих различным патологическим состояниям, на которые ориентируются и в настоящее время.

К недостаткам применения гамма-глутамил-р-нитроанилида в качестве хромогенного субстрата относится его низкая растворимость, затрудняющая приготовление его раствора с необходимой концентрацией, а также недостаточная стабильность рабочего раствора, в котором при хранении спонтанно образуется р-нитроанилин. Этих недостатков лишен широко применяемый в настоящее время для анализа ГГТ гамма-глутамил-3- карбокси-4-нитроанилид (ГГКНА). Этот субстрат с растворимостью в 50 раз выше, чем гамма-глутамил-р-нитроанилид, образует высокостабильные растворы. Кинетические константы ферментативной реакции для обоих субстратов сходны.

Международная федерация клинической химии (IFCC) рекомендует в качестве референтного метода определения активности ГГТ колориметрический кинетический метод с ГГКНА в концентрации, обеспечивающей максимальную скорость ферментативной реакции (6мМ). Однако для рутинного анализа в лабораториях чаще применяют модифицированный метод Зейца (Szasz), в котором концентрация с ГГКНА ниже (3–4 мМ). Результаты определения активности ГГТ, получаемые при этом, ниже (приблизительно на 7 %), чем по методу IFCC, однако они полностью совпадают со значениями активности фермента, определенными с применением в качестве субстрата гамма-глутамил-р-нитроанилида. Метод Szasz дает возможность использовать установленные ранее привычные нормы активности ГГТ и весь накопленный клинический опыт.

Глутаматдегидрогеназа

Глутаматдегидрогеназа (ГДГ; КФ 1.4.1.3) – фермент, катализирующий превращение глутамата в 2-оксоглутарат и аммиак. ГДГ в незначительных количествах обнаружен в нервной ткани, скелетных мышцах, миокарде и молочной железе, в наибольшем количестве содержится в клетках печени. Уровень активности ГДГ в норме 0–0,9 МЕ/л (Назаренко Г.И. и др., 2002). Фермент находится внутри митохондрий гепатоцитов, поэтому увеличение его активности отражает глубину цитолиза клеток; по степени ее повышения можно судить о тяжести патологического процесса. Увеличение активности фермента происходит при поражении печени различной этиологии и поражении желчевыводящих путей: острые гепатиты с

32

некрозом печени, рак печени, печеночная кома, острая интоксикация, механическая желтуха и т.п. При вирусном гепатите ГДГ повышается в первые сутки желтушного периода. Высокая активность ГДГ отмечается у больных первичным и метастатическим раком печени. При выраженном обострении цирроза печени подъем активности ГДГ бывает значительным, причем высокая активность фермента рассматривается как неблагоприятный признак. Алкогольная интоксикация сопровождается значительным увеличением активности ГДГ в крови.

Повышение активности ГДГ и ГГТ во многом сходно, но есть различия: высокая активность ГДГ наблюдается при острых повреждениях печени, а высокая ГГТ – при длительных патологических процессах в печени.

Одновременное исследование активности ГДГ и сорбитолдегидрогеназы (СДГ) позволяет рассчитать коэффициент СДГ/ГДГ. В первую неделю вирусного гепатита этот коэффициент обычно превышает 0,5, составляя в среднем 1,3. В первую неделю обтурационной желтухи он ниже 0,5.

Глутатионредуктаза

Глутатионредуктаза (ГР; КФ 1.6.4.2) – НАДФ-зависимый фермент, катализирующий превращение окисленной формы глутатиона в восстановленную. ГР присутствует практически во всех тканях, но наибольшее его содержание в почках, печени, сердце и эритроцитах. Повышение активности фермента наблюдается при гепатите, механической желтухе, сахарном диабете, при дефиците глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, серповидной и мегалобластной анемиях, после введения никотиновой кислоты, после физической нагрузки. Недостаток ГР отмечается при дефиците рибофлавина.

Глутатионпероксидаза

Глутатионпероксидаза (ГП, КФ 1.11.1.9) – один из ключевых ферментов антиоксидантной системы организма, функцией которого является разрушение и инактивация пероксидов водорода и гидропероксидов (пероксидных радикалов) – токсичных соединений кислорода. Содержится практически во всех тканях. В норме активность фермента в эритроцитах составляет 29,6–82,9 МЕ/г Hb (Назаренко Г.И. и др., 2002).

ГП клеток печени состоит из четырех субъединиц, каждая из которых содержит в активном центре атом селена. В клетках печени ГП локализована в цитозоле и матриксе митохондрий. Таким образом, Н2О2, образующаяся при работе пероксисомальных ферментов, удаляется содержащейся в пероксисомах каталазой, а Н2О2, образующаяся в митохондриях и эндоплазматическом ретикулуме, разрушается преимущественно под действием ГП. ГП обладает в 1000 раз бóльшим сродством к Н2О2 по сравнению с каталазой, поэтому ГП рассматривают в качестве антиоксидантного фермента, имеющего первостепенное значение в защите клетки от посто-

33

янно образуемого пероксида водорода. Наряду с этим, ГП способна восстанавливать гидропероксиды жирных кислот, пероксиды белкового и нуклеиновокислотного происхождения. Помимо селенсодержащей ГП в организме животных обнаружена ГП, не содержащая селена, которая имеет другие физико-химические и каталитические свойства. Активность селенсодержащей ГП напрямую зависит от уровня селена в организме. Снижение активности фермента при недостаточности селена зависит от уменьшения количества мРНК этого белка. Пероксид водорода и активные радикалы образуются в результате пероксидного окисления липидов (ПОЛ), которые приводят к дестабилизации клеточных мембран и, в тяжелых случаях, к их разрушению. Активация ПОЛ наблюдается при различных заболеваниях: ишемия органов и тканей, сахарный диабет, атеросклероз и мн. др. Определение ГП помогает оценить антиоксидантную способность организма при различных заболеваниях, а также у людей с повышенным риском селенового дефицита (в старческом возрасте, при плохом питании, курении, алкоголизме, стрессе, почечной недостаточности, химиотерапии и др.), рекомендовать назначение препаратов для антиоксидантной терапии и оценивать эффективность терапии.

Желательно использовать нормы значений активности фермента применительно к лабораториям, в которых производилось исследование. Увеличение активности наблюдается при: дефиците глюкозо-6- фосфатдегидрогеназы, остром лимфоцитарном лейкозе, талассемии. Уменьшение активности ГП сопровождает сердечно-сосудистые заболевания, атеросклероз, сахарный диабет, аутоиммунные заболевания (ревматоидный артрит), процессы старения организма, муковисцидоз. Снижение активности ГП выявляется у больных шизофренией и маниакальнодепрессивным психозом, где свободным радикалам отводится ведущая роль в патогенезе их развития.Уменьшение активности ГП значительно повышает риск возникновения раковых заболеваний. Низкая активность ГП и уровень селена могут быть причиной бесплодия. Мониторинг активности ГП через 1–5 лет позволяет эффективно проводить профилактическое лечение антиоксидантами.

Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г6ФДГ; КФ 1.1.1.49) – фермент,

участвующий в процессах окисления глюкозы. Наибольшее содержание фермента обнаружено в селезенке, лимфатических узлах, эритроцитах и молочной железе. Одним из основных поставщиков НАДФН для глутатионовой антиоксидантной системы является пентозофосфатный путь, ключевым ферментом которого является Г6ФДГ. В большом количестве находится в эритроцитах и используется, в основном, для выявления наследственных заболеваний, связанных с дефицитом фермента – наиболее распространенной наследственной гемолитической анемии, обусловленной

34

дефицитом активности Г6ФДГ эритроцитов. Эта наследственная патология встречается в определенных регионах и наиболее широко распространена в странах Средиземноморья, Индии, Африки, Средней Азии. Дефицит трудно выявить у гетерозигот женского пола и непосредственно вслед за гемолитическим эпизодом у лиц с Г6ФДГ-анемией. Гетерозигот с любыми вариантами дефицита Г6ФДГ часто трудно выявить другими методами, за исключением анализа родословной. В последнее время для диагностики вариантов Г6ФДГ вводится анализ ДНК.

В результате нарушений в строении молекулы фермента эритроциты становятся непрочными и разрушаются в кровеносном русле. Клинически дефицит Г6ФДГ может не проявляться вообще или проявляться гемолизом (разрушением эритроцитов) различной интенсивности. В одних случаях гемолиз появляется под влиянием некоторых пищевых продуктов или лекарственных препаратов (противомалярийные средства, сульфаниламиды, нитрофураны, противотуберкулезные препараты и др.), в других случаях хроницеский гемолиз наблюдается независимо от внешних факторов.

При массовых обследованиях используется качественный унифицированный метод — проба Бернштейна, которая в норме отрицательна. Норма – 3–11 % эритроцитов периферической крови содержат Г6ФДГ; 12,1 ± 2,09 МЕ/г Hb · 0,0645.

Изоцитратдегидрогеназа

Изоцитратдегидрогеназа (ИДГ; КФ 1.1.1.42) – фермент, имеющий

2 формы коферментной специфичности (НАД и НАДФ-зависимые) и катализирующий обратимое окисление изоцитрата до 2-оксоглутарата. НАДФ-зависимая форма присутствует во всех тканях, но наибольшая ее активность обнаружена в печени, скелетной мускулатуре, сердце. Повышение активности ИДГ является чувствительным показателем поражения паренхимы печени. Определяемая в сыворотке активность обусловлена цитоплазматическим НАДФ-зависимым печеночным ферментом. Это может наблюдаться при вирусных и токсических гепатитах, обтурационной желтухе, метастазах в печень и циррозе, гипоксии печени вследствие гемодинамических причин, поражении печени при бактериальных инфекциях, атрезии желчных протоков у новорожденных детей, инфекционном мононуклеозе. Также увеличение активности данного фермента может регистрироваться при тяжелом инфаркте легкого, миелолейкозе, мегалобластной анемии. Несмотря на то, что в миокарде содержится много активности ИДГ, при инфаркте миокарда не обнаруживается ее повышения, и значения в сыворотке находятся в пределах нормы; высвобождаемая активность митохондриальной ИДГ термолабильна и быстро выводится.

Нормальные величины значений активности фермента в сыворотке крови взрослых: 1,2–7,0 МЕ/л · 0,017 [0,02–0,12 мккат/л]; в крови из пупо-

35

вины: значения в 2 раза выше таковых для взрослых. Новорожденные: 4- кратное повышение по сравнению со значениями для взрослых; 2 нед.: снижение до верхних пределов значений для взрослых.

Каталаза

Каталаза (КФ 1.11.1.6; Н2О2:Н2О2 – оксидоредуктаза) – фермент, катализирующий реакцию разложения пероксида водорода на воду и молекулярный кислород: 2 Н2О2 = О2 + 2Н2О. Каталаза представляет собой гемопротеин, простетической группой которого является гем, содержащий ион трехвалентного железа. Молекула каталазы состоит из четырех, повидимому, идентичных субъединиц с молекулярной массой 60 кДа и имеет, соответственно, четыре простетические группы. Феррипротопорфириновые группы гема прочно связаны с белковой частью фермента – апоферментом и не отделяются от него при диализе. Оптимальная величина рН для каталазы находится в интервале значений 6,0–8,0. Каталаза широко распространена в тканях животных, в т.ч. человека, растений и в микроорганизмах (однако фермент полностью отсутствует у некоторых анаэробных микроорганизмов). В клетках каталаза локализуется в специальных органеллах — пероксисомах. Биологическая роль каталазы заключается в деградации пероксида водорода, образующейся в клетках в результате действия ряда флавопротеиновых оксидаз (ксантиноксидазы, глюкозооксидазы, моноаминоксидазы и др.), и обеспечении эффективной защиты клеточных структур от разрушения под действием пероксида водорода. Уровень активности каталазы в норме: 22,6 ± 0,52 мкат/л (Мамонтова Н.С.;

Патент РФ RU2050005).

Генетически обусловленная недостаточность каталазы является одной из причин так называемой акаталазии – наследственного заболевания, клинически проявляющегося изъязвлением слизистой оболочки носа и ротовой полости, иногда резко выраженными атрофическими изменениями альвеолярных перегородок и выпадением зубов. Активность каталазы в эритроцитах остается постоянной при ряде заболеваний, однако при злокачественной и других макроцитарных анемиях увеличивается так называемый каталазный индекс (отношение величины каталазной активности определенного объема крови к количеству эритроцитов в этом объеме), имеющий существенное диагностическое значение. При злокачественных новообразованиях отмечается уменьшение активности каталазы в печени и почках, причем существует зависимость между величиной опухоли, скоростью ее роста и степенью уменьшения активности каталазы. Из некоторых опухолей выделены вещества – токсогормоны, которые при введении экспериментальным животным вызывают у них снижение активности каталазы в печени.

Методы определения активности каталазы основаны на регистрации образующегося в процессе реакции О2 (манометрическим или полярогра-

36

фическим методами) или на измерении текущей (спектрофотометрическим) или остаточной (перманганатометрическим, йодометрическим и другими титриметрическими методами) концентрации пероксида водорода.

Креатинкиназа

Креатинкиназа или креатинфосфокиназа (КК; КФ 2.7.3.2.) катали-

зирует обратимую реакцию фосфорилирования креатинина с участием АТР в результате чего образуются креатинфосфат и ADP. КК является димером состоящим из двух субъединиц, каждая с молекулярной массой около 40 кДа. Субъединицы В (от brain – мозговая) и М (от muscle – мышечная) закодированы в разных генах. Фермент существует в виде трех изоферментов: КК-ВВ (КК-1) – мозговой, КК–МВ (КК-2) – сердечный и КК-ММ (КК-3) – мышечный. КК-ВВ присутствует в значительных количествах в мозге, простате, желудке, легких, мочевом пузыре, уретре, плаценте, щитовидной железе. КК-МВ в основном находится в сердечной мышце (25–46 % от общей активности КК кардиомиоцита) и в небольшом количестве в скелетных мышцах (менее 5 % общей активности). КК-ММ присутствует в основном в клетках скелетных и сердечной мыщц. Активность КК-ММ в сыворотке составляет 94–96 % от общей активности КК, КК-МВ – 4–6 %, КК-ВВ – следы или активность не определяется.

Все три изофермента обнаружены в цитозоле клеток или связаны с миофибриллами. Обнаружена и четвертая митохондриальная форма креатинкиназы (КК-Mt), которая отличается от других форм иммунологически, а также по электрофоретической подвижности. Она локализована между внутренней и наружной митохондриальной мембранами, в сердце составляет до 15 % общей КК активности.

Активная КК может присутствовать в сыворотке в виде 2 макромолекулярных комплексов: макро КК тип1 и тип 2. Тип 1 – это КК-ВВ, связанная с IgG, или КК-ММ, связанная с IgA; тип 2 – это олигомеры КК-Mt.

Нормальная активность КК (общая) может варьировать в зависимости от метода: 10–195 МЕ/ л (Назаренко Г.И. и др., 2002).

Норма для изоферментов сыворотки крови: КК-ВВ – 0 %; КК-МВ –

0–3 %; КК-ММ – 97–100 %.

Общая КК повышается при многих заболеваниях: травмы, операции, инфаркт миокарда, уменьшение кровоснабжения мышц, миопатии, дерматомиозит, мышечные дистрофии, миокардиты, отравления, сопровождающиеся комой, гипотериоз, инфекционные болезни (например, брюшной тиф). Иногда небольшое увеличение отмечается при артритах, застойной сердечной деятельности, тахикардии, эмболии легочной артерии.

Активность КК в сыворотке, как правило, имеет обратную зависимость с тиреоидной функцией щитовидной железы. Около 60 % больных гипотериозом имеют уровень КК выше нормы с превышением верхней границы в среднем в 5 раз. Основной изофермент при этом КК-ММ, хотя у

37

13 % больных повышена и КК-МВ, что свидетельствует о вовлеченности в патологический процесс не только скелетных, но и сердечной мышцы. В то же время у больных с гипертиреозом имеется тенденция к низким значениям активности КК в сыворотке.

При инфаркте миокарда регистрируемое повышение активности КК наблюдается уже в течение 3–6 ч после ангиозного приступа. Однако определение активности ранее 8 ч дает положительные результаты в 31 % случаев. Активность КК является достоверным тестом инфаркта миокарда, начиная с 8–10 ч после начала болевого приступа. Максимальный уровень ее достигается в течение 24 ч, и даже при обширном инфаркте активность КК может возвратиться к норме в течение последующих 48 ч. Относительное повышение активности КК при инфаркте миокарда выше, чем других ферментов. Наиболее информативно исследование активности КК в динамике – каждые 4–6 ч в течение суток.

Хотя активность КК при инфаркте миокарда является очень чувствительным тестом, однако, на него нельзя полагаться при однократном определении и отсутствии других показателей, т. к. повышение может быть вызвано и рядом других причин, отмеченных выше, а также употреблением алкоголя, интенсивной физической нагрузкой, состоянием щитовидной железы, отравлением снотворными средствами, введением некоторых лекарственных препаратов (клофитрат, карбеноксалон). Резкое повышение активности КК (более чем в 10 раз) возникает в 1–2-й день нарушения мозгового кровообращения, достигая максимума на 3-й день.

КК-ММ увеличивается в сыворотке при тех же состояниях, как и общая КК.

КК-МВ значительно увеличивается при инфаркте миокарда, определение изофермента имеет диагностическое значение, если общая активность фермента в сыворотке крови повышается более чем в 1,5 раза по сравнению с верхней границей нормы. Помимо инфаркта миокарда КК-МВ может незначительно возрастать при миокардитах, стенокардии, затяжной аритмии, шоке, тяжелых отравлениях.

КК-ВВ в сыворотке крови незначительно повышается при некоторых формах рака (легкого, кишечника, мочевого пузыря, предстательной железы), травме сердечной мышцы, заболеваниях соединительной ткани. При родах КК-ВВ может увеличиваться в сыворотке до 6 раз (источником являются матка и плацента). У новорожденных при родовой травме мозга активность КК-ВВ в сыворотке повышена.

Макро КК тип 1 обнаруживается в сыворотке взрослых при заболевании желудочно-кишечного тракта, аденоме, карциноме, повреждениях сердечной и скелетной мышц и в состоянии с высокой вероятностью летального исхода. Иногда макро КК тип 1 встречается у женщин старше 50 лет.

Макро КК тип 2 обнаруживается в сыворотке взрослых с тяжелой формой рака или болезни печени, а также у детей с поражением сердечной

38

мышцы. Появление КК-Mt – плохой прогностический признак, среди таких больных высока смертность.

Существует три общепризнанных методических подхода для разделения изоферментов КК: электрофорез, хроматографические и иммунологические методы.

Электрофоретическим методом (на агаре, агарозе или ацетате целлюлозы) можно разделить фракции КК. Визуализация электрофоретических полос изоферментов проводится, как правило, с использованием НАДФН флуоресценции в ультрафиолетовой области спектра (360 нм). Поэтому эта процедура достаточно трудоемкая и требует оснащения импортной техникой.

Ионообменной или абсорбционной хроматографией разделяют изоферменты КК на несколько фракций. Изоферменты КК как правило абсорбируются на геле, с которого затем элюируются буферами. Выпускаются специальные коммерческие миниколонки: метод простой и быстрый, основная трудность – разделение фракций при большом повышении количества КК-ММ в патологических случаях.

Иммунологические методы основаны на измерении активности КК в присутствии специфической антисыворотки, содержащей моноклональные или поликлональные антитела против М или В субъединиц. Коммерческие наборы, основанные на технике преципитации, позволяют выявлять ККМВ при существенном ее повышении с коэффициентом вариации 10–20 %, тем не менее, эти тесты выполняются быстро, как правило, не требуют специальной аппаратуры и могут использоваться индивидуально, что особенно удобно при экспресс-диагностике. Выпускаются коммерческие наборы для фотометрического определения КК-МВ, основанные на определении активности КК при ингибировании М-субъединицы. Нормы для процентного распределения активности изофермента КК-МВ в общей ККактивности в этом случае существенно отличаются от электрофоретического распределения.

Лактатдегидрогеназа

Лактатдегидрогеназа (ЛДГ; КФ 1.1.1.27) катализирует обратимое восстановление пирувата до лактата, в качестве кофермента используется НАДН. ЛДГ имеет молекулярную массу около 134 кДа, это тетрамер, состоящий из двух субъединиц – М (muscle – мышечная) и Н (heart – сердечная). В сыворотке присутствуют 5 изоферментов, различающиеся составом субъединиц. В порядке снижения их электорофоретической подвижности (движения по направлению к аноду) их обозначают как ЛДГ-1 (Н4), ЛДГ – 2 (Н3М), ЛДГ –3 (Н2М2), ЛДГ-4 (Н1М3), ЛДГ-5 (М4). Избыток как пирувата, так и лактата, используемых в качестве субстрата, подавляет активность фермента, при этом эффект пирувата выше. Норма (варьирует в разных методах): 240–480 МЕ/л (Назаренко Г.И. и др., 2002).

39

ЛДГ присутствует во всех клетках организма, это цитозольный фермент. В печени, сердце, почках, скелетной мышце и эритроцитах активность ЛДГ более чем в 500 раз выше, чем в сыворотке, поэтому повреждение любого из этих органов сопровождается увеличением ЛДГ в сыворотке. Повышение показателя имеет место при некрозе тканей, особенно при остром повреждении сердца, повреждении эритроцитов, почек, скелетных мышц, печени, легких и кожи. Значительное повышение сопровождает гемолитические анемии, связанные с дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты. Медленное повышение в течение 3–4 дней с последующим снижением за 5–7 дней может свидетельствовать об инфаркте миокарда (необходимо, однако, исключить инфаркт легкого, опухоль, мегабластную анемию). Повышение уровня ЛДГ характерно для острой фазы инфекционного гепатита, между тем при хронических заболеваниях печени активность фермента редко оказывается повышенной. Циррозы, обтурационные желтухи, различные заболевания почек и скелетных мышц, застойная сердечная недостаточность дают средние цифры активности. Незначительное повышение активности фермента отмечается при любых повреждениях клеток, сопровождающихся увеличением проницаемости мембран (инфаркт миокарда и легкого), при лейкозах, лимфомах, хронических гепатитах. Таким образом, общая активность ЛДГ в сыворотке крови не является специфическим тестом для определенной патологии. Поэтому необходимо разделять изоферменты ЛДГ и, затем, оценивать вклад каждого в общую активность, т.к. они органоспецифичны.

ЛДГ в моче может повышаться в 3–6 раз при хроническом гломерулонефрите, системной красной волчанке с поражением почек, диабетическом нефросклерозе, опухолях почек и мочевого пузыря. Однако определение ЛДГ в моче не практикуется из-за ингибирующего действия на фермент кислой среды, мочевины и некоторых короткоцепочечных пептидов мочи.

Нормальное соотношение изоферментов ЛДГ в сыворотке составля-

ет: ЛДГ1 – 15–30 %; ЛДГ2 – 22–50 %; ЛДГ3 – 15–30 %; ЛДГ4 – 0–15 %;

ЛДГ5 – 0–15 %. Количество изоферментов можно определить с помощью электрофоретических, иммунологических, кинетических методов или путем хроматографии. Наиболее распространен метод электрофореза на геле агарозы или на ацетатцеллюлозных пленках. Наибольшей разделяющей способностью и чувствительностью обладает метод ионообменной хроматографии, он используется в качестве референтного по отношению к электрофорезу. Предложен также метод иммунопреципитации с использованием антител против всех изоферментов, содержащих М субъединицу (ЛДГ2–ЛДГ5). В этом случае активность этих изоферментов не проявляется, остается активной только ЛДГ1. Результаты определения ЛДГ1 этим методом тесно коррелируют с результатами электрофореза и хроматографии, а диагностическая специфичность метода для инфаркта миокарда составляет 94 %. Другим сравнительно новым метом выявления активности

40