Gosudarstvennaya_farmakopeya_RB

мультиплетами. Это обусловлено присутствием постоянных магнитных полей,

вызванных соседними ядрами, особенно других протонов, расположенных в радиусе двух-пятивалентных связей. Интенсивность сигнала, который

определяется как площадь под соответствующей кривой, пропорциональна числу эквивалентных протонов.

Прибор. ЯМР-спектрометр для спектрометрии непрерывного действия состоит из магнита, генератора низкочастотного разрешения, держателя образца,

радиочастотных выпрямителей и приемника, регистрирующего устройства и электронного интегратора. Импульсный спектрометр снабжается кроме этого

импцульсным выпрямителем и компьютером для сбора, хранения и математического преобразования данных к спектру обычного вида.

Используются ЯМР-спектрометры, которые работают при частоте не менее 60 МГц для 1Н. Если отсутствуют специальные указания, руководствуются

инструкцией изготовителя. Прежде чем проводить регистрацию спектра, необходимо убедиться, что:

1.Разность равна не более 0,5 Гц; для этого измеряют при подходящем масштабе шкалы ширину пика на половине высоты; или полосу δ 7,33 ppm

симметричного мультиплета раствора 20% (об/об) дихлорбензола Р в

дейтерированном ацетоне Р; или полосы при δ 7,51 ppm раствора 5% (об/об) тетраметилсилана Р в дейтерированном хлороформе Р.

2.Отношение сигнал/шум (S/N), измеренное в диапозоне от δ 2 ppm до δ 5 ppm для спектра раствора 1% (об/об) этилбензола Р в дейтерированном хлороформе Р составляет как минимум 25:1. Эти отношения расчитываются как

среднее из пяти последовательных измерений по формуле:

NS = 2,5 HA ,

где:

А – амплитуда, в милиметрах, наибольшего из пиков метиленового квартета

этилбензола с центром при δ 2,65 ppm. Амплитуду измеряют от базовой линии, что образуется от центра области шума с какой-нибудь из сторон квартета на

расстоянии как минимум 1 ppm от этого центра;

Н – полная амплитуда шума базовой линии, в милиметрах, между δ 4 ppm и δ 5 ppm.

3. Амплитуда боковых полос, обусловленных вращением, не превышает 2% высоты пика образца при соответствующей данному пику спектрометра скорости вращения ампулы с образцом.

4. При проведении количественных измерений проверяют

воспроизводимость сигналов интегратора, используя раствор 5% (об/об)

этилбензола Р в дейтерированном хлороформе Р. Проводят пять измерений для

протонов этильных групп и расчитывают среднее значение. Ни один из измеренных результатов не должен отличаться от среднего более чем на 2,5%.

Методика. Испытуемый образец растворяют, как указано в частной статье, и фильтруют; раствор должен быть прозрачным. Для определения химического

сдвига используют внутренний стандарт. Если нет других указаний, в качестве внутреннего стандарта используют или раствор (от 0,5% (об/об) до 1,0% (об/об))

тетраметилсилана Р (ТМС) в тейтерированных органических растворителях, или раствор от 5 г/л до 10 г/л натрия тетрадейтеродиметилсилапентаноата Р в

дейтерия оксиде Р. Подбирают необходимое количество и проводят регистрацию спектра.

СПЕКТРОСКОПИЯ НЕПРЕРЫВНОГО ДЕЙСТВИЯ

Прибор настраивают к работе настолько близко к модели чистого поглощения, насколько это возможно, используя также радиочастотную настройку, что позволяет избежать насыщения сигналов. Чувствительность спектрометра

регулируют таким образом, чтобы наибольший из пиков в спектре испытуемого

вещества занимал практически всю шкалу регистрирующего приспособления и чтобы сигнал внутреннего стандарта соответствовал химическому сдвигу δ 0,00 ppm. Регистрируют спектр в указанной области при разрешающей скорости не

более 2 Гц/с, если нет других указаний в частной статье. Снимают интегральный спектр в той же области при подходящей разрешающей скорости в зависимости от используемого спектрометра. Количественные измерения проводятся так, как указано в частной статье.

ИМПУЛЬСНАЯ СПЕКТРОМЕТРИЯ

Параметры спектрометра, например, угол вращения, амплитуда импульса, интервал между импульсами, спектральная ширина, число экспериментальных точек и скорость поступления данных в компьютер, определяются соответственно инструкцией изготовителя прибора, и регистрируется спад свободной индукции

необходимое число раз. После математической компьютерной обработки данных регулятор фазы устанавливают таким образом, чтобы получить при возможности

чистый спектр поглощения, и калибруют спектр по отношению резонансной к чистоте химического сдвига внутреннего стандарта. Спектр, сохраняемый в компьютере, выводят на подходящее приспособление и в случае количественных измерений обсчитывают интеграл с учетом возможностей прибора.

2.2.34. ТЕРМОГРАВИМЕТРИЯ

Термический анализ объединяет группу методов, при помощи которых определяется зависимость различных физических свойств веществ от

температуры. Обычно в большинстве используемых методов определяют

изменение энергии или массы испытуемого образца.

#Характерной особенностью термических методов анализа является их

универсальность. Инструментальные методы термического анализа дают информацию о кристаллической структуре, температуре кипения, способности к

сублимации, дегидратации, твердофазном взаимодействии. Эта информация может быть использована для идентификации, определения чистоты, влажности и

стабильности веществ, количественного определения термонестойких веществ, выявления присутствия полиморфных форм, для характеристики совместимости

субстанций и вспомогательных веществ в лекарственных средствах, выбора упаковки и контроля качества.

#Различают термогравиметрию, термометрическое титрование, дифференциальный термический анализ, дифференциальную отраженную

колориметрию, дериватографию, термомикроскопию.

#Термические методы анализа, как правило, не требуют больших количеств веществ, непродолжительны по времени выполнения. В частности, определение потери в массе при высушивании методом термогравиметрии включают в

частные статьи на дорогие субстанции. В частных статьях следует указывать

параметры, необходимые для корректного выполнения методики, например: скорость и температуру нагревания, инертный газ и скорость его потока.

Термогравиметрия представляет собой метод, при помощи которого регистрируют изменение массы испытуемого образца от программированного изменения температуры.

Прибор. Основными составляющими частями прибора являются: приспособление для нагревания или охлаждения вещества соответственно заданной температурной программы, камера для образца с контролируемой атмосферой, электровесы и регистрирующее устройство. К прибору может быть присоединено приспособление для анализа летучих веществ.

Проверка температурной шкалы. Проверку температурной шкалы проводят в соответвии с инструкцией изготовителя с использованием никеля или другого подходящего материала.

Градуировка весов. Подходящее количество ФСО кальция оксалата

моногидрата помещают в контейнер и регистрируют его массу. Начинают нагревание образца по программированному изменению температуры соответственно инструкции изготовителя. Термогравиметрическую кривую регистрируют в виде графика: показания температуры откладывается по оси абсцис по возрастанию значений слева направо; показания массы откладывается по оси ординат по возрастанию значений снизу вверх. При температуре около 230оС повышение температуры приостанавливают. На графике измеряют расстояние между начальным и конечным плато, что соответствует изменению массы образца.

Полученную величину сопоставляют с величиной, указанной в маркировке кальция

оксалат моногидрат ФСО.

Методика. Изменение массы испытуемого образца определяют в условиях, указанных в частной статье. Потерю в массе испытуемого образца определяют измеряя расстояние между начальным и конечным плато на гравиметрической

кривой и выражают в процентах (м/м).

При регулярном использовании прибора периодически проводят градуировку

ипроверку температурной шкалы.

2.2.35.ОСМОЛЯЛЬНОСТЬ

Осмоляльность — это показатель, позволяющий оценить суммарный вклад

различных растворенных веществ в осмотическое давление раствора. Приближенный расчет осмоляльности ξm водного раствора проводят по формуле:

ξm = ϑmФ

где:

ϑ— суммарное число ионов, образующихся из одной молекулы растворенного вещества в результате диссоциации. В случае, если растворенное вещество не диссоциирует на ионы, ϑ = 1;

т — моляльность раствора, т.е. число молей растворенного вещества на килограмм растворителя;

Ф — моляльный осмотический коэффициент, учитывающий взаимодействие между ионами противоположного знака в растворе и зависящий от величины т. По мере усложнения состава раствора усложняется и определение величины Ф.

Единицей осмоляльности является осмоль на килограмм растворителя (осмоль/кг), но на практике обычно используется единица милллиосмоль на килограмм растворителя (мосмоль/кг).

Осмоляльность определяют по понижению температуры замерзания раствора, если нет других указаний в частной статье. Зависимость между осмоляльностью и понижением температуры замерзания ΔТ выражают соотношением:

ξm = 1D,86T ×100мосмоль/ кг

Прибор. Составными частями прибора (осмометра) являются:

—приспособление для охлаждения сосуда с измерительной кюветой;

—система для измерения температуры, состоящая из чувствительного к

температуре сопротивления (термистора) с соответствующим устройством для

измерения тока или разности потенциалов. Измерительное устройство может быть градуировано в градусах понижения температуры или непосредственно в единицах осмоляльности;

—как правило, приспособление для перемешивания образца.

Методика. Готовят стандартные растворы в соответствии с таблицей 2.2.35.-

1.

					Таблица 22.2.35.-1.
	Стандартные растворы для калибровки осмометра
Масса натрия		Фактическая	Теоретическая	Моляльный		Криоскопическое
хлорида Р, в		осмоляльность	осмоляльность	осмотический		понижение
граммах на		(мосмоль/кг)	идеального	коэффициент		температуры
килограмм воды Р			раствора			(°С)
			(мосмоль/кг)
3,087		100	105,67	0,9463		0,186
6,260		200	214,20	0,9337		0,372
9,463		300	323,83	0,9264		0,558
12,684		400	434,07	0,9215		0,744
15,916		500	544,66	0,9180		0,930
19,147		600	655,24	0,9157		1,116
22,380		700	765,86	0,9140		1,302

Устанавливают нулевое значение на шкале прибора, используя воду Р.

Проводят градуировку прибора, используя стандартные растворы: помещают от 50 мкл до 250 мкл стандартного раствора в измерительную ячейку и начинают охлаждение системы. Чтобы предотвратить переохлаждение, измерительное устройство, как правило, программируют на работу при температурах более низких, чем ожидаемое криоскопическое понижение температуры.

Соответствующее устройство указывает на достижение равновесия. Перед каждым измерением ячейку ополаскивают соответствующим стандартным раствором.

Те же операции проводят с испытуемым раствором. При этом перед каждым измерением кювету ополаскивают испытуемым раствором. Результаты либо непосредственно определяют по шкале прибора, либо рассчитывают по измеренному понижению температуры замерзания. Результаты считают достоверными, если полученное значение осмоляльности испытуемого раствора не выходит за пределы значений осмоляльности двух стандартных растворов, использованных для калибровки.

#Наряду с понятием «осмоляльность» в практике используется понятие «осмолярность». Аналогично осмоляльности осмолярность - показатель, позволяющий оценить суммарный вклад различных растворенных веществ в осмотическое давление раствора.

#Данные показатели близки и отличаются друг от друга только различным способом выражения концентрации растворов — моляльной и

молярной.

#Осмоляльность — количество осмолей на 1 кг растворителя;

#Осмолярность — количество осмолей на 1 л раствора.

Для идеальных растворов масса осмоля, в граммах, представляет собой отношение грамм-молекулярной массы вещества к числу частиц или ионов, образующихся при его растворении.

#Для разбавленных растворов, близких к идеальным, осмоляльность и

осмолярность могут быть рассчитаны теоретически.

#Осмолярность идеальных растворов может быть рассчитана по формуле:

Осмолярность = концентрация вещества × количество частиц ,

молекулярная масса

где:

концентрация вещества - количество растворенного вещества на литр раствора, в граммах;

количество частиц — число частиц или ионов, образующихся при растворении одной молекулы вещества.

# Единицей осмолярности является осмоль на литр раствора (осмоль/л), но на

практике обычно используется единица миллиосмоль на литр раствора (мосмоль/л).

# При повышении концентрации раствора взаимодействие между частицами вещества возрастает и фактическая осмолярность понижается по сравнению с осмолярностью идеального раствора. Теоретический расчет

осмолярности растворов веществ с большой молекулярной массой (например, белковых гидролизатов) и высококонцентрированных растворов невозможен. В таких случаях определяют осмоляльность экспериментальным путем по

понижению температуры замерзания раствора или по понижению давления пара над раствором. Понижение температуры замерзания на 1.86°С и понижение

давления пара на 0.3 мм рт.ст. при температуре 25°С соответствует 1 осмолю на килограмм воды.

#Растворы, равные по осмоляльности (осмолярности) 0.9 % раствору натрия хлорида, называют изотоничными.

#Наряду с прибором, описанным выше, для определения осмоляльности могут использоваться также осмометры, основанные на измерении давления пара над раствором. Они требуют малого объема вводимой пробы (около 5 мкл), при этом точность и правильность определения сравнима с величинами, получаемыми на приборах, основанных на измерении температуры замерзания.

#В осмометрах, основанных на измерении понижения температуры замерзания, объем вводимой пробы образца можно варьировать.

#Указание значения осмоляльности (осмолярности) в маркировке препаратов. Значение осмоляльности (осмолярности) необходимо указывать на этикетках инфузионных растворов.

2.2.36.ПОТЕНЦИОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ ИОНОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИОНСЕЛЕКТИВНЫХ ЭЛЕКТРОДОВ

Теоретически потенциал Е ионселективного электрода изменяется линейно

от логарифма активности ai данного иона, что выражается уравнением Нернста:

	Е = Ео + 2,303	RT	log ai ,
		zi F

где:

Ео – стандартный электродный потенциал используемого электрода;

R – универсальная газовая постоянная;

Т – абсолютная температура; F – число Фарадея;

zi – величина заряда иона с обозначением его знака.

При постоянной ионной силе выполняется уравнение:

Е = Ео + k log fCi , zi

где:

Сi – молярная концентрация иона;

f – коэффициент активности (ai = fCi);

k = RTF

если:

Eo +	k	log f = Eo`	и	S =	k	,
	zi				zi

где:

S – наклон калибровочной кривой электрода (наклон электродной функции),

в таком случае выполняется уравнение:

E = Eo` + S logCi и для − log Ci = pCi : E = Eo` − SpCi

Потенциомтрическое определение концентрации иона проводят путем измерения разницы потенциалов между двумя подходящими электродами, погруженными в испытуемый раствор; индикаторный электрод является селективным по отношению к анализируемому иону, другой является электродом сравнения.

Прибор. Используют вольтметр, позволяющий выполнять измерения с

точностью 0,1 милливольта, с входным сопротивлением в 100 раз превышающим сопротивление используемых электродов.

Ионселективные электроды – преимущественно электроды с

кристаллической или некристаллической мембраной или с твердой основой

(например, стеклянные электроды) или электроды с заряженными (положительно или отрицательно) или с незаряженными подвижными носителями или с сенсибилизированными электроды (субстрат-энзимные электроды, газиндикаторные электроды). Электродом сравнения обычно являются хлорсеребряный или каломельный электрод с подходящими соединяющими жидкостями, исключающими их перемешивание.

Методика. Измерения проводят при постоянной температуре с точностью +0,5оС, обеспечивая изменение наклона электродной функции электрода от температуры (см. Табл.2.2.36-1).

	Таблица 2.2.36.1.
Значения k при разных температурах
Температура (оС)	k
20	0,0582

25	0,0592
30	0,0602

Ионную силу и, если необходимо, рН испытуемого раствора регулируют,

используя буферные растворы, указанные в частной статье; электрод погружают в испытуемый раствор, который свободно перемешивается с постоянной скоростью и добиваются постоянства потенциала.

Если электродная система используется часто, то регулярно проверяют воспроизводимость и стабильность сигнала, линейность калибровочной кривой или расчетного алгоритма в пределах концентраций испытуемого раствора; если нет, то проводят проверку перед каждой серией измерений.

Показания электрода можно считать линейными, если наклон S калибровочной кривой приблизительно равен k/zi на единицу pCi.

МЕТОД I (МЕТОД ПРЯМОЙ ГРАДУИРОВКИ)

Измеряют последовательно не менее трех раз потенциалы не менее трех

растворов сравнения предположительно близких концентраций к испытуемому раствору. Рассчитывают и затем строят градуировочный график в координатах: среднее значение потенциала Е – соответствующее ему значение концентрации анализируемого иона, выраженное как: -log Ci или pCi.

Приготавливают испытуемый раствор, как указано в частной статье;

измеряют потенциал три раза и по среднему значению потенциала рассчитывают концентрацию анализируемого иона, используя градуировочный график.

МЕТОД II (МЕТОД МНОГОРАЗОВЫХ СТАНДАРТНЫХ ДОБАВОК)

Приготавливают испытуемый раствор, как указано в частной статье. Измеряют равновесный потенциал ЕТ в объеме VТ этого раствора с неизвестной концентрацией СТ анализируемого иона. Не менеее трех раз последовательно к объему VТ испытуемого раствора прибавляют объем VS раствора сравнения, незначительный в сравнении с VТ (VS ≤ 0,01 VТ), с концентрацией СS, значения которой находятся в пределах линейной части градуировочного графика. После каждого прибавления измеряют потенциал и рассчитывают разницу потенциалов ∆Е между измеряемым потенциалом и ЕТ. ∆Е связано с концентрацией анализируемого иона уравнением:

		CSVS			E		CSVS
	E = S log(1+		)	или 10	S	= 1+		,
		CT VT					CT VT

VT – объем испытуемого раствора;

CT – концентрация анализируемого иона в испытуемом растворе;

VS – объем прибавляемого раствора сравнения;

CS – концентрация анализируемого иона в растворе сравнения;

S– наклон электродной функции, установленный экспериментально при

постоянной температуре путем измерения разницы потенциалов, полученной из двух растворов сравнения, концентрации которых отличаются в 10 раз и

рассчитаны в пределах области градуировочного графика.

E

Строят график 10 S (ось y) относительно VS (ось – х) и экстраполируют

полученную линию до пересечения с осью – х. В точке пересечения концентрацию CT анализируемого иона в испытуемом растворе рассчитывают по уравнению:

CT = CSVS , VT

при этом величина VS соответсвует точке пересечения экстраполированной прямой с осью х.

МЕТОД III (МЕТОД ОДНОЙ СТАНДАРТНОЙ ДОБАВКИ)

К объему VТ испытуемого раствора, приготовленного, как указано в частной

статье, прибавляют объем VS раствора сравнения, вмещающего такое количество анализируемого иона, чтобы сигнал находился в линейной части калибровочного графика. Параллельно в тех же условиях готовят контрольный раствор. Потенциалы испытуемого раствора и контрольного раствора измеряют не менее трех раз перед прибавлением и после прибавления раствора сравнения. Рассчитывают концентрацию CT анализируемого иона, используя уравнение с учетом необходимости коррегирования для контрольного раствора:

CT =		CSVS				,
		E
10		S (V	+ V	S	) −V
		T			T

где:

VT – объем испытуемого раствора или контрольного раствора;

CT – концентрация анализируемого иона в испытуемом растворе;

VS – объем прибавляемого раствора сравнения;

CS – концентрация анализируемого иона в растворе сравнения;

∆Е –среднее значение разницы потенциалов, измеренных до и после прибавления

объема VS ;

S – наклон электродной функции, установлен экспериментально при постоянной

температуре путем измерения разницы потенциалов, полученной из двух растворов сравнения, концентрации которых отличаются в 10 раз и рассчитаны в пределах области калибровочной кривой.

2.2.37. РЕНТГЕНОФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ СПЕКТРОМЕТРИЯ

Рентгенофлуоресцентная спектрометрия с волновой дисперсией – это метод

анализа, в	котором измеряют интенсивность флуоресцентного излучения,
испускаемого	элементом, имеющим атомный номер от 11 до 92, возбуждаемого
непрерывным	первичным	рентгеновским	излучением.	Интенсивность

флуоресценции элемента зависит от его концентрации в образце, а также от поглощения матрицей возбуждающего и испускаемого излучения. При следовых количествах определяемого вещества, в области линейности градуировочного

графика, измеренная при определённой длине волны интенсивность

флуоресценции элемента, находящегося в матрице определённого состава, прямо пропорциональна концентрации данного элемента и обратно пропорциональна

массовому коэффициенту ослабления (поглощения) матрицы при этой длине волны.

Методика. Настройку и использование прибора проводят в соответствии с инструкциями производителя. Жидкие образцы помещают непосредственно в прибор; твёрдые образцы предварительно прессуют в таблетки (гранулы), иногда после смешивания с подходящим связывающим материалом.

Для определения концентрации элемента в образце измеряют скорость счёта для нескольких стандартных образцов, содержащих известные количества данного

элемента в матрицах определённого состава, и рассчитывают или измеряют массовый коэффициент ослабления матрицы анализируемого образца.

Градуировка. С помощью градуировочного раствора или серии растворов, содержащих разные концентрации определяемого элемента в различных матрицах,

определяют угловой коэффициент градуировочного графика b0 по уравнению:

	b		1	=	ICN
		0 μM			C

μм – рассчитанный или измеренный массовый коэффициент ослабления матрицы

M,

ICN – скорость счёта,

C – концентрация определяемого элемента в стандартном образце.

Массовый коэффициент ослабления матрицы образца. Если эмпирическая

формула анализируемого образца известна, его массовый коэффициент

ослабления рассчитывают исходя из справочных значений массовых коэффициентов ослабления составляющих элементов. Если элементный состав

образца неизвестен, измеряют интенсивность рассеянного рентгеновского

излучения IU (Комптоновское рассеяние) и рассчитывают величину массового коэффициента ослабления матрицы образца по уравнению:

μ1 = a + bIU

MP

μMP – массовый коэффициент ослабления образца,

IU – рассеянное рентгеновское излучение.

Определение скорости счёта для определяемого элемента в образце.

Рассчитывают скорость счёта I EPN для определяемого элемента по измеренным

интенсивностям флуоресцентной линии и фоновой линии (линий).

Расчёт содержания следов. Если концентрация элемента входит в область

линейности градуировочного графика, её можно рассчитать по уравнению