Активность АлАт и АсАт при некоторых заболеваниях

Фер-мент	Заболевание
	Инфаркт миокарда	Стено- кардия	Мио-кардит	Острый гепатит	Хрони-ческий гепатит	Цирроз печени	Обтураци-онная желтуха
АсАТ	++	±	±	+	±	±	+ или ±
АлАТ	±	±	+	++	±	±	+ или ±
+ - норма ± - активность фермента повышена ++ - активность фермента сильно повышена

Лабораторная работа 11. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови и моче

Мочевина – основной конечный продукт азотистого катаболизма в организме млекопитающих. Содержание ее в плазме крови – важный показатель состояния печени, где она образуется при обезвреживании аммиака, и почек, регулирующих ее поступление в мочу (при этом некоторая часть ее может реабсорбироваться). Кроме того, концентрация мочевины отражает соотношение между азотистым катаболизмом и анаболизмом в организме. Определение содержания мочевины широко используется в диагностических целях.

Принцип метода: Мочевина образует с диацетилмонооксимом при наличии тиосемикарбазида и солей Fе в кислой среде комплекс красного цвета.

Материалы и реактивы:

1) Рабочий раствор: содержимое 1 ампулы с реактивом № 1 (раствор диаце­тилмонооксима и солей железа) и 1 ампулы с реактивом № 2 (раствор тиосеми­карбазида) количественно перенести в мерную колбу на 100 мл, довести до метки дистиллированной водой, перемешать, хранить при 0—+5°С.

2) Эталон мочевины – 16,65 мМ

3) Раствор трихлоруксусной кислоты 5%

4) Раствор серной кислоты 15%

Ход работы: работу проводят согласно таблице.

	Опытная проба	Эталон	Холостая
Сыворотка или развед. моча	0,01	–	–
Эталон мочевины (раствор)	–	0,01	–
Дист.вода	–	–	0,01
Рабочий раствор	2,0	2,0	2,0
Оптическая плотность (Е)			–

В химическую пробирку отмерить 1 мл рабочего раствора и прибавить 1 мл 15% раствора серной кислоты. К полученной смеси прибавить 0,01 мл сыворотки крови или разведенной (в 50 или 100 раз) мочи, перемешать.

Пробирку закрыть алюминиевой фольгой и поставить в кипящую воду на 10 мин. Охладить пробирку и измерить на ФЭКе оптическую плотность пробы (Еопыт) и эталона (Еэталон) против холостой пробы.

РАСЧЕТ концентрации мочевины в опытной пробе

С_опыт= С_эталон Е_опыт/Е_эталон (ммоль/л),

где С_эталон – концентрация мочевины в эталоне (равная 16,65 мМ

В норме содержание мочевины в крови составляет 200-500 г/л или 3,33-8,32 мМ.

Расчет мочевины в суточной моче:

Сг/сутки=Сопыт,

где А – суточное количество мочи, мл

В – количество мочи, взятое для анализа, мл

К – коэффициент разведения мочи

1000 – коэффициент перевода величины экскреции мочевины из мг в г

Клинико-диагностическое значение.

Отклонения от нормального содержания мочевины зависит от скорости процессов синтеза мочевины и её выведения. Содержание мочевины в сыворотке крови и моче может изменяться вследствие поражения некоторых органов, главным образом печени и почек. Повышенное содержание мочевины в сыворотке крови – уремию – наблюдают при заболеваниях почек. При этом содержание мочевины в моче уменьшается. Уремию наблюдают также при патологиях, которые сопровождаются интенсивным распадом белка (горячка, сепсис, туберкулёз, ожоги, перитониты). Содержание мочевины в моче при этом возрастает.

Кроме того, возрастание уровня мочевины в сыворотке крови может происходить в случае потери жидкости (рвота, диарея, обезвоживание).

Нарушение мочевинообразующей функции печени вследствие цирроза, острого жирового гепатоза, отравления фосфором, мышьяком и другими ядами приводит к уменьшению синтеза мочевины, снижению содержания её в крови и уменьшением выведения её с мочой. В этих случаях увеличивается выделение с мочой и других азотсодержащих веществ: аминокислот, креатинина, аммиака и т.д.

Содержание мочевины в биологических жидкостях зависят также от характера питания: при употреблении богатой белками пищи содержание мочевины в сыворотке крови и моче увеличивается, в случае безбелковой диеты – уменьшается.

Уровень мочевины в биологических жидкостях может изменяться под действием некоторых препаратов. Увеличивается содержание мочевины в крови при приёме анаболических стероидов, а также под действием нефротоксичных лекарственных препаратов.

Контрольные вопросы по теме ”Метаболизм аминокислот. Энзимопатии аминокислотного обмена”:

1. Пул свободных аминокислот в организме: пути поступления и использование свободных аминокислот в тканях.

2. Трансаминирование аминокислот: реакции и их биохимическое значение, механизмы действия аминотрансфераз.

3. Прямое и косвенное дезаминирование свободных L-аминокислот в тканях.

4. Декарбоксилирование L-аминокислот в организме человека. Физиологическое значение образовавшихся продуктов. Окисление биогенных аминов.

5. Пути образования и обезвреживания аммиака в организме.

6. Биосинтез мочевины: последовательность ферментных реакций биосинтеза, генетические аномалии ферментов цикла мочевины.

7. Общие пути метаболизма углеродных скелетов аминокислот в организме человека. Глюкогенные и кетогенные аминокислоты.

8. Биосинтез и биологическая роль креатина и креатинфосфата. Креатинин.

9. Глутатион: строение, биосинтез и биологические функции глутатиона.

10. Специализированные пути метаболизма циклических аминокислот – фенилаланина и тирозина.

11. Наследственные энзимопатии обмена циклических аминокислот – фенилаланина и тирозина.

12. Обмен циклической аминокислоты триптофана и его наследственные энзимопатии.

МОДУЛЬ 3. МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ. БИОХИМИЯ МЕЖКЛЕТОЧНЫХ КОММУНИКАЦИЙ