Гуморальные факторы и методы их определения

Наряду с клеточными реакциями неспецифической резистентности в процессе эволюции возник ряд веществ, находящихся в коллоидно-растворимом состоянии или же выделяющихся в жидкие среды организма. Эти вещества осуществляют функцию первичной защиты от чужеродных антигенных и неантигенных частиц.

Количество этих гуморальных факторов значительно. К числу более активных, или наилучшим образом изученных, следует отнести нормальные антитела, лизоцим, комплемент, пропердин, лейкины, -лизины и др.

Нормальные антитела

В сыворотке людей и животных выявляются нормальные антитела против различных микробных антигенов. Они обладают агглютинирующим, комплементсвязывающим, литическим, нейтрализующим влиянием на микробные антигены. Вопрос о природе так называемых неспецифических иммуноглобулинов сыворотки до сих пор не решен. Между тем сыворотка крови может содержать иммуноглобулины даже по отношению к антигенам, о которых заведомо известно, что они никогда не поступали в данный организм. Такие антитела получили название естественных или «нормальных». Они обычно определяются в низких титрах, однако их иммунологическая роль довольно выражена, особенно по отношению к инфекционным агентам.

Считается, что нормальные антитела появляются в результате так называемой неприметной иммунизации возбудителями или антигенами, поступающими с пищей, однако нельзя отрицать и спонтанный (генетически обусловленный) механизм их образования.

Реакции антител по отношению к антигенам, о которых заведомо известно, что они не проникали в данный организм, могут расцениваться и как перекрестные, отсюда и их более низкие титры. Нормальные антитела могут поступать трансплацентарно или с молоком матери. Их титр определяется серологическими реакциями (РНГА, РСК и др.) и обычно равен. 1:5 — 1:20.

-лизины

Многие сыворотки проявляют бактерицидное действие по отношению к грамположительным, главным образом, спорообразующим бактериям и микрококкам. Эта активность не связана с комплементом и сохраняется после прогревания сыворотки при 60—65 °С в течение 30 мин. Характерно, что -лизины обнаруживаются в сыворотке после образования свернутого сгустка цельной крови и не обнаруживаются в плазме. Считается, что-лизины выделяются в процессе свертывания крови тромбоцитами.

Бактерицидное действие -лизинов, по-видимому, обусловлено их влиянием на цитоплазматическую мембрану, в результате чего наступает аутолиз клеточной стенки ферментами цитоплазматической мембраны.-лизины активны только в присутствии ионов Са⁺⁺.

Для определения -лизинов в нормальной сыворотке человека необходима спорообразующая культура сенной палочки. 'Готовят микробную взвесь, добавляют к 0,4 мл взвеси 0,2 мл исследуемой сыворотки. В контроле к 0,4 мл взвеси добавляют 0,2 мл физиологического раствора. Замеряют оптическую плотность опытной и контрольной пробирок, помещают в термостат при 37 °С на 2 часа. Вновь замеряют оптическую плотность. Расчет активности-лизинов проводят по формуле:

где Д₁и Д₂– оптическая плотность в опыте до и после инкубации.

Для определения титра -лизинов готовят разведения исследуемой сыворотки в мясо-пептонном бульоне. Затем во все пробирки добавляют взвесь суточной культуры сенной палочки, инкубируют в термостате 24 часа. Определяют титр-лизинов – наибольшее разведение сыворотки, давшее полный лизис тест-культуры.