Часть 2. Плацебо контролируемое клиническое исследование эффективности биоревитализации с использованием препарата на основе гиалуроновой кислоты Glytone 1

Филлеры линейки Glytone 1 (2, 3 и 4) являются препаратами на основе стабилизированной гиалуроновой кислоты. Их с полным основанием относят к группе «филлеров с терапевтическим действием», поскольку в исследованиях, проведенных в Лаборатории Пьер Фабр, подтвержден терапевтический потенциал как стабилизированной ГК в составе филлеров, так и высокомолекулярной нестабилизированной ГК [14, 15].

Изучение биологической активности нестабилизированной гиалуроновой кислоты с молекулярной массой 1,2 млн Да было проведено в условиях in vitro на модели дермальных фибробластов. После добавления к культуре гиалуроновой кислоты (1 и 10 мкг/мл) клетки подвергали стрессовому воздействию с использованием перекиси водорода, имитируя процесс стресс-индуцированного ускоренного старения. Контролем служили культуры без добавления ГК.

Через 72 часа после добавления перекиси оценивали морфологию клеток, уровень синтеза коллагена (количественное определение) и экспрессию матриксных металлопротеиназ (иммунофлуоресцентный анализ) по сравнению с исходным уровнем и контрольной культурой.

По данным флуоресцентной микроскопии, при добавлении ГК к культуре фибробластов пролиферация клеток продолжается даже после добавления перекиси водорода, тогда как в культуре без ГК (контроль) многие клетки гибнут.

После добавления перекиси водорода синтез коллагена фибробластами уменьшался на 18% по сравнению с исходным уровнем, однако в культуре с добавлением ГК он уменьшался незначительно. Уровень ММР-1 под действием перекиси водорода возрастал в 2,6 раз; при добавлении ГК уровень ММР-1 оказывался на 80–92% ниже, что практически соответствовало исходным показателям.

По результатам проведенного эксперимента был сделан вывод о том, что высокомолекулярная гиалуроновая кислота с сохраненной нативной структурой способна обеспечить профилактику ускоренного старения кожи и поддержать синтез коллагена даже в условиях окислительного стресса, регулируя процессы образования и деградации белка.

Препарат Glytone 1 не является филлером, он предназначен для проведения биоревитализации. В его состав входит нестабилизированная ГК с молекулярной массой 3,8 млн Да в концентрациии 14 мг/мл, маннитол 34 мг/мл, глицерин 3 мг/мл и фосфатный буфер.

При планировании исследовательской работы ставилась задача доказать эффективность не метода биоревитализации, а именно конкретного препарата, в связи с чем и было проведено одноцентровое рандомизированное слепое плацебо контролируемое клиническое исследование в формате сплит-фэйс. Исследование проходило на базе клиники Pole Recherche, Exploration et Development Clinique (Франция).

Организация исследования

В исследование были включены 60 женщин в возрасте 30–65 лет (средний возраст 52,4 года), с кожей I-III фототипов по Фитцпатрику. Закончили исследование 53 женщины.

Критерий включения — наличие признаков инволюционных изменений кожи (показания к планируемой терапии), которые оценивали по стадиям:

• стадия 1 — кожа с признаками незначительной сухости, только динамические морщины, начальные стадии снижения эластичности (тест щипка), желтоватый цвет, незначительная потеря блеска; 

• стадия 2 — выраженная сухость кожи, статические морщины, в том числе тонкие (морщинистость), вялость кожи (тест щипка), желтизна и тусклость. 

Все участницы имели отрицательный тест на беременность, женщины репродуктивного возраста использовали эффективную контрацепцию, женщины старшей возрастной группы должны были подтвердить состояние менопаузы. 

Критерии исключения:

• беременность, лактация; 

• объективно неподтвержденная менопауза; 

• воспалительные, инфекционные (в том числе вирусные) процессы на коже, сосудистые мальформации в местах предполагаемых инъекций; 

• гиперчувствительность к ГК, маннитолу, глицерину, фосфату натрия (компоненты препарата Glytone 1); 

• аллергия к компонентам следующих препаратов: Anesderm (лидокаин, прилокаин), Septeal (хлоргексидина биглюконат), Glytonе Suncare cream (солнцезащитный крем), Glytonе Post Op (противовоспалительный ранозаживляющий крем, восстанавливающий барьерные свойства кожи);  

• аутоиммунные заболевания (волчанка, склеродермия и др.); 

• аллергические заболевания, обострение которых может быть спровоцировано мезотерапией; 

• склонность к формированию гипертрофических рубцов; 

• гранулематозные процессы (включая саркоидоз); 

• подострый бактериальный эндокардит. 

 

Для обеспечения безопасности процедур мезотерапии требовалось: 

• исключение терапии антикоагулянтами, антиагрегантами, иммуносупрессорами с начала исследования и в течение 10 дней после завершения курса процедур; 

• исключение приема венотоников, аспирина, НПВС (оральные, инъекционные и другие формы для общей терапии) в течение 48 часов до и после каждой процедуры (снижение риска отека и кровоизлияний); 

• на протяжении всего периода исследований исключалось системное или мест ное использование стероидных противовоспалительных препаратов, ретиноидов для пероральной терапии. 

В исследование не включались пациенты, которым проводились оперативные вмешательства (фэйс-лифтинг), аблативная лазерная шлифовка кожи, химический пилинг, ботулинотерапия, инъекции филлеров, биоревитализация на протяжении 12 месяцев до исследования и которые планировали прибегнуть к таким процедурам во время исследования. Всем участницам исследования проводили 3 сеанса инъекций препарата Glytone 1 на одной половине лица и такого же объема физиологического раствора на другой половине лица. Стороны лица, на которых вводился тот или иной препарат определялись методом случайной выборки. Пациенты, мнение которых учитывалось при анализе результатов терапии, не знали, на какой половине лица какой препарат вводился, таким образом нивелировались индивидуальные особенности ответа на инъекцию. Данное исследование можно считать рандомизированным, контролируемым и слепым.

Инъекции проводили с использованием игл 30G 13 мм. Зоны инъекций: средняя и нижняя трети лица, за исключением области носа, губ и кожи вокруг них. Техника инъекций — интрадермальные микропапулы с введением 0,02 мл препарата на вкол иглы. Игла вводилась перпендикулярно поверхности кожи на глубину 2 мм, расстояние между вколами — около 1 см.

Инструментальную диагностику проводили до курса терапии (Т0) и через месяц после 3 процедур (Т1). Для изучения отдаленных последствий терапии аналогичные исследования назначались через 3 месяца после завершения терапии (Т2). 

На сроках Т0, Т1 и Т2 проводились следующие исследования:

• биомеханические свойства кожи («мягкость», эластичность) оценивалась методом кутометрии (аналог клинического метода щипка); 

• анализировался микрорельеф (шероховатость) кожи (метод силиконовых слепков) в  области проекции скуловой дуги; 

• определялась толщина кожи (дермы) в области скуловой дуги с помощью УЗ-сканиро вания; 

• измерялся уровень рН кожи области щек. 

Одновременно проводили анализ цифровых фотографий пациентов, выполненных в стандартных условиях. Качество кожи оценивали независимые эксперты слепым методом. В качестве показателей использовались 4 критерия: гладкость, блеск, рельеф и цвет. Главный критерий — отражательная способность (блеск) кожи. Участницы исследования оценивали изменение клинической картины в процентах к исходному уровню.

На протяжении курса лечения и всего периода наблюдений отслеживали и описывали нежелательные явления и осложнения. Переносимость инъекций участницы исследования оценивали по 4-балльной шкале: 

• 1 балл — очень хорошая переносимость, без какого-либо дискомфорта; 

• 2 балла — хорошая переносимость, временный дискомфорт; 

• 3 балла — умеренная переносимость, более выраженный дискомфорт, который, однако, не становится причиной прекращения терапии; 

• 4 балла — плохая переносимость, объективные признаки, свидетельствующие о необходимости прервать терапию.

В целом продолжительность исследования составила 235 дней (почти 8 месяцев). Дизайн исследования представлен на рис. 3.