podgotovka_k_pervomu_prakticheskomu_voprosy_10-35

Простые				Сложные (основные)
Метод		Цель		Метод			Цель
			Окраска	по	Граму	Определение		типа
			(основной метод окраски			строения клеточной
			в бактериологии)			стенки
			Окраска	по	Цилю-	Выявление:
			Нильсену			-	кислотоустойчивых
Окраска						бактерий
						(микобактерий)
метиленовым синим
						- спор
			Окраска по Нейссеру			Выявление включений
						волютина и
	Изучение:					идентификация по их
						наличию
		формы
						коринебактерий
	бактерий
			Окраска	по	Бурри-	Выявление капсул
		их
			Гинсу
	расположения в
			Окраска по Морозову			Выявление:
	мазке
							жгутиков
							трепонем
							вирусов
Окраска водным							натуральной	и
фуксином							ветряной оспы
			Окраска по			Выявление хламидий
			Здрадовскому
			Окраска по			Выявление:
			Романовскому-Гимзе				риккетсий
							спирохет
							простейших

Окраска по Граму (механизм)

			Результат
Этап	Продолжительность	Грамположительные		Грамотрицательные
Генциановый	1 – 2 минуты	Синие		Синие
фиолетовый
Раствор Люголя	1 – 2 минуты	Синие		Синие
Этиловый спирт с
последующим	½ минуты	Синие		Бесцветные
промыванием
водой
Водный фуксин	1 – 2 минуты	Синие		Красные

Грамхарактеристика основных форм бактерий

Шарообразные формы бактерий - кокки грамположительны (Гр+), за исключением гонококка, менингококка и катарального микрококка.

Цилиндрические формы: спорообразующие палочки - бациллы и клостридии – Гр+.

Неспорообразующие (собственно бактерии) – грамотрицательны (Гр-), за исключением актиномицетной линии бактерий. В последнюю входят: коринебактерии, в т. ч. возбудитель дифтерии; микобактерии – возбудители туберкулёза, микобактериозов и актиномикоза.

Актиномикотическая друза окрашивается по Граму смешанно: аморфный центр - Гр+, периферия

-Гр-.

Извитые формы: вибрионы, спириллы, спирохеты – Гр-.

Риккетсии, хламидии - Гр-.

Микроорганизмы с дефектами или не имеющие КС–Гр-.

11

21. Морфология и ультраструктура спирохет. Методы микроскопии.

Систематическое положение спирохет.

Царство. Prokaryotae Отдел. Gracilicutes Порядок. Spirochaetales

Семейство 1. Spirochaetaceae Роды.1.Treponema

2.Borrelia

Семейство 2.Leptospiraceae Род. 3.Leptospira

Род		Treponema	Leptospira	Borrelia
Особенности		8 – 12 завитков	Первичные завитки	Амплитуда и
морфологии		одинаковой	практически не видны,	количество завитков
		амплитуды	а вторичные крупные	не постоянны (от 3 до
			и образуют на концах	20)
			«крючья», направлены
			в одну или в разные
			стороны
Особенности		В периплазматическом пространстве клеточной стенки вдоль всего тела
ультраструктуры		бактерий проходит осевая нить (аксиальная нить или фибрилла),
		состоящая – аналогично жгутику – из сократительного белка флагеллина
		и служащая органом движения. Поэтому спирохеты двигаются благодаря
		сокращению всего тела
Окраска	по
Романовскому-		Розовые	Красные	Синие
Гимзе
Преимущественно
используемый для				Любой вид
обнаружения	вид	Темнопольная микроскопия		микроскопии
микроскопии

Методы выявления спирохет.

- Спирохеты плохо воспринимают красители. Обычно их окрашивают по методу Романовского-Гимзе или серебрением по Морозову, а также применяют негативное окрашивание по методу Бурри; в живом виде их исследуют с помощью фазовокотрастной и темнопольной микроскопии.

Метод Романовского-Гимзе. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура растворенных в смеси метанола с глицерином. Базофильная зернистость окрашивается в синий цвет, эозинофильная - в красный, а нейтрофильная - в сиреневый цвет.

Техника окраски.

1.Приготовить микроскопический препарат и обработать его в жидком фиксаторе.

2.Поместить фиксированный препарат на два стеклянных валика в чашку Петри вниз ко дну и подливают разведенный в 10-20 раз свежеприготовленный краситель. Окрашивание длится от 30-60 минут до нескольких часов.

3.Мазки промывают водой и высушивают на воздухе.

22. Актиномицеты. Систематическое положение. Роль в природе. Идентификация.

Систематическое положение актиномицетов.

Царство. Prokaryotae

12

Отдел. Firmicutes Порядок. Actinomycetales Семейство. Actinomycetaсeae

Роды. 1. Actinomyces

2.Nocardia

3.Streptomyces

Актиномицеты - это бактерии, сходные с мицеллярными грибами. С бактериями у них общее строение клетки, с грибами - форма клетки и размножение. Большинство актиномицетов обитают в почве и составляют 20-60% общей микробной популяции. Патогенные представители - Actinomyces israelii, Actinomyces naeslundii вызывают актиномикоз. Стрептомицеты продуцируют антибиотики.

Методы выявления:

1.По Грамму (грамположительны). В пораженных тканях они образуют актиномикотическую друзу, которая представляет собой агрегаты переплетенного мицелия в центре с отдельными, отходящими наподобие лучей гифами с колбовидным утолщением на концах - по периферии. При окраске по Граму центр окрашивается позитивно, а поверхность негативно.

2.Микроскопические препараты из актиномицетов можно окрасить по методу Романовского-Гимзе и

по Цилю–Нельсену (некоторые актиномицеты кислотоустойчивы).

3. Актиномицеты хорошо воспринимают анилиновые красители, например, метиленовый синий.

Морфология: представляют собой слабоветвящиеся (актиномицеты) палочки или сильноветвящиеся гифы (стрептомицеты). Стрептомицеты образуют экзоспоры. Пептидогликан содержит сахара, отсутствующие у других прокариот.

23. Морфология, классификация и способы обнаружения грибов.

Грибы - это эукариотные организмы. Клеточная стенка мощная, состоит из гликана, целлюлозы, хитина, белка, липидов и др. Способ питания гетеротрофный. Одноклеточные или представители ветвящихся многоклеточных форм. Микро- и макроскопических размеров. Размножение вегетативное, половое и бесполое (участками мицелия, спорами, почкованием, слиянием половых клеток-гамет). Для большинства грибов характерны наличие грибницы или мицелия. Среди них встречаются как сапрофиты, так и паразиты. Свободноживущие грибы обитают в воде, почве и воздухе. Симбиотические представители сожительствуют с водорослями (лишайники) и растениями (микоризы). Взаимоотношение грибов с организмом человека рассматривается на уровне комменсализма и паразитизма. Например, Candida albicans постоянно или временно обитают на слизистых оболочках, коже и в кишечнике человека.

Таксономия и классификация.

Царство. Fungi (Mycota)

Отдел. Eumycota (настоящие грибы)

Классы. 1. Chytridiomycetes

2.Hyphochytridiomycetes (один патогенный возбудитель взывает микозы)

3.Oomycetes (один патогенный возбудитель взывает микозы)

4.Zygomycetes (род Мycor, вызывают мукороз)

5.Ascomycetes (сумчатые грибы, дрожжи)

6.Basidiomycetes (вызывают криптококкоз, разноцветный лишай; шляпочные грибы, большинство съедобных грибов)

7.Deuteromycetes (многие паразиты животных, растений и человека; роды Candida, Aspergillius,

Penicillius)

Грибы состоят из длинных тонких нитей-гифов, которые образуют мицелий. Низшие грибы имеют гифы без перегородок (представители классов1-4). Гифы высших грибов разделены на перегородки, которые образуют многоклеточный мицелий (представители классов 5-7). Совершенные грибы размножаются половым и бесполым путем (классы 4, 5, 6). Несовершенные грибы имеют только бесполый путь размножения (классы 1, 2, 3, 7). Бесполое размножение осуществляется почкованием или фрагментацией. Грибы, существующие, преимущественно с помощью почкующихся клеток, называются дрожжевыми (класс 5) и дрожжеподобными (класс 7). Также, бесполое размножение осуществляется с

13

помощью эндогенных спор (у низших грибов), которые созревают в головке-спорангии, и экзогенных спор - конидий.

Микроскопические исследования грибов.

1.Окраска простыми методами: водным фуксином или метиленовым-синим.

2.Окраска мазков по Граму.

3.Приготовление препарата "раздавленная капля" из участка мицелия с плодоносящими гифами для изучения при световой микроскопии на малом и большом увеличении.

4.Для обнаружения гранул гликогена в клетке дрожжей. При приготовлении препарата "раздавленная капля" под покровное стекло вводят раствор Люголя. Гликоген окрашивается в красно-бурый цвет.

5.При микроскопии патогенных грибов, исследуемый материал помещают на предметное стекло в каплю 10-20% щелочи или спирта с глицерином и накрывают покровным стеклом. Исследуют через 20 минут.

24. Риккетсии. Таксономия патогенных риккетсий. Особенности размножения. Способы выявления.

Риккетсии

Риккетсии – это прокариоты, наделенные чертами сходства с вирусами. С вирусами их роднит:

1)абсолютный внутриклеточный паразитизм;

2)невозможность культивирования на искусственных питательных средах.

Таксономия риккетсий

Царство: Procaryota Отдел: Gracilicutes Порядок: Rickettsiales Семейство: Rickettsiaceae Триба: Rickettsiaе

Род: Rickettsia; Orientia; Bartonella; Сoxiella

Способы культивирования риккетсий

В организме морских свинок или белых мышей.

В организме насекомых: вшей, клещей, блох и других членистоногих.

В желточном мешке развивающегося куриного эмбриона.

На переживающих тканевых или клеточных культурах.

Способы обнаружения риккетсий

Окраска по Романовскому-Гимзе. У сине-фиолетовых риккетсий цитоплазма голубая, а хроматиновые зёрна красные.

Окраска по Здродовскому – рубиново-красные на голубом фоне цитоплазмы клетки хозяина.

Окраска по Граму – грамотрицательны.

Располагаются внутриклеточно (цитоплазма, ядро)!

25. Хламидии. Таксономия патогенных риккетсий. Особенности морфологии и развития. Способы выявления.

Таксономия хламидий

Царство: Procaryota Отдел: Gracilicutes Порядок: Chlamydiales Семейство: Chlamydiaceae

Род: Chlamydia, Chlamydophila

Отличие хламидий от истинных прокариот

Мелкие размеры элементарных телец (внеклеточных форм) – 0,3-0,6-1,5 мкм.

Облигатный внутриклеточный паразитизм. Хламидии не имеют систем мобилизации энергии, используют АТФ клетки хозяина.

Непрокариотный цикл размножения.

Стадия	Функция
Элементарное тельце	Инфекционная (проникновения в клетку-хозяина	путем обратного
	пиноцитоза)
Ретикулярное (инициальное) тельце	Репродуктивная (размножение бинарным делением → формирование
	цитоплазматического включения – микроколонии)
Промежуточное тельце	Переходная форма от ретикулярного тельца вновь	к элементарному
	тельцу

14

Методы обнаружения хламидий

Окраска по Романовскому-Гимзе. Используется для определения хламидий на начальных и конечных этапах цикла. Они выглядят пурпурными на фоне голубой цитоплазмы клетки.

Обработка мечеными флюорохромами сыворотками – метод РИФ.

Обнаружение внутриклеточных включений в виде приядерных шапочек цитологическими методами: Туревича, Муромцева и др.

Окраска по Граму - грамотрицательны (на практике не используется).

26, 27. L-трансформанты. Характеристика. L-формы бактерий. Морфология, биологические свойства.

Под действием различных факторов - L-трансформантов (факторы, индуцирующие L-трансформацию) клеточная стенка может разрушаться. При полном ее разрушении образуются протопласты, сферопласты или L-формы. В отличие от протопластов, L-формы способны размножаться. Они бывают стабильные, то есть, не способны восстанавливать клеточную стенку, и нестабильные - восстанавливающие в исходную форму. Если клеточная стенка растворяется частично, то образуется сферопласт, если полностью - протопласт.

Исключительное значение L-трансформации патогенных бактерий заключается в том, что она является частой причиной перехода острых форм заболеваний в хронические формы и их обострений.

Факторы, индуцирующие L-трансформацию:

-антибиотики, угнетающие синтез клеточной стенки (пенициллин, цефалоспорин); -ферменты (лизоцим, амидаза); -антитела; -рентгеновские ультрафиолетовые лучи;

-высокие концентрации аминокислот (глицин, фенилаланин). Различают несколько морфологических вариантов L-форм бактерий:

1)крупные сферические тела (1-50мкм);

2)элементарные тельца, или гранулы (0, 6-0, 7 мкм);

3)бесструктурные массы, не имеющие постоянную форму и размера;

4)нитевидные структуры, варьирующие в размерах (до 150 мкм);

5)фильтрующиеся формы.

L-формы размножаются бинарным делением, утрачивают мезосомы, содержание аминокислот снижено, количество липидов увеличено. L-формы полностью или частично лишены клеточной стенки. Вследствие этого, слабо или вовсе не агглютинируются специфическими сыворотками, не лизируются специфическими бактериофагами.

Способы идентификации.

1.Непрямой способ - основан на способности L-форм к восстановлению (реверсии) родительских признаков. Реверсия происходит при исключении из среды фактора индукции или под воздействием мутагенов – УФ - лучей, акридина оранжевого. Морфология культур - ревертантов восстанавливается постепенно после многократных пересевов на обычных питательных средах.

2.Прямой способ – основан на идентификации вида L-форм путем определения специфических антигенов серологическими реакциями, дифференциации белков электрофорезом в агаровом геле и установлении гомологии ДНК у L-вариантов и их бактериальных форм.

28. Микоплазмы. Таксономия. Особенности строения и размножения. Методы обнаружения.

Микоплазмы – это прокариоты, не имеющие клеточной стенки. Размеры -125-800 нм. Полиморфны: сферические, эллипсоидные, нитевидные и др.

В цитоплазматической мембране высокое содержание холестеролов. Неподвижны. Спор и капсул не

15

образуют. По типу дыхания факультативные анаэробы. Встречаются также анаэробы и аэробы. Особенности размножения: от элементарной частицы отшнуровывается нить, которая фрагментируется. Возможно деление и почкование.

				Нет клеточной стенки → нет определенной
	Принципиальные отличия от			формы
				В ЦПМ содержатся стерины
	других прокариот
				Очень сильно отличаются по структуре ДНК
			Отдел	Tenericutes
			Класс		Mollicutes
	Классификация		Порядок		Mycoplasmatales
			Семейство		Mycoplasmataceae
			Род		Mycoplasma
					Ureaplasma

Методы выявления.

1.Бактериологический метод: это наименьшие микроорганизмы, которые могут расти на сложных по составу искусственных питательных средах, необходимым компонентом которых является холестерол. Вырастают микроскопические колонии с характерным углублением в центре (яичница-глазунья).

2.Молекулярно-биологический метод: (ПЦР).

3.Экспресс-диагностика: для выявления антигена в исследуемом материале используют РИФ, ИФА.

29. Метаболизм бактерий. Транспорт питательных веществ. Типы питания.

Микробный метаболизм представляет собой совокупность ферментативных реакций, направленных на получение энергии и синтеза макромолекулярных компонентов клетки. Он состоит из двух взаимосвязанных процессов:

1)энергетический метаболизм, или катаболизм, направленный на получение энергии;

2)конструктивный метаболизм, или анаболизм, обеспечивающий синтез различных органических и неорганических соединений.

Метаболизм обеспечивает:

-	рост и размножение;
-	отложение резервного пищевого материала;
-	транспорт питательных веществ в микробную клетку;
-	выделение продуктов метаболизма (токсинов, ферментов, антибиотиков и др. БАВ);
-	движение;
-	спорообразование;
-	адгезию на чувствительных рецепторах клетки хозяина и проникновение в них;
-	различных адаптивных реакций на изменение внешней среды и др. функции.

Механизмы проникновения питательных веществ в клетку

Простая диффузия (для истинных растворов). Энергонезависимый процесс.

Облегченная диффузия («паром по течению») – в направлении градиента концентрации с участием белков – переносчиков. Энергозависимый процесс.

Активный транспорт – против концентрационного и электрохимического градиента с участием пермеаз. Процесс идет с затратой энергии АТФ, зависит от заряда веществ и их трансформации в процессе переноса.

Транслокация – химическая модуляция переносимой путем активного транспорта молекулы.

Особенности метаболизма бактерий:

Используют любые источники основных химических соединений

Обладают высокой скоростью метаболических процессов

Обладают высокой адаптационной способностью к меняющимся условиям.

16

Классификация бактерий по источнику углерода:

	Источник углерода					Группа
Неорганические соединения: СО2 или карбонат						1. Автотрофы
		Окружающей среды				2.1 Сапрофиты
				Наряду с				Паразиты
				органическим
							Факультативные
				и
								(большинство
				соединениями
Органические					2. Гетеро-			патогенных
				окружающей		2.2 Пара-
соединения		Живой клетки			трофы			бактерий)
				средой		зиты
							Паразиты
				Только живой			Облигатные:
				клетки				Риккетсии
								Хламидии

Классификация бактерий по потребностям в факторах роста:

Способность синтезировать факторы роста
(азотистые основания, аминокислоты,	Группа
витамины, липиды)
+	Прототрофы
–	Ауксотрофы

Классификация бактерий по особенностям энергетического метаболизма:

	Источник		Название группы бактерий или процесса
	энергии
	Солнечный свет		1. Фототрофы
			2. Хемотрофы
		Донор	Неорганические соединения		2.1 Литотрофы
					2.2
		электронов	Органические соединения
	Химические				Органотрофы
	(окислительно-			О2	Аэробное
	восстановительн				дыхание
			Внешний
	ые) реакции с			Не О2
		Акцептор	(окисление)		Анаэробное
	синтезом АТФ			(нитрат,
		электронов			дыхание
				фумарат)
			Внутренний – органические		Брожение
			молекулы клетки (ферментация)

30. Основные принципы конструирования питательных сред. Классификация.

Питательные среды (ПС) применяются для искусственного выращивания микроорганизмов.

Требования, предъявляемые к ПС:

1)стерильность;

2)достаточное содержание основных органических и зольных элементов;

3)прозрачность;

4)иметь оптимальную рН;

5)достаточная влажность (не менее 60%);

6)наличие факторов роста различного происхождения;

7)изотоничность;

8)вязкость.

Классификация питательных сред

 По консистенции: жидкие, полужидкие, плотные Уплотнители: агар-агар (0,3-2,5%), желатин (10-15%).

17

По происхождению: естественные (молоко, картофель), искусственные, полусинтетические синтетические

По составу: простые (МПА, МПБ, овощи, молоко);

•	сложные (1% глюкозы – сахарный агар, 10-20% сыворотки крови – кровяной агар и др.,).
	По назначению: основные (простые, сложные)
•	специальные, в т.ч.

•элективные (селективные) - солевой МПА, щелочной МПА;

•дифференциально-диагностические (Эндо, Гисса; Плоскирева);

•консервирующие;

•обогатительные (солевой МПБ).

Агар – полисахарид, добываемый из морских водорослей определенных видов; используется для уплотнения питательных сред в бактериологии по такому же алгоритму, как в быту крахмал или желатин Натуральные среды готовятся на основе отваров, экстрактов мяса, рыбы, овощей и др. натуральных продуктов Простые натуральные среды представляют собой такие отвары или экстракты

Сложные натуральные среды получают путем добавления в простые натуральные среды любого вещества (красителя, сахара, антибиотика, крови и т.д.)

Синтетические питательные среды получают, смешивая чистые химические вещества (как правило, соли)

Элективные (селективные, избирательные, обогащения) питательные среды – это среды,

содержащие вещества, используемые бактериями определенных видов и не благоприятствующие или даже препятствующие росту других бактерий

Дифференциально-диагностические питательные среды – это среды, позволяющие отличать одни виды бактерий от других по их ферментативной активности или культуральным свойствам Консервирующие питательные среды – это среды, используемые, например, при доставке патологического материала в бактериологическую лабораторию – так как метаболическая активность на них бактерий сводится практически к нулю, то бактерии сохраняются, но не размножаются

31. Бактериологический метод диагностики.

Культуральный (бактериологический) метод исследования - совокупность способов,

направленных на выделение и идентификацию чистых культур микроорганизмов (бактерий) с помощью культивирования на питательных средах.

Чистая культура - совокупность микроорганизмов одного вида. Чаще всего чистую культуру получают путем отбора и культивирования изолированной колонии (потомство одной микробной клетки).

Этапы метода:

1.Забор материала для исследования.

2.Выделение чистой культуры и ее идентификация.

3.Заключение.

Забор материала для исследования. Вид исследуемого материала зависит от цели исследования (диагностика - от больного; эпиданализ - из внешней среды, продуктов питания, больного и (или) бактерионосителя).

Выделение чистой культуры:

1. Посев материала (после предварительной микроскопии) на чашку с плотной питательной средой (лучше дифференциально-диагностической или селективной) с целью получения изолированных колоний. Производят его чаще всего методом механического разобщения. В некоторых случаях (например, кровь) материал предварительно засевают в жидкую среду обогащения с последующим пересевом на чашку с агаровой средой. Иногда до посева проводят селективную обработку материала (с учетом свойств выделяемого микроорганизма; например, обработка кислотой или щелочью для выделения устойчивых бактерий). Культивируют при температуре 37°С в течение 18-24 часов. Время культивирования для разных видов бактерий может колебаться.

18

2. Изучение колоний на чашке с агаром (культуральные признаки), отбор наиболее типичных; б) приготовление мазков из этих колоний с окраской (по Граму или другими методами); а) отсев остатка исследованной колонии на среду накопления и выращивание в термостате при оптимальной температуре.

3. Изучение чистоты культуры, полученной на среде накопления. С этой целью готовят мазок, окрашивают (чаще по Граму), микроскопически изучают морфологическую и тинкториальную однородность.

4. Идентификация чистой культуры.

Заключение. По совокупности признаков в сравнении со свойствами эталонных (типовых) штаммов указывается вид выделенного из материала микроорганизма.

Оценка метода:

достоинства: относительно высокая чувствительность и точность, возможность определить численность микробов в исследуемом материале, а также чувствительность к антибиотикам; недостатки: относительная длительность, метод дорогостоящий.

32. Ферменты бактерий. Классификация. Практическое использование биохимической активности микроорганизмов для видовой идентификации.

Классификация ферментов
1)	Экзо-	1) Обмена	1) Конститутивные
2)	Эндо-	2) Агрессии	2) Индуцибельные
			(индуктивные)

По катализируемым реакциям:

Гидролазы

Оксидоредуктазы

Изомеразы

19

Трансферазы

Лиазы Лигазы (синтетазы)

По разлагаемым субстратам:

1)протеолитические (протеазы)

2)сахаролитические (карбогидразы)

3)липолитические (липазы)

Ферменты агрессии инвазивности

гиалуронидаза

фибринолизин

нейраминидаза

коллагеназа и др.

агрессивности

лецитиназа (лицитовителлаза)

коагулаза

уреаза

ДНК-аза и др.

1.Карбогидразы - ферменты, разлагающие углеводы. Определяя карбогидразы, выявляют т.н. сахаролитические свойства микробов.

С этой целью используют следующие среды:

а) среды Гисса (жидкие и полужидкие с индикаторами). О ферментативной активности бактерий судят по изменению цвета среды и образованию газа;

б) дифференциально-диагностические среды с лактозой (Эндо, Левина. Плоскирева и др.);

в) полиуглеводные среды (типа Олькеницкого, Клиглера и др.).

2.Протеазы - ферменты, разлагающие белки:

а) Для выявления указанных ферментов исследуемую культуру засевают на ряд сред: свернутая сыворотка, столбик желатина (разжижение в положительных случаях), молочный агар в чашке Петри (в положительных случаях вокруг колоний появляются зоны помутнения); б) расщепление аминокислоты триптофана за счет действия фермента триптафаназы сопровождается

образованием индола. Последний выявляется с помощью бумажки, смоченной щавелевой кислотой и укрепленной под пробкой над питательной средой. В положительныхслучаях бумажка краснеет; в) для выявления ферментов расщепления серосодержащих аминокислот (цистин, цистеин) ставят пробы на H2S (бумажка, пропитанная ацетатом свинца, чернеет).

г) для выявление аммиака используют лакмусовую бумагу (посинение).

д) для выявления уреазы - фермента, расщепляющего мочевину, в питательную среду нейтральной рН добавляют мочевину и индикатор. В положительных случаях среда изменяет цвет за счет сдвига рН в щелочную сторону в связи с образованием аммиака.

3.Липазы - ферменты разложения липидов и липоидов. Чаще всего определяют лецитиназу

посевом на желточный агар. Лецитиназа расщепляет лецитин, при росте колоний вокруг них появляются опалесцирующие зоны, отражающие лецитиназную активность.

4.Гемолизины - ферменты расщепления фосфолипидной мембраны эритроцитов. Они выявляются посевом культуры на кровяной агар (5-10%). Различают бэта-гемолиз или полный гемолиз, когда образуются зоны просветления вокруг колоний, альфа-гемолиз, неполный гемолиз, при наличии зон зеленого цвета вокруг колоний. Отсутствие гемолиза обозначается как гамма-гемолиз.

5.Оксидо-редуктазы:

1.Определение оксидаз. На фильтровальную бумагу, смоченную 1% раствором тетраметилпарафенилендиамина, петлей наносят полосы испытуемой культуры. В положительном случае появляется фиолетовое окрашивание полос (в течение 1 мин).

2.Определение каталазы. Каплю 3% раствора перекиси водорода наносят на предметное стекло и туда вносят петлю испытуемой культуры. В присутствии каталазы образуются пузырьки кислорода.

3.Определение дегидраз. О наличии дегидраз судят по редуцирующей способности микроба, т.е. способности восстанавливать некоторые органические красители (например, 1% водный раствор метиленовой синьки).

20