podgotovka_k_pervomu_prakticheskomu_voprosy_10-35
.pdf33. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения бактерий в закрытых системах.
Рост – координированное воспроизведение всех компонентов бактериальной клетки и увеличение ее биомассы.
Размножение – воспроизводство и увеличение количества клеток, приводящее к образованию бактериальной популяции.
Стадии роста периодической бактериальной культуры:
Фаза (стадия) |
Характеристика |
|
Лаг-фаза |
Деления клеток не происходит |
|
Положительного ускорения |
Скорость деления клеток увеличивается |
|
Логарифмического роста (экспоненциальная) |
Скорость деления клеток максимальная |
|
Отрицательного ускорения |
Скорость деления клеток снижается |
|
Стационарная фаза максимума |
Количество живых клеток постоянно |
|
|
Количество живых клеток начинает |
|
Ускоренной гибели |
снижаться (убывает с увеличивающейся |
|
|
скоростью) |
|
Логарифмической гибели |
Количество живых клеток убывает с |
|
максимальной скоростью |
||
|
||
Уменьшения скорости гибели |
Количество живых клеток убывает с |
|
уменьшающейся скоростью |
||
|
||
Стационарная фаза минимума |
Количество живых клеток минимально |
34, 35 Классификация микроорганизмов по типу дыхания. Культивирование анаэробных бактерий. Этапы выделения культур анаэробных бактерий.
В зависимости от того, какую роль кислород играет в процессах получения энергии, все микроорганизмы подразделяются на 6 групп:
1)облигатные аэробы - им необходимо большое количество кислорода;
2)микроарофилы - кислород необходим в небольших количествах, меньше, чем в атмосферном воздухе;
3)капнофилы - при культивировании необходимы O2 и CO2;
4)облигатные анаэробы - не могут расти в присутствии кислорода;
5)аэротолерантные анаэробы - могут расти в присутствии небольшого количества кислорода;
6)факультативные анаэробы - используют как аэробное, так и анаэробное дыхание, или
ферментирование. Это зависит от доступности кислорода.
Культивирование и выделение чистых культур анаэробных бактерий.
Культивирование анаэробов производят в бескислородных условиях или создают сниженное парциальное содержание кислорода в среде или в воздухе. Отношение бактерий к кислороду можно определить, произведя посев культуры уколом в столбик агаризованной питательной среды. Аэробы вырастут на поверхности столбика, анаэробы - в глубоких слоях ПС. Факультативные анаэробы будут расти как на поверхности среды, так и в ее глубине.
Необходимые условия для культивирования анаэробных микроорганизмов создаются физическими, химическими и биологическими методами.
Физические методы.
1. Регенерация (кипячение) жидких питательных сред.
После посева их заливают сверху слоем парафинового или вазелинового масла для разобщения от атмосферного воздуха.
2.Посев в «высокий столбик».
Кислород воздуха диффундирует обычно на расстоянии 1,5-2,0 см от поверхности среды, а в глубине создаются благоприятные условия для роста облигатных анаэробов.
3.Выращивание культур в анаэростатах.
Анаэростаты представляют собой металлические цилиндрические сосуды с герметически
21
закрывающейся крышкой, в которой имеется ниппель для соединения его с насосом с помощью вакуумной резиновой трубки. Из анаэростата вакуумным насосом откачивается воздух. Степень разреженности воздуха контролирует манометр.
Аппарат Киппа. Более старый способ замены воздуха индифферентным газом, например водородом.
Химические методы.
1. Добавление в среду редуцирующих и легко окисляемых веществ.
Добавляют кусочки паренхиматозных органов ( печень, селезенка и др. ), глюкозу, аскорбиновую кислоту, цистеин. Применяют и неорганические восстановители: сульфиды, сероводород, цитраты.
2.Химическое поглощение кислорода воздуха происходит при добавлении, например щелочного раствора пирогаллола в особых приборах, примером которого может служить свеча Омелянского - стеклянный прибор в форме свечи. Внутрь помещают одну пробирку с жидкой средой с посевом анаэробов (среда Китта-Тароции). На дно прибора наливают щелочной раствор пирогаллола. Сверху прибор закрывают стеклянным колпачком и парафинируют; 3. Для образования водорода и углекислого газа, необходимых для роста облигатных анаэробов
используются специальные пакеты, при добавлении воды в которые происходит активация с выделением соединений, которые связывают кислород воздуха (газогенераторные пакеты).
Биологические методы.
1.Совместное выращивание анаэробов и аэробов - Метод Фортнера. В основе метода лежит комбинированный посев культур анаэробов и аэробов. Посев производят в чашку Петри с толстым слоем сахарного кровяного агара (агар Цейсслера), который разделяют посредине чашки прокаленным стерильным скальпелем, вырезая небольшую полоску агара по диаметру. На одну половину среды засевают культуру аэробных бактерий, на другую - анаэробных. Чашку парафинируют и помещают в термостат. При росте аэробы поглощают кислород и создают тем самым условия для роста анаэробных бактерий.
2. Использование в питательных средах биологических редуцирующих веществ (кусочков печени, почек, крови, и др.).
Среда Китта-Тароции. Состав: МПБ, кусочки печени, глюкоза. Готовую среду сверху заливают слоем вазелинового масла и стерилизуют. Посев материала производят пастеровской пипеткой под слой масла.
Среда Цейсслера. Состав: МПА, 1% глюкоза, 20% дефибринированной крови. Используется для получения изолированных колоний анаэробных микроорганизмов, а также для изучения гемолитической активности бактерий.
Особенности выделения чистых культур анаэробных микроорганизмов.
Посевы с целью выделения анаэробной микрофлоры, как спорообразующей (клостридии), так и неспорообразующей (бактероиды, пептококки), производят в строго анаэробных условиях. Первичные посевы делают на обогатительные среды (тиогликолевую, Китта—Тароцци), затем пересевают на плотные среды: сахарный кровяной агар в чашки Петри, в высокий столбик сахарного питательного агара или другие среды для получения изолированных колоний. После инкубации посевов в анаэробных условиях из образовавшихся колоний бактерий готовят мазки, окрашивают, микроскопируют, а затем пересевают на среду Китта — Тароцци и агаровые среды для выделения чистой культуры.
При выделении спорообразующих анаэробных бактерий (клостридии) первоначальные посевы прогревают на водяной бане при температуре 80 °С в течение 20 мин для уничтожения вегетативных клеток посторонней микрофлоры, которая может присутствовать в исследуемом материале
22