- •Введение
- •Учебный модуль
- •Студент должен знать:
- •Раздел 1
- •Основы медицинской
- •Бактериологии и микробиологии
- •Практическая работа № 1
- •Практическая работа № 2
- •Практическая работа №3
- •Практическая работа №4
- •Рецепты приготовления простых (основных) сред и изотонического раствора натрия хлорида
- •Рецепты приготовления сложных сред
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №5
- •Часть 1
- •Практическая работа №5
- •Часть 2
- •Контрольные вопросы
- •Раздел 2
- •Основы медицинской
- •Вирусологии
- •Практическая работа №6
- •1. Заражение лабораторных животных.
- •2. Заражение куриных эмбрионов.
- •3. Культивирование вирусов в культурах клеток.
- •Однослойные культуры клеток.
- •2. Перевиваемые культуры клеток.
- •3. Полуперевиваемые культуры клеток.
- •Раздел 3
- •Основы медицинской
- •Паразитологии
- •Практическая работиа №7
- •Малярийный плазмодий
- •Кровяные формы малярийных плазмодиев
- •Практическая работа № 8
- •Раздел 4
- •Основы общей
- •Микробиологии
- •Практическая работа №9
- •Контрольные вопросы.
- •Раздел 5 основы иммунологии. Практическая работа №10
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа № 11
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №12.
- •Проведение основного опыта
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №13
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №14
- •Опсонофагоцитарная реакция
- •Контрольные вопросы
- •Практическая работа № 15
- •Контрольные вопросы.
- •Практическая работа №16
- •Список используемой литературы:
Контрольные вопросы
1. Что входит в понятие «бактериологическое исследование»?
2. Какой должна быть культура для такого исследования?
3. Что такое колония микробов, культура, штамм, клон?
4. Что входит в понятие «культурные свойства микробов»?
5. Что означает фаготипирование?
6. Что означает идентификация микроорганизмов?
7. Каким способом определяется чувствительность микроорганизмов к антибиотикам?
8. Какие исследования проводятся на каждом из четырех этапов изучения возбудителя?
Раздел 2
Основы медицинской
Вирусологии
Практическая работа №6
Культивирование и индикация вирусов.
Культивирование вирусов человека и животных производится с целью лабораторной диагностики вирусных инфекций, получения диагностических и вакцинных препаратов, а также используется в научно-исследовательской работе. Вирусы являются абсолютными паразитами. Они способны размножаться только в жизнеспособных клепках. Для культивирования вирусов используют биологические модели:
• лабораторные животные;
• развивающиеся куриные эмбрионы;
• культуры клеток.
Методы культивирования вирусов.
1. Заражение лабораторных животных.
При использовании лабораторных животных (белых мышей, крыс, кроликов, хомяков, обезьян и др.). о репродукции вируса можно судить по развитию различных признаков заболевания и патоморфологических изменениях органов животных, при гистологическом их изучении. Применение данного метода ограничено из-за невосприимчивости животных ко многим вирусам человека.
2. Заражение куриных эмбрионов.
Большое значение в развитии вирусологии имело введение методов культивирования вирусов в куриных эмбрионах. Для репродукции вируса используют куриные эмбрионы 7-12-дневного возраста, инкубированные в термостате при 37 С. Необходимым условием для правильного развития зародыша является соблюдение определенной влажности воздуха, которую можно создать, поместив в термостат сосуд с водой. Культивирование вирусов в куриных эмбрионах проводится в разных местах эмбриона, который заражают:
1) на хорион-аллантоисную оболочку;
2) в аллантоисную полость;
3) в амниотическую полость;
4) в желточный мешок.
Заражение куриных эмбрионов проводят в боксе с использованием стерильных инструментов. Перед: заражением куриные эмбрионы двукратно протирают ватным тампоном, смоченным спиртом.
Заражение на хорион-аллантоисную оболочку. После дезинфекции яйца осторожно срезают кусочек скорлупы с тупого концы, снимают подскорлупную оболочку - при этом обнаруживается хорион-аллатиоисная оболочка. Инфекционный материал в количестве 0,1-0,2 мл при помощи шприца или пастеровской пипетки наносят па хорион-аллантоисную оболочку. После заражения отверсто закрывают колпачком и просвет между ним и куриным эмбрионом заливают парафином. На другой стороне яйца простым карандашом пишут название инфекционного материала и дату заражения.
Заражение в амниотическую полость. Яйцо овоскопируют и на боковой стороне выбирают участок, где хорион-аллантоис лишен крупных кровеносных сосудов. Этот участок отмечают карандашом. Яйца укладывают на подставку в горизонтальном положении, дезинфицируют и специальным стерильным копьем прокалывают отверстие и скорлупе на глубину 2-3 мм, через которое вводят на это же расстояние иглу с инфекционным материалом непосредственно в амниотическую полость. Для того чтобы вводимая жидкость не вытекала обратно, предварительно делают прокол над воздушным мешком. После чего оба отверстия заливают парафином.
Заражение в аллантоисную полость. Заражение производят и затененном боксе. Отмечают воздушное пространство, скорлупу над воздушным пространством дезинфицируют и через отверстие в скорлупе вводят по направлению к эмбриону иглу шприца с материалом. Если игла попала в аллантоисную полость, то наблюдается смещение тени эмбриона. После заражения отверстие заливают парафином.
Заражение, в желточный мешок. Скорлупу дезинфицируют. Яйцо помещают на подставку тупым концом вправо так, чтобы желточный меток был обращен вверх. Над воздушной камерой в центре прокалывают отверстие. Через отверстие в скорлупе в скорлупе в горизонтальном направлении на глубину 2-3 мм вводят иглу шприца, которая попадает в желточный мешок. Материал вводят в объёме 0,2-0,3 мл. После введения материала отверстие парафинируют.
Температурный режим и длительность инкубации зависят от биологических свойств данного вируса. Инфицированные яйца ежедневно проверяют, овоскопируют для проверки жизнеспособности эмбриона. Если эмбрионы погибают в первые сутки, то причиной этого обычно бывает травма при заражении. Такие яйца выводят из опыта. Наличие вируса в заражённом эмбрионе определяют по характерным изменениям хорион-аллантоисной оболочки зараженного куриного эмбриона. Вирусы, не обладающие гемагпотинирующей активностью, выявляют с помощью РСК. Для выявления вируса в аллантоисной или амниотической жидкостях зараженных эмбрионов ставят РГА.