- •1)Азотистый баланс
- •1. Синтез 5'-фосфорибозиламина
- •Реакции синтеза амф и гмф
- •4. Образование нуклеозидтрифосфатов атф и гтф.
- •1) Главные компоненты желудочного сока
- •Реакция взаимопревращения глицина и серина
- •2) Распад пуриновых оснований
- •3) Регуляция синтеза белка
- •4) Обнаружение молочной кислоты в желудочном
- •1. Метаболизм феиилаланина
- •2. Особенности обмена тирозина в разных тканях
- •Механизм реакции синтеза дезоксирибонуклеотида
- •3. Реакция фосфорилирования
- •4) Определение свободной соляной кислоты
- •Окисление аланина
- •3) Синтез амидов из карбоновых кислот
- •1. Особенности обмена метионина
- •2. Обмен цистеина
- •4) Мочевая кислота сыворотки крови
- •Реакция синтеза глутаминовой кислоты
- •Реакция синтеза глутамина
- •Реакция синтеза аспарагина
- •Переваривание белков в желудочно-кишечном тракте
1. Метаболизм феиилаланина
Основное количество фенилаланина расходуется по 2 путям:
-
включается в белки;
-
превращается в тирозин.
Превращение фенилаланина в тирозин прежде всего необходимо для удаления избытка фенилаланина, так как высокие концентрации его токсичны для клеток. Образование тирозина не имеет большого значения, так как недостатка этой аминокислоты в клетках практически не бывает.
Основной путь метаболизма фенилаланина начинается с его гидроксилирования (рис. 9-29), в результате чего образуется тирозин. Эта реакция катализируется специфической монооксиге-назой - фенилаланингидр(жсилазой, кофермен-том которой служит тетрагидробиоптерин (Н4БП). Активность фермента зависит также от наличия Fe2+. Реакция необратима. Н4БП в результате реакции окисляется в дигидробиоптерин (Н2БП). Регенерация последнего происходит при участии дигидроптеридинредуктазы с использованием NADPH + H+.
2. Особенности обмена тирозина в разных тканях
Обмен тирозина значительно сложнее, чем обмен фенилаланина. Кроме использования в синтезе белков, тирозин в разных тканях выступает предшественником таких соединений, как катехоламины, тироксин, меланины, и ка-таболизируется до СО2 и Н2О.
Катаболизм тирозина в печени
В печени происходит катаболизм тирозина до конечных продуктов. Специфический путь катаболизма включает несколько ферментативных реакций, завершающихся образованием фумарата и ацетоацетата (см. схему А на с. 507):
-
Трансаминирование тирозина с ос-кетоглутаратом катализирует тирозинаминотрансфе-раза (кофермент ПФ) - индуцируемый фермент печени млекопитающих. В результате образуется п-гидроксифенилпируват.
-
В реакции окисления п-гидроксифенилпирувата в гомогентизиновую кислоту происходит декарбоксилирование, гидроксилирование ароматического кольца и миграция боковой цепи. Реакцию катализирует фермент п-гидроксифенилпируватдиоксигеназа, кофакторами которого выступают витамин С и Fe2+.
-
Превращение гомогентизиновой кислоты в фумарилацетоацетат сопровождается расщеплением ароматического кольца. Эта реакция катализируется диоксигеназой гомогентизиновой кислоты, в качестве кофермента содержащей Fe2+.
Обмен фенилаланина и тирозина связан со значительным количеством реакций гидроксилирования, которые катализируют оксигеназы. Ферменты оксигеназы (гидроксилазы) используют молекулу О2 и кофермент-донор водорода (чаще - Н4БП). Для катализа оксигеназам не- обходимы кофакторы - Fe2+ или гем (для некоторых - Сu+), а для многих ещё и витамин С.
Заболевания, связанные с нарушением обмена фенилаланина и тирозина
Известно несколько наследственных заболеваний, связанных с дефектом ферментов обмена фенилаланина и тирозина в разных тканях.
Фенилкетонурия
В печени здоровых людей небольшая часть фенилаланина (∼10%) превращается в фенил-лактат и фенилацетилглутамин (рис. 9-30).
Этот путь катаболизма фенилаланина становится главным при нарушении основного пути - превращения в тирозин, катализируемого фенил-аланингидроксилазой. Такое нарушение сопровождается гиперфенилаланинемией и повышением в крови и моче содержания метаболитов
509
Рис. 9-30. Альтернативные пути катаболизма фенилаланина. При дефекте фенилаланингидроксилазы накопившийся фенилалан и н подвергается трансаминированию с а-кетоглутаратом. Образовавшийся фенилпируват превращается либо в фениллактат, либо в фенилацетилглутамин, которые накапливаются в крови и выделяются с мочой. Эти соединения токсичны для клеток мозга.
альтернативного пути: фенилпирувата, фенилацетата, фениллактата и фенилацетилглу-тамина. Дефект фенилаланингидроксилазы приводит к заболеванию фенилкетонурия (ФКУ). Выделяют 2 формы ФКУ:
-
Классическая ФКУ - наследственное заболевание, связанное с мутациями в гене фенилаланингидроксилазы, которые приводят к снижению активности фермента или полной его инактивации. При этом концентрация фенилаланина повышается в крови в 20-30 раз (в норме - 1,0-2,0 мг/дл), в моче - в 100-300 раз по сравнению с нормой (30 мг/дл). Концентрация фенилпирувата и фениллактата в моче достигает 300-600 мг/дл при полном отсутствии в норме.
-
Наиболее тяжёлые проявления ФКУ - нарушение умственного и физического развития, судорожный синдром, нарушение пигментации. При отсутствии лечения больные не доживают до 30 лет. Частота заболевания - 1:10 000 новорождённых. Заболевание наследуется по аутосомно-рецессивному типу.
-
Тяжёлые проявления ФКУ связаны с токсическим действием на клетки мозга высоких концентраций фенилаланина, фенилпирувата, фениллактата. Большие концентрации фенилаланина ограничивают транспорт тирозина
510
и триптофана через гематоэнцефаличеекий барьер и тормозят синтез нейро-медиаторов (дофамина, норадреналина, серотонина).
-
Вариантная ФКУ (коферментзависимая гиперфенилаланинемия) - следствие мутаций в генах, контролирующих метаболизм Н4БП. Клинические проявления - близкие, но не точно совпадающие с проявлениями классической ФКУ. Частота заболевания - 1-2 случая на 1 млн новорождённых.
-
Н4БП необходим для реакций гидроксилирования не только фенилаланина, но также тирозина и триптофана, поэтому при недостатке этого кофермента нарушается метаболизм всех 3 аминокислот, в том числе и синтез ней-ромедиаторов. Заболевание характеризуется тяжёлыми неврологическими нарушениями и ранней смертью ("злокачественная" ФКУ).
Прогрессирующее нарушение умственного и физического развития у детей, больных ФКУ, можно предотвратить диетой с очень низким содержанием или полным исключением фенилаланина. Если такое лечение начато сразу после рождения ребёнка, то повреждение мозга предотвращается. Считается, что ограничения в питании могут быть ослаблены после 10-летнего возраста (окончание процессов миелиниза-ции мозга), однако в настоящее время многие педиатры склоняются в сторону "пожизненной диеты".
Для диагностики ФКУ используют качественные и количественные методы обнаружения патологических метаболитов в моче, определение концентрации фенилаланина в крови и моче. Дефектный ген, ответственный за фенилкетонурию, можно обнаружить у фенотипически нормальных гетерозиготных носителей с помощью теста толерантности к фенилаланину. Для этого обследуемому дают натощак ∼10 г фенилаланина в виде раствора, затем через часовые интервалы берут пробы крови, в которых определяют содержание тирозина. В норме концентрация тирозина в крови после фенилаланиновой нагрузки значительно выше, чем у гетерозиготных носителей гена фежилкетонурии. Этот тест используется в генетической консультации для определения риска рождения больного ребёнка. Разработана схема скрининга для выявления новорождённых детей с ФКУ. Чувствительность теста практически достигает 100%.
В настоящее время диагностику мутантного гена, ответственного за ФКУ, можно проводить с помощью методов ДНК-диагностики (рестрикционного анализа и ПЦР).
Тирозинемии
Некоторые нарушения катаболизма тирозина в печени приводят к тирозинемии и тирози-нурии. Различают 3 типа тирозинемии.
-
Тирозинемия типа 1 (тирозиноз). Причиной заболевания является, вероятно, дефект фермента фумарилацетоацетатгидролазы, катализирующего расщепление фумарилацетоа-цетата на фумарат и ацетоацетат (рис. 9-28). Накапливающиеся метаболиты снижают активность некоторых ферментов и транспортных систем аминокислот. Патофизиология этого нарушения достаточно сложна. Острая форма тирозиноза характерна для новорождённых. Клинические проявления - диарея, рвота, задержка в развитии. Без лечения дети погибают в возрасте 6-8 мес из-за развивающейся недостаточности печени. Хроническая форма характеризуется сходными, но менее выраженными симптомами. Гибель наступает в возрасте 10 лет. Содержание тирозина в крови у больных в несколько раз превышает норму. Для лечения используют диету с пониженным содержанием тирозина и фенилаланина.
-
Тирозинемия типа II (синдром Рихнера-Ханхорта). Причина - дефект фермента тирозина-минотрансферазы. Концентрация тирозина в крови больных повышена. Для заболевания характерны поражения глаз и кожи, умеренная умственная отсталость, нарушение координации движений.
-
Тирозинемия новорождённых (кратковременная). Заболевание возникает в результате снижения активности фермента п-гидроксифенилпируватдиоксигеназы, превращающего п-гидроксифенилпируват в гомогентизиновую кислоту (рис. 9-28). В результате в крови больных повышается концентрация п-гидроксифенилацетата, тирозина и фенил-аланина. При лечении назначают бедную белком диету и витамин С.
Алкаптонурия ("чёрная моча")
Причина заболевания - дефект диоксигеназы гомогентизиновой кислоты. Дляэтой болезни характерно выделение с мочой большого количества гомогентизиновой кислоты, которая, окисляясь кислородом воздуха, образует тёмные пигменты алкаптоны. Это метаболическое нарушение было описано ещё в XVI веке, а само заболевание охарактеризовано в 1859 г. Клиническими проявлениями болезни, кроме потемнения мочи на воздухе, являются пигментация соединительной ткани (охроноз) и артрит. Частота - 2-5 случаев на 1 млн новорождённых. Заболевание наследуется по аутосомнорецессивному типу. Диагностических методов выявления гетерозиготных носителей дефектного гена к настоящему времени не найдено.
Альбинизм
Причина метаболического нарушения - врождённый дефект тирозиназы. Этот фермент катализирует превращение тирозина в ДОФА в меланоцитах. В результате дефекта тирозиназы нарушается синтез пигментов меланинов.
Клиническое проявление альбинизма (от лат. albus - белый) - отсутствие пигментации кожи и волос. У больных часто снижена острота зрения, возникает светобоязнь. Длительное пребывание таких больных под открытым солнцем приводит к раку кожи. Частота заболевания 1:20 000.
Нарушение синтеза катехоламинов (рис. 9-28) может вызывать различные нервно-психические заболевания, причём патологические отклонения наблюдаются как при снижении, так и при увеличении их количества.
Болезнь Паркинсона
Заболевание развивается при недостаточности дофамина в чёрной субстанции мозга. Это одно из самых распространённых неврологических заболеваний (частота 1:200 среди людей старше 60 лет). При этой патологии снижена активность тирозингидроксилазы, ДОФА-декарбоксилазы. Заболевание сопровождается тремя основными симптомами: акинезия (скованность движений), ригидность (напряжение мышц), тремор (непроизвольное дрожание). Дофамин не проникает через гематоэнцефалический барьер и как лекарственный препарат не используется. Для лечения паркинсонизма предлагаются следующие принципы:
-
заместительная терапия препаратами-предшественниками дофамина (производными ДОФА) - леводопа, мадопар, наком и др.
-
подавление инактивации дофамина ингибиторами МАО (депренил, ниаламид, пиразидол и др.).
Депрессивные состояния часто связаны со снижением в нервных клетках содержания дофамина и норадреналина.
Гиперсекреция дофамина в височной доле мозга наблюдается при шизофрении.
4)
Определение свободной соляной кислоты
в желудочном соке
Отклонения в составе пищеварительных соков или появление в
них компонентов, не содержащихся в физиологических условиях,
дают важную информацию о патологии пищеварения. В
клинической практике используют методы анализа желудочного
сока для диагностики и лечения заболеваний.
При анализе желудочного сока определяют его общее
количество, цвет, запах, наличие слизи, общую кислотность,
количество свободной и связанной соляной кислоты, присутствие
молочной кислоты, крови и желчных пигментов.
А. ПРИ ПОМОЩИ ИНДИКАТОРА «КОНГО КРАСНЫЙ»
Принцип
В присутствии свободной соляной кислоты в желудочном соке
индикатор «конго красный» меняет окраску на синюю, оставаясь в
нейтральной и щелочной среде красным (зона перехода рН 3,0-5,2).
Реактивы индикаторная бумага «конго красный»
Материал исследования
Нормальный и патологический желудочный сок.
Проведение анализа
На две разные полоски индикаторной бумаги наносят
стеклянной палочкой по 1 капле нормального и патологического
желудочного сока.
Б. ПРИ ПОМОЩИ ИНДИКАТОРА ДИМЕТИЛАМИНОАЗОБЕНЗОЛА
Принцип
Индикатор, п-диметиламиноазобензол, в присутствии
свободной соляной кислоты, имеет красную окраску, в щелочной
среде – желтую (зона перехода рН 2,3-4,2).
Реактивы
Индикатор п-диметиламиноазобензол.
Материал исследования
Нормальный и патологический желудочный сок.
Проведение анализа
В две пробирки вносят по 10 капель исследуемого желудочного
сока, добавляют по 2 капли п-диметиламиноазобензола.__
Билет №9
1) Экзопептидазы (экзопротеиназы) — ферменты, гидролизующие белки, отщепляя аминокислоты от конца пептида: карбоксипептидазы — от C-конца, аминопептидазы — от N-конца, дипептидазы расщепляют дипептиды.
Экзопептидазы синтезируются в клетках тонкого кишечника (аминопептидазы, дипептидазы) и в поджелудочной железе (карбоксипептидаза). Функционируют эти ферменты внутриклеточно в кишечном эпителии и, в небольшом количестве, в просвете кишечника.
Эндопептидазы: пепсин, трипсин и
химотрипсин расщепляют пептидные связи, располагающиеся внутри полипептидной
цепи. Причем эти ферменты гидролизуют с наибольшей скоростью пептидные связи,
образованные определенными аминокислотами.
Эндопептидазы синтезируются в виде неактивных предшественников-проферментов.
Таким способом секретирующие клетки защищают свои собственные белки от
разрушения этими ферментами. После секреции проферменты активируются путем
частичного избирательного протеолиза. Слизистая оболочка желудка и кишечника также
защищены от действия протеаз слоем слизи. Кроме того, поверхностный полисахаридный
слой плазматической мембраны так же предохраняет клетку от действия протеаз.
2)
Синтез дезоксирибонуклеотидов происходит в три реакции
Особенностью обмена пуринов и пиримидинов является то, что они могут образовывать не только рибонуклеотиды, но и дезоксирибонуклеотиды.
Дезоксирибонуклеозидтрифосфаты необходимы клетке для синтеза ДНК. Их образование протекает в три реакции, первая и третья реакции просты и понятны. Главные события происходят во второй реакции.
Все три реакции синтеза дезоксирибонуклеотидов
1. Реакция дефосфорилирования
В самом начале процесса происходит потеря рибонуклеозидтрифосфатами одной фосфатной группы и образуются АДФ, ГДФ, ЦДФ, УДФ.
2. Реакция восстановления
Во второй реакции фермент рибонуклеозид-редуктаза восстанавливает АДФ, ГДФ, ЦДФ, УДФ до дезоксирибонуклеозиддифосфатов dАДФ, dГДФ, dЦДФ, dУДФ. Донором водорода для восстановления рибозы является белок тиоредоксин, его SH-группы окисляются кислородом рибозы и образуется вода. Последующее восстановление тиоредоксина в рабочее состояние о
Механизм реакции синтеза дезоксирибонуклеотида
3. Реакция фосфорилирования
После образования dАДФ, dГДФ, dЦДФ фосфорилируются, а dУДФ используется для синтеза тимидилового нуклеотида.
беспечивается за счет НАДФН.
3)
Б И О С И Н Т Е З Б Е Л К О В
После считывания информации с ДНК и переноса ее на матричную РНК начина-
ется синтез белков. Каждая зрелая мРНК несет информацию только об одной поли-
пептидной цепи. Если клетке необходимы другие белки, то необходимо транскриби-
ровать мРНК с иных участков ДНК.
Биосинтез белков или трансляция происходит на рибосомах, внутриклеточных
белоксинтезирующих органеллах, и включает 5 ключевых элементов:
• матрица – матричная РНК
• растущая цепь – полипептид
• субстрат для синтеза – 20 протеиногенных аминокислот
• источник энергии – ГТФ
• ферменты – рибосомальные белки и рРНК
Выделяют три основных стадии трансляции: инициация, элонгация, терминация.
И Н И Ц И А Ц И Я
Для инициации необходимы мРНК, ГТФ, малая и большая субъединицы рибосо-
мы, три белковых фактора инициации (ИФ-1, ИФ-2, ИФ-3), метионин и тРНК для ме-
тионина
В начале этой стадии формируются два тройных комплекса: первый – мРНК, ма-
лая субъединица, ИФ-3; второй – мет-тРНК, ИФ-2, ГТФ. После их объединения и
присоединения большой субъединицы начинается стадия элонгации.
Э Л О Н Г А Ц И Я
Для этой стадии необходимы все 20 аминокислот, тРНК для всех аминокислот,
белковые факторы элонгации, ГТФ. Элонгация представляет собой циклический
процесс, повторяющийся столько раз, сколько аминокислот необходимо включить в
полипептидную цепь. Удлинение цепи происходит со скоростью примерно 20 амино-
кислот в секунду.
Т Е Р М И Н А Ц И Я
Синтез белка будет продолжаться до тех пор, пока рибосома не достигнет на
мРНК особых терминирующих кодонов – стоп-кодонов УАА, УАГ, УГА. Данные три-
плеты не кодируют ни одной из аминокислот, их также называют нонсенс-кодоны.
Кроме стоп-кодонов для окончания синтеза белка требуются ГТФ и белковые факто-
ры терминации, которые последовательно катализируют
1. Гидролитическое отщепление полипептида от конечной тРНК
2. Отделение от П-участка последней, уже пустой, тРНК,
3. Диссоциацию рибосомы.
П О Л И Р И Б О С О М Ы
По причине того, что продолжительность жизни матричной РНК невелика, перед
клеткой стоит задача использовать ее максимально эффективно, т.е. получить мак-
симальное количество «белковых копий». Для достижения этой цели на каждой
мРНК может располагаться не одна, а несколько рибосом, встающих последова-
тельно друг за другом и синтезирующих пептидные цепи. Такие образования называются полирибосомы.__