- •Содержание
- •1 Аналитический обзор 11
- •2 Методическая часть 29
- •3. Экспериментальная часть 37
- •4 Обсуждение результатов эксперимента 44
- •Условные обозначения
- •Введение
- •1 Аналитический обзор
- •1.1 Регулярные мультимолекулярные структуры
- •1.2 Хроматография
- •1.2.1 Металл-аффинная хроматография – сочетание принципов лигандообменной и аффинной хроматографии
- •1.3 Методы характеризации сорбентов
- •1.3.1 Удельная поверхность
- •1.3.2 Емкость сорбента, влажность
- •1.3.3 Электрокинетический потенциал
- •1.4 Maldi масс-спектрометрия
- •1.5 Идентификация белков – метод pmf
- •1.6 Тандемная масс-спектрометрия (мс-мс) и идентификация пептиов по фрагментным масс-спектрам
- •1.7 Идентификация пост-трансляционных модификаций
- •1.8 Аддукты зомана с сывороточным альбумином
- •2 Методическая часть
- •2.1 Используемые материалы:
- •2.2 Методики получения сорбента и исследования
- •2.2.1 Получение рмм (FeIii) сорбента
- •2.2.2 Определение удельной поверхности сорбента
- •2.2.3 Определение сорбционной емкости сорбента
- •2.2.3.1 Проведение металл-аффинного анализа
- •2.2.3.2 Определение влажности рмм Fe(III) сорбента
- •2.2.3.3 Определение влажности коммерческого сорбента
- •2.2.4 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •2.2.4.1 Выделение суммарного белка из обезжиренного сухого молока
- •2.2.4.2 Гидролиз суммарного белка молока коровы в присутствии трипсина
- •2.2.5 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •2.2.5.1 Гидролиз сывороточного альбумина человека в присутствии пепсина
- •2.2.6 Масс-спектрометрический анализ
- •2.2.6.1 Масс-спектрометрический анализ методом maldi-tof и maldi-tof-tof
- •2.2.6.2 Обработка данных масс-спектрометрического анализа
- •3. Экспериментальная часть
- •3.1. Получение рмм Fe(III) сорбента
- •3.2 Определение удельной поверхности
- •3.3 Определение электрокинетического потенциала и размера частиц.
- •3.4 Определение сорбционной емкости сорбента
- •3.4.1Проведение металл-аффинного анализа
- •3.4.2 Определение содержание пептида в проскоке и контрольном образце
- •3.4.3 Определение влажности коммерческого сорбента и рммс Fe(III)
- •3.5 Анализ фосфорилированных пептидов казеина молока коровы
- •3.5.1 Приготовление микроколонки с сорбентом
- •3.5.2 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.5.3 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.6 Анализ фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека
- •3.6.1 Приготовление металл-аффинной колонки
- •3.6.2 Выбор элюэнта
- •3.6.3 Металл-аффинная хроматография на коммерческом сорбенте
- •3.6.4 Металл-аффинная хроматография на рммс Fe(III)
- •3.7 Масс-спектрометрический анализ
- •3.7.1 Проведение масс-спектрометрического анализа
- •4 Обсуждение результатов эксперимента
- •4.1 Охарактеризация сорбента
- •4.1.1. Получение рмм сорбента, содержащего ионы железа (III) и приготовление хроматографических колонок.
- •4.1.2 Определение удельной поверхности
- •4.1.3 Определение емкости сорбента
- •4.1.4 Микроэлектрофоретические исследования.
- •4.1.4.1 Определение электрокинетического потенциала
- •4.1.4.2 Расчет удельной поверхности рмм сорбента
- •4.2 Исследование возможности специфичного выделения фосфорилированных пептидов из биологического образца методом металл-аффинной хроматографии с использованием рммс(Fe III)
- •4.3 Разработка метода металл-аффинного выделения прямых ковалентных аддуктов зомана с сывороточным альбумином с помощью рмм сорбентов Fe(III) для последующего масс-спектрометрического анализа
- •4.3.1 Поиск и идентификация аддуктов сывороточного альбумина человека с зоманом
- •4.3.2 Выделение фосфонилированных пептидов сывороточного альбумина человека с использованием рммс (Fe III)
- •4.3.2 Масс-спектрометрическая идентификация сайтов связывания зомана с альбумином при взаимодействии с белками in vitro
- •Выводы по работе:
- •Список использованных источников.
- •Приложение а Технико-экономическая оценка научно-исследовательской работы Обоснование договорной цены на разработку
- •Расчет затрат на научно-исследовательскую разработку
- •Расчет затрат на сырье, материалы, реактивы, покупные изделия и полуфабрикаты
- •Расчет затрат на энергоресурсы
- •Расчет затрат на приборы, оборудование для научно-экспериментальных работ и суммы амортизационных отчислений
- •Расчет затрат на оплату труда с обязательными начислениями
- •Прочие затраты Расчет суммы расходов по использованию вычислительной техники.
- •Затраты на выполнение специальных анализов.
- •Расчет суммы накладных расходов
- •Расчет сметы затрат на разработку
- •Приложение б Охрана труда и окружающей среды
- •1 Опасные и вредные производственные факторы
- •2 Пожарная безопасность
- •3 Обеспечение санитарно-гигиенических условий
- •4 Вентиляция
- •5 Аптечка и ее содержание
- •6 Освещение помещения
- •7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
- •8 Анализ технологических операций
- •9 Меры первой помощи
- •Охрана окружающей среды
- •Приложение в
- •Приложение г Масс-спектры смеси триптических пептидов казеина, элюированных с колонки с сорбентом, содержащим ионы железа.
-
-
7 Безопасность выполнения работы в лаборатории
Химическая лаборатория по опасности поражения человека электрическим током относится к классу помещений без повышенной опасности, в которых отсутствуют условия, создающие эту опасность, такие как: сырость, токопроводящая пыль, токопроводящие полы, высокая температура и т.д.
При работе применялось электрооборудование с питанием от сети переменного тока частотой 50 Гц и напряжением 220 В. Для обеспечения безопасности работы запрещается эксплуатировать неисправное электрооборудование. Все приборы и электрооборудование, работающие при напряжении выше 42В заземлены и подключены к сети проводами в изоляционной оболочке. Нагревательные приборы установлены на термоизоляционных подставках, заземлены. Сопротивление заземления не превышает 4 Ом. К работе с электрооборудованием допускаются люди не моложе 18 лет, прошедшие проверку знаний правил техники безопасности. На рабочем месте должны находиться диэлектрический коврик и резиновые перчатки. В случае перерыва подачи тока, а также по окончании работ все электрооборудование необходимо отключить от питающей сети. [48]
В лабораторном помещении также учитывалась безопасность при работе с компьютером. Во избежание развития профессионального заболевания соблюдается расстояние до монитора 60 см, а на каждое рабочее место отводится не менее 6 м2 . Продолжительность работы за компьютером должна быть не более шести часов в день. При этом необходимо через каждые два часа осуществлять пятиминутные перерывы. [49]
Легковоспламеняющиеся жидкости в лаборатории хранились в небольших количествах и были защищены от солнечного и иного теплового воздействия. Работа с ЛВЖ проводилась в вытяжном шкафу вдали от раскаленных предметов.
Хранение химических реактивов осуществлялось в отдельном специально оборудованном шкафу. Щелочь и кислота хранились в стеклянных бутылях с притертыми пробками.
Все работы в лаборатории проводятся только после обучения и проверки знаний правил техники безопасности [50].
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
8 Анализ технологических операций
Таблица Б.5 - Анализ технологических операций
|
Наименование технологич. операции |
Оборудование для проведения операции |
Возможные опасности и вредности проведения технологич. операции |
Причины проявления опасности и вредности |
Меры по безопасному проведению данной технологич. операции |
|
Проведение Ме-афинной хроматографии |
Пробирки |
Отравление парами органических соединений, ожоги |
Неосторожное обращение |
Работа в вытяжном шкафу, использование перчаток |
|
Определение емкости сорбента |
Хроматограф |
Ожоги уксусной кислотой, попадание ацетонитрила |
Неосторожное обращение |
Работа в перчатках |
|
Электротравма |
Нарушение изоляции, отсутствие заземления |
Проверка исправности оборудования перед работой |
||
|
Определение удельной поверхности образцов |
Лабораторная установка, совмещенная с хроматографом |
Ожоги жидким азотом |
Неосторожное обращение |
Аккуратное выполнение операции с использованием спец емкостей |
|
Электротравма |
Нарушение изоляции, отсутствие заземления |
Проверка исправности оборудования перед работой |
||
|
Работа с вычислительной техникой |
Персональный компьютер |
Электротравма |
Нарушение изоляции, отсутствие заземления |
Проверка исправности оборудования перед работой |
|
Утомляемость глаз, головокружение |
Длительная работа на ПК без перерыва |
Сокращение времени работы на ПК, осуществление пятнадцатиминутных перерывов каждые два часа |