Лабораторные работы / Лабораторная6 Физиология красной крови

Федеральное государственное автономное

образовательное учреждение

высшего профессионального образования

«СИБИРСКИЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Институт фундаментальной биологии и биотехнологии

институт

Базовая кафедра биотехнологии

кафедра

Лабораторная работа №6

Физиология красной крови

Физиология человека и животных с основами высшей нервной деятельности

дисциплина

____________________________________________________

____________________________________________________

Преподаватель:

Студент:

Красноярск 2019

Тема работы: Физиология красной крови.

Цель работы: Познакомиться с методиками подсчета эритроцитов и гемоглобина у человека.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, Камера Горяева, покровное стекло, 3,5% раствор NaCl, пипетки на объем не менее 5 мл, капилляры Сали, раствор цитрата натрия, центрифуга для определении гематокрита, линейка, трансформирующий раствор, стандартный раствор гемоглобина с известной концентрацией гемоглобина (120г/л), фотоэлектрокалориметр (ФЭК), кюветы толщиной 10 мм и 3 мм.

Задачи: 1. Определить гематокрит. 2. Определить количество эритроцитов. 3. Определить концентрацию гемоглобина. 4. Рассчитать цветной показатель

Ход работы:

Работа № 1. Определение гематокрита.

Гематокрит - это показатель, характеризующий соотношение форменных элементов и плазмы крови. Гематокрит - доля объема крови, которую занимают форменные элементы. Определяется с помощью центрифугирования цельной крови в капилляре в специальной центрифуге.

Для определения гематокрита произведите забор крови из пальца (работа № 1) в специальный капилляр для определения гематокрита. Капилляр обязательно обработайте антикоагулянтом - гепарином или раствором цитрата натрия. Капилляр заполните кровью на 7 /8 его длины (при заполнении капилляра в него не должны попадать пузырьки воздуха), закупорьте специальной замазкой с того конца, через который брали кровь. Поместите капилляры с кровью в ротор центрифуги таким образом, чтобы закупоренные концы были направлены кнаружи от оси вращения и упирались в резиновую прокладку, центрифугируйте в течение 5 мин. Определите гематокрит по специальной шкале или с помощью линейки. В последнем случае измерьте высоту столбика эритроцитов (Вэ) и высоту столбика плазмы (Вп). Рассчитайте гематокрит (как процент форменных элементов от всего объема крови) по формуле:

Гематокрит исследуемой крови = 41%. Обьём форменных элементов крови немного ниже нормы. Олигоцитемия.

Работа № 2. Определение содержания гемоглобина.

Для определения гемоглобина используется гемоглобинцианидный метод. Принцип метода состоит в том, что к крови добавляется специальный трансформирующий раствор, содержащий сильный окислитель (цианид), при взаимодействии с которым эритроциты разрушаются, гемоглобин выходит в раствор и образует окрашенное соединение гемоглобинцианид. Интенсивность окраски пропорциональна количеству гемоглобина и фиксируется на ФЭКе или спектрофотометре.

В пробирку пипеткой перенесите 5 мл трансформирующего раствора. Забирите из пальца кровь капилляром Сали до метки 0,02 и выпустите в трансформирующий раствор. Раствор крови в трансформирующем растворе аккуратно, но тщательно перемешайте и оставьте на 10-15 мин при комнатной для полного развития окраски (раствор остается стабильным в течение более 24 ч). Таким же образом подготовьте пробу со стандартным раствором.

гемоглобина: 5 мл трансформирующего раствора и один капилляр стандартного раствора гемоглобина (120 г/л). Далее производят измерение оптической плотности на ФЭКе опытной и стандартной проб при длине волны 520-560нм (зеленый светофильтр) в кювете толщиной 10мм. Предварительно выставляется ноль по трансформирующему раствору. Поскольку содержание гемоглобина в стандартном растворе известно, содержание гемоглобина в опытной проб рассчитывают в соответствии с пропорцией:

где: Dс - оптическая плотность стандартной пробы, Dо - оптическая плотность опытной пробы

Содержание гемоглобина – 125 г/л. Соответствует норме для женщины. Нормохронемия.

Работа № 3. Расчет среднего содержания гемоглобина в одном эритроците и цветного показателя крови.

Расчетные показатели среднего содержания гемоглобина в одном эритроците и цветного показателя крови - индексы красной крови используются для выводов о насыщенности эритроцитов гемоглобином. Расчет среднего содержания гемоглобина в одном эритроците производится делением количества гемоглобина (г/л) на число эритроцитов (кл/л).

Число эритроцитов в норме(кл/л) / Число эритроцитов испытуемого кл/л) Содержание Hb в норме (г/л) / Содержание Hb испытуемого (г/л)

В норме цветной показатель крови колеблется от 0,86 до 1,1 (нормохромия). В случае если ЦП ниже 0,86, делается вывод о гипохромии, а если ЦП выше 1,1, то о гиперхромии.

Вывод: Исследуемая кровь вероятнее всего принадлежит женщине. Гемотокрит исследумой крови равен 41%, что соответствует олигоцитемии. Содержание гемоглобина в литре равно 125 г/л, что соответствует нормохронемии.