5. Ход работы

Для изучения актиномицетов рекомендует­ся использовать их колонии, выращенные на КАА или среде Чапека. Перетертую и просеянную навеску почвы в количестве 10 г переносят в стерильную ступку, где ее увлажняют до пастообразного состояния. добавляя 2-3 мл стерильной дистиллированной воды, растирают. После растирания почву с помощью стерильной дистиллированной воды оставшейся от 90 мл переносят в сухую стерильную колбу, получают первое разведение. Затем почвенную суспензию в колбе встряхивают в течение 5 мин, дают отстояться 30 с и далее стерильной пипеткой переносят 1 мл почвенной суспензии из колбы в пробирку с 9 мл стерильной дистиллированной воды, получают второе разведение и т.д. На агаровые пла­стинки в чашках Петри высевают по 1 капле или по 0,1 мл почвенной суспензии из 3—4-го разведения и тщательно растирают ее стеклянным шпателем по всей поверхности агаровой пластинке. Засеянные чашки Петри переворачивают средой вверх и помещают в термостат при температуре 28-30 ^оС.

Через 8—10 суток на поверхности среды вырастают коло­нии актиномицетов. Пробиркой с ровным краем вырезают блок среды с колонией актиномицета, переносят его на предметное стекло и микроскопируют при малом увеличении микроскопа. Составляют описание колонии.

Для приготовления прижизненного препарата часть коло­нии с кусочком агара переносят на второе предметное стекло в каплю 70—80%-ной уксусной кислоты или 60%-ного этанола со следами аммиака. Следует учесть, что колонии актиномице­тов не смачиваются водой. Материал из колонии актиномицета распределяют препаровальными иглами, накрывают покровным стеклом и микроскопируют, пользуясь объективом ВИ-40, микроскопическую картину зарисовывают. На препарате видны обрывки мицелия и спороносные гифы.

Для изучения типа спорообразования, формы и размеров спор следует приготовить постоянные препараты — отпечатки колонии актиномицета. Для приготовления препарата-отпе­чатка покровное стекло плотно прижимают к поверхности коло­нии актиномицета. Отпечаток высушивают на воздухе, фик­сируют на пламени, окрашивают фуксином или генцианвиолетом и промывают водой. Покровное стекло помещают на пред­метное стекло в каплю воды отпечатком вниз. Препарат микро­скопируют, пользуясь объективом МИ-90. В поле зрения микро­скопа хорошо видны обрывки мицелия, строение спороносцев, тип спорообразования, форма и размеры спор.

6. Литература по теме занятия

1. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология. - М.: Академия, 2003.

2. Определитель бактерий Берджи. – Под ред. Дж. Хоулта, в 2-х томах. - М.: Мир, 1997.

3. Асонов Н.Р. Микробиология. – М.: Колос, 2001.

4. Градова Н.Б., Бабусенко Е.С. Лабораторный практикум по общей микробиологии. - М.: РХТУ, 1998.

5. Бакулин М. К. Получение накопительных культур микроорганизмов различных таксономических групп. - Киров, 1997.

6. Теппер Е.З. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для вузов.- М.: Дрофа, 2004.