- •Гоу впо «владивостокский государственный медицинский универсистет федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии
- •5. Этапы проведения занятия
- •6. Ориентировочная основа действия (оод) для проведения самостоятельной деятельности студентов (сдс) в учебное время:
- •7. Задание на самоподготовку. Перечень вопросов для подготовки темы и вводного контроля
- •7.3. Задания для сдс во внеучебное время.
- •7.4. Задания для самоконтроля:
- •Приложение № 1 Лабораторная диагностика сифилиса
- •1. Материал и его отбор
- •2. Микробиологическое исследование при сифилисе.
- •Иммунологическая диагностика сифилиса.
- •2. Схема основного опыта реакции Вассермана (при объеме 2.5 мл)
- •3. Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса большое значение имеет реакция Вассермана со спинномозговой жидкостью
- •Приложение № 3
- •Приложение 4.
- •Микробиологическое исследование.
- •Приложение№ 7 Лабораторная диагностика лептоспирозов
- •Микробиологическое исследование.
- •8. Источники информации:
- •Дополнительная:
- •Методические указания по выполнению практической работы с полным
- •Рекомендуемая литература. Основная:
- •Дополнительная:
3. Для диагностики поздних и латентных форм сифилиса большое значение имеет реакция Вассермана со спинномозговой жидкостью
Схема постановки опыта
№ п/п |
Ингредиенты |
Пробирки |
|||||
1 |
2 |
3 |
Контроли: антигена |
||||
4 (ликвора) |
антикомплементарность |
Гемоток сичность |
|||||
1. |
Спинномозговая жидкость (неразведенная), мл |
0,10 |
0,25 |
0,5 |
0,5 |
|
|
2. |
Антиген в рабочей дозе (ультраозвученный из трепонем), мл |
0,50 |
0,50 |
0,50 |
- |
0,5 |
0,5 |
3. |
Комплемент разведенный по титру (без % надбавок) |
0,50 |
0,50 |
0,50 |
0,5 |
0,5 |
- |
4. |
Физраствор, мл |
0,40 |
0,25 |
- |
0,5 |
0,5 |
1,0 |
Инкубация в термостате 1 час при +37о С |
|||||||
5. |
Гемолитическая смесь, мл |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
Инкубация в термостате 1 час при + 37о С |
|||||||
Результаты у больного сифилисом |
- Г |
- Г |
- Г |
+ Г |
+ Г |
+ Г |
Примечание: Спинномозговую жидкость не инактивируют, но если она содержит кровь, то её прогревают при + 56о С 30 минут. Мутную жидкость центрифугируют.
4. Реакция иммобилизации бледных трепонем (PИБT):
Принцип: угнетение движения бледных трепонем антителами сыворотки крови в присутствии комплемента.
Ингредиенты реакции:
- трепонемы - получают из яичка кролика, зараженного экспериментальным сифилисом. Яичко измельчают в специальной среде, не угнетающей подвижность спирохет;
- комплемент (сыворотка крови морской свинки);
- сыворотка обследуемого больного;
- сыворотка заведомо здорового человека.
Реакцию выполняют в меланжерах для лейкоцитов по Н. М. Овчинникову, который усовершенствовал методику Нельсона-Мауэра.
Схема постановки опыта:
№ п/п |
Ингредиенты |
№ меланжеров |
|||||||
1 |
2 контр. компле мента |
3 |
4 контр. антигена |
5 |
|||||
1. |
Сыворотка обследуемого |
До метки 1 |
До метки 1 |
- |
- |
- |
|||
2.
|
Взвесь тканевых спирохет в смеси с активным комплементом |
До метки 2 |
- |
До метки 2 |
- |
- |
|||
3.
|
Смесь тканевых спирохет с инактивированным комплементом |
|
До метки 2 |
-
|
До Метки 2
|
- |
|||
4.
|
Взвесь тканевых спирохет без комплемента |
- |
- |
- |
- |
До метки 2 |
Концы меланжера закрыть резиновой трубочкой (прекратить доступ воздуха). Поместить в термостат при + 35° С на 18 - 20 часов, после чего учитывать результаты:
- на оба края предметного стекла наносят по капле хорошо перемешанных смесей сыворотки с активированным и инактивированным комплементом;
- капли покрывают покровным стеклом 20 х 20 мм2.
- с помощью микроскопа (темнопольного) определяют количество подвижных и неподвижных трепонем, сначала в капле с активным, потом с инактивированным комплементом;
- процент специфически иммобилизированных спирохет в и опыте определяют по формуле: Х = Tк-То x 1000, где
Тк - число подвижных трепонем в контроле (с инактивированным комплементом);
То - число подвижных трепонем в опыте (с активным комплементом).
Результат считают положительным, если процент иммобилизации выше 50, слабоположительным - от 31 до 50, сомнительным - от 21 до 30, отрицательным - ниже 30.
5. Сведения о реакции иммунофлюоресценции, см. общий курс.