- •Билет №3
- •Билет №4
- •Билет №5
- •Билет №7
- •Билет №8
- •Тимоловая проба
- •Билет №11
- •Высаливание белков
- •Исследование денатурации белков
- •Билет №12
- •Билет №13
- •Биуретовая реакция
- •Ксантопротеиновая реакция
- •Реакция Миллона
- •Билет №14
- •Тимоловая проба
- •Билет №15
- •Влияние активаторов и ингибиторов на активность амилазы
- •Билет №16
- •Билет №17
- •Билет №18
Билет №3
1)Лиазы — ферменты, катализирующие разрыв С–О, С–С, C–N и других связей, а
также обратимые реакции отщепления различных групп субстратов не гидролити-
ческим путем. Выделяют 7 подклассов. Эти реакции сопровождаются образованием
двойной связи или присоединением групп к месту двойной связи. Класс насчитывает
около 230 ферментов. Лиазы — сложные ферменты.
Класс: 4. Лиазы
Подкласс: 4.1. Углерод-углерод-лиазы
Подподкласс: 4.1.1.Карбоксилазы
Классификационный номер: КФ 4.1.1.22
2)В И Т А М И Н В 1 2 ( К О Б А Л А М И Н , А Н Т И А Н Е М И Ч Е С К И Й)
Суточная потребность
2.5-5.0 мкг
Источники
• только животные продукты: печень (90-150 мкг%), рыба, почки, мясо
• синтезируется кишечной микрофлорой, однако не доказана возможность его
всасывания в нижних отделах ЖКТ.
Строение
Содержит 4 пиррольных кольца, ион кобальта (с валентностью от Co3+ до Co6+),
группу CN-
Строение коферментной формы
В организме при синтезе коферментных форм группа CN- заменяется на метил,
5-дезоксиаденозил, нитрит, ОН-группу.
Метаболизм
Для всасывания необходим внутренний фактор Кастла – гликопротеин, синтези-
руемый обкладочными клетками желудка.
В крови транспортируется в виде гидроксикобаламина специфическими транс-
портными белками (α- и β-глобулинами).
Биохимические функции
Перенос атома Н на атом С в обмен на какую-либо группу.
1. Участие в трансметилировании гомоцистеина при синтезе метионина. Данная
реакция обеспечивает удержание свободной фолиевой кислоты в клетке. При не-
хватке витамина В12 N5-метил-ТГФК накапливается, легко проникает через мембра-
ны и выходит из клетки. Возникает внутриклеточная недостаточность фолиевой ки-
слоты, хотя в крови ее может быть много.
2. Участвует в превращении пропионил-КоА в метил-малонил-КоА, а тот далее в сукцинил-КоА. Т.о. витамин обеспечивает полное окисление остатков жирных кислот с нечетным числом атомов в катаболических реакциях, утилизацию треонина, валина, изолейцина, метионина, боковой цепи холестерола.
Гиповитаминоз
1. Макроцитарная анемия, (количество эритроцитов снижено в 3-4 раза). Возникает
чаще у пожилых, но может быть и у детей Причиной является потеря фолиевой кислоты клетками при недостаточности витамина В12 и, как следствие, нарушение синтеза пуринов и dТМФ.
2. Неврологические нарушения:
• накопление нечетных жирных кислот вызывает жировую дистрофию нейронов и демиелинизацию нервных волокон, что проявляется в онемении кистей, стоп, ухудшении памяти;
• нехватка метионина опосредует снижение активности реакций метилирования и уменьшает синтез ацетилхолина.
3. Пернициозная анемия Аддисон-Бирмера – аутоиммунное заболевание, при котором образуются антитела против обкладочных клеток желудка либо против внут-
реннего фактора Кастла.
Причиной гиповитаминоза обычно бывает не отсутствие в пище,
а плохое всасывание из-за заболеваний желудка и кишечника (гаст-
риты и энтериты).
Лекарственные формы
Цианкобаламин
3)
Колориметрический метод определения активности а-амилазы в сыворотке крови и моче
а-Амилаза (диастаза, 1,4-а-0-глюкангидролаза, КФ 3.2.1.1) катализирует гидролиз ос-1,4-глюкозидных связей крахмала и гликогена до мальтозы и декстринов.
а-амилаза Крахмал + Н20 > Мальтоза + Декстрины
У здорового человека в крови в небольшом количестве содержится амилаза двух изоферментных типов: панкреатический - Р-тип (около 30%) и слюнной - S-тип (около 70%), которые попадают в кровь в результате естественного старения и отмирания клеток слюнных желез и поджелудочной железы. Фермент иммеет относительно низкую молекулярнуюЧассу (около 48000 Д), фильтруется в почечных клубочках и присутствует в моче. Соотношение изофер-ментов в моче иное, чем в крови: Р-тип - 70%, S-тип - до 30%.
Реактивы
1) Фосфатный буфер, рН 7,0, 2) крахмальный субстрат, 3) 9 ммоль/л раствор NaCI, 4) осаждающий раствор: 1,85 ммоль/л MgS04, сульфосалициловая кислота (2 ммоль/л).
Материалы исследования Сыворотка крови.
Принцип а-Амилаза катализирует гидролиз нерастворимого цветного крахмального субстрата с образованием синего, растворимого в воде красителя. Количество освобожденного красителя пропорционально каталитической активности фермента.
Расчет Активность фермента в сыворотке крови находят по приложенной калибровочной таблице, исходя из полученной оптической плотности.
При определении активности фермента в моче полученную по таблице каталитическую активность необходимо умножить на 2.
Если проба имеет высокую активность, ее разбавляют физиологическим раствором, определение проводят снова, а результат умножают на разведение.
I Нормальные величины
Сыворотка 140-350 Е/л
Моча 1000-2000 Е/л
Практическое значение Повышение активности фермента происходит главным образом при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панкреатите активность в крови и моче возрастает в 10-30 раз. Возрастание активности фермента выявляется при беременности, почечной недостаточности, кишечной непроходимости, заболеваниях желчных путей, диабетическом кетоацидозе, некоторых опухолях легких и яичников, поражении слюнных желез.
Оформление работы Отмечают принцип метода, регистрируют результаты анализа и делают вывод о возможной патологии.