- •13.1.1 Полипептид, иэт, цв. Реакции
- •13.2.1 Декарбоксилирование пвк
- •13.3 Фад – химические свойства
- •13.4 Роль желчи в процессе пищеварения и всасывания жиров
- •13.5.1 Нуклеопротеиды, гидролиз
- •14.1.1 Биосинтез мочевины
- •14.2.1 Рнк
- •14.3 Гормоны, роль в регуляции глюкозы
- •14.4 Над и надф
- •14.5.1 Синтез полипептидов
- •14.5.2 Активация по Курциусу:
14.5.1 Синтез полипептидов
В 1888 году химик Данилевский предположил, что белки – это полипептиды, линейные молекулы, которые образуются в результате действия карбоксильной группы одной аминокислоты с амино-группой другой аминокислоты с отщеплением воды и образуется дипептид:
Образуется амидная связь (для белков пептидная), эти пептидные связи разделены только одним углеродным атомом. На основании биуретовой реакции Данилевский сделал такой вывод, что реакция раствора белка с сульфатом меди в щелочной среде, образуется сине-фиолетовое окрашивание, образуется хелатный комплекс с ионами меди, в результате того, что пептидная связь в белковых молекулах имеет специфическое строение. Вследствие кето-енольной таутомерии она на половину двойная, на половину одинарная. Характерная реакция с щелочным раствором Cu(OH)2, способны давать вещества, которые содержат не менее двух пептидных связей. Биуретовая реакция характерна для биурета, для малонамидаи белков.
Для того, чтобы окончательно доказать, что белки – это полипептиды в 1901 году Фишер синтезировал полипептид, независимо от него Гофман тоже синтезировал полипептид. Главное в синтезе белка – это защита аминогруппы и активация карбоксильной группы для того, чтобы синтез был направленным.
1. Синтез полипептида по Фишеру:
Расщепляется протолитическими ферментами.
2. Метод Бергмана, Зервеса, Курциуса.
Защита по Зервесу: для защиты аминогрупп используются бензиловый эфир Cl – угольной кислоты.
14.5.2 Активация по Курциусу:
надо снять защиту с 1-ой аминокислоты.
Снятие защиты по Бергману – восстановление на катализаторе водородом
Твердофазный синтез полипептидов и белков, специфической особенностью полипептидного синтеза является огромное число однотипных операций. Был разработан метод Мерифилодм. Мономеры – это аминокислоты, которые используются для синтеза, содержащие защищенную аминогруппу и активированные карбоксильные группы – синтоны. Мерифилд предложил: первый мономер закрепить на полимерной смоле и все последующие операции проводятся с полипептидом, растущем на полимерной основе, к смоле добавляют попеременно очередной синтон и реагент для удаления концевой защитной группы. Химические стадии перемежаются соответствующими промывками. В течение всего процесса полипептид остается связанным со смолой. Этот процесс легко можно автоматизировать, запрограммировав смену потоков через колонку. В настоящее время разработаны приборы синтезаторы. На завершающей стадии синтеза полипептид ковалентной связан со смолой, снимается с этой смолы и защитная группа удаляется. Одной из самых главных проблем в твердофазном синтезе является рацимизация аминокислот во время синтеза. Это особенно опасно в этом синтезе, т.к. промежуточных стадии выделения рациматов не существует. Способов отделения в данный момент не существует, но есть условия, чтобы как можно меньше была рацимизация. Сам Мерифилд получил этим методом сразу несколько полипептидов, был получен брадикидин – гормон с сосудорасширяющим действием, ангиотензин – гормон, повышающий кровяное давление, фермент рибонуклеаза, которая катализирует гидролиз РНК.
Выход продуктов этим методом значительно не сравним с методами, которые применялись до этого. С помощью автоматизации можно использовать этот метод в промышленных масштабах.
У каждого полипептида имеется N-конец, а другой С-конец. Аминокислота, которая принимает участие изменяет окончание на ил. Глицил-валил-тирозил-гистедин-аспарагил-пролин.