- •Глава 1 Дыхание бактерий
- •Глава 2 Принципы и методы выделения чистых культур бактерий
- •2.1 Бактериологическое исследование
- •Посев петлей
- •Посев шпателем
- •Метод разведений Метод поверхностных штрихов. Методы выделения чистых культур, основанные на механическом принципе
- •Колонии по методу Дригальского
- •Метод штрихов
- •Методы выделения чистых культур, основанные на биологическом принципе
- •Этапы выделения чистых культур микроорганизмов
- •Выделение чистой культуры анаэробных бактерий
- •Выделение и идентификация анаэробных микроорганизмов
- •Среды для культивирования анаэробных микроорганизмов
- •Идентификация микроорганизмов с помощью бактериофагов
- •Литическое действие бактериофагов (справа – позитивный результат)
- •Фаготипирование бактерий
- •Определение бактериоциногенности микроорганизмов
- •Бактериоцинотипирование (зоны задержки роста)
- •Молекулярно генетические методы
- •Реакция гибридизации
- •Итог: Основные виды идентификации чистых культур
- •Характеристика колоній
- •Ориентировочная реакция агглютинации на стекле. В центре позитивный результат.
- •Важнейшие группы химиотерапевтических средств и механизмы их антимикробного действия
- •Колонии Streptomycetes, которые продуцируют стрептомицин
- •Механизм действия антибиотиков
- •Важнейшие группы антибиотиков и механизмы их противомикробного действия Антибиотики, подавляющие синтез бактериальной клеточной стенки
- •Полусинтетические пенициллины
- •Варианты цефалоспоринов
- •Антибиотики, нарушающие функции цитоплазматической мембраны (цпм) микроорганизмов
- •Антибиотики, ингибирующие синтез белка на рибосомах бактериальных клеток
- •Аминогликозидные антибиотики
- •Группа тетрациклинов
- •Левомицетин
- •Линкомицин
- •Макролиды
- •Антибиотики, ингибирующие рнк-полимеразу
- •К препаратам, которые используются во врачебной практике, ставятся определенные требования:
- •Резистентность микрорганизмов к антибиотикам
- •Плазмиды резистентности
- •Комбинированное действие антибиотиков
- •Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- •Основные наборы дисков, которые рекомендуются для определения чувствительности в зависимости от вида выделенной культуры и патологического материала
- •Предельные значения диаметров зон задержки роста и значения мпк антибиотиков для интерпретации результатов
- •Основные принципы рациональной антибиотикотерапии
- •V. Установление длительности курау антибиотикотерапии.
Реакция гибридизации
После чего вносят ДНК- или РНК-зонды, выдерживают определенное время, делают многоразовую промывку, чтобы удалить реагенты, которые не прореагировали. Если использовали зонды с радиоактивной меткой, результат определяют с помощью g-счетчика. В случае, когда зонд мечен ферментом (например,пероксидазою), то к такому зонду добавляют субстрат (например, ортофенилдиамин). Ферментация субстрату приводит к изменению цвета, который можно наблюдать невооруженным глазом.
Полимеразная цепная реакция (ПЛР) – один из новейших методов выявления и идентификации бактерий и вирусов в исследуемых материалах. Принцип реакции базируется на многочисленном копировании (селективной амплификации) исследуемой ДНК ферментом ДНК-ПОЛИМЕРАЗОЙ. Образованные копии ДНК идентифицируют с помощью метода электрофореза.
ПЦР
Реакцию проводят в три этапа. На первом этапе при температуре 95 °С проходит денатурация двонитковои молекулы ДНК, ее розплетення и расхождение нитей.
На втором этапе (ренатурация) происходит гибридизация праймеров, то есть образование дволанцюгових комплексов праймер-матрицы, которые необходимы для инициирующего синтеза ДНК. Температура смеси при этом снижается до 55 °С.
На этапе синтеза (75 °С) проходит удлинение комплементарных нитей ДНК с помощью фермента ДНК-ПОЛИМЕРАЗы. Проводят 15-35 циклов синтеза.
Многоразовое повторение приводит к обогащению ДНК в исследуемом материале.
Метод ПЦР очень чувствителен. Его используют для выявления любого инфекционного агента, если известна нуклеотидна последовательность гена (или его фрагмента), специфического исключительно к данному возбудителю. Целесообразно использовать ПЛР в тех случаях, когда бактерии или вирусы имеют высокую изменчивость и находятся в исследуемом материале в малом количестве (даже одна молекула геномнои ДНК).
В настоящий момент ПЦР принадлежит к высокоэффективному молекулярно генетическому методу, какой доступный многим лабораториям. Длительность исследования составляет 2‑3 часа. Особенно целесообразно использовать его при определении и идентификации возбудителей туберкулеза, сифилиса, гонореи,микоплази, вирусов Спида, герпесов, гепатитов, рота- и энтеровирусов.
Итог: Основные виды идентификации чистых культур
Морфологическая идентификация – определение вида бактерий за их морфологическими признаками.
Принимают во внимание форму и внешние признаки бактерии (кокки, палочки, спирохеты), навнисть капсулы, споры, жгутиков.
Морфологическая и тинкториальна идентификация бактерий.
Культуральная идентификация – определение вида бактерий за их культуральными свойствами.
Принимают во внимание характер роста бактерий на жидких и плотных питательных средах (характеристика колоний, рост на жидкой среде).
Характеристика колоній
Биохимическая идентификация – определение вида бактерий за их биохимическими признаками.
Принимают во внимание цукролитични, протеолитические, пептолитични, редуцирующие, гемолитические и другие ферментативни свойства бактерий.
Рост микроорганизмов на среде Олькеницкого. 1 - незасеянная среда; 2 - микроорганизмы разлагают глюкозу до кислоты; 3 - микроорганизмы разлагают глюкозу и лактозу до кислоты и газа; 4 - микроорганизмы образуют сероводород; 5 - рост микроорганизмов, которые не разлагают сахара.
Рис. Определение редуцирующих свойств бактерий.
Серологическая идентификация – определение вида бактерий за их антигенным строением.
Для этого используют специфические аглютинуючи антимикробные сыворотки.