Раздел 4. Химия и обмен углеводов

РАБОТА 9. ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ

Цель работы:ознакомиться с современным энзиматическим мето-дом количественного определения глюкозы в биоло-гических жидкостях, который широко применяется в клинической практике.

Задачи:

• определить содержание глюкозы в предлагаемых образцах;

• проанализировать полученные результаты и сделать вывод.

Принцип метода.Глюкозооксидаза катализирует окисление глюкозы кислородом воздуха с образованием эквимолярного количества пероксида водорода. Под действием пероксидазы перекись водорода окисляет фенол, который превращается в бензохинон, окрашенный в розовый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации глюкозы в пробе.

Ход работы.В три обычные химические пробирки наливают:

1. в опытную – 0,01 мл сыворотки крови или свежей мочи,

2. в стандартную – 0,01 мл стандартного раствора глюкозы,

3. в контрольную – 0,01 мл дистиллированной воды.

Во все пробирки добавляют по 2 мл рабочего реагента, смесь тщательно перемешивают и пробы помещают в термостат на 10 минут при 37°С. После окончания инкубации измеряют оптическую плотность опытной и стандартной пробы против контроля в кюветах на 5 мм (или 3 мм) при длине волны 490-510 нм (на ФЭКе).

Окраска стабильна в течение часа после окончания инкубации при условии отсутствия воздействия прямых солнечных лучей.

Примечание.Количество глюкозы в моче определяют только при положительной качественной реакции на глюкозу. Реакция считается положительной, если смесь из 0,01 мл исследуемой мочи и 0,5 мл рабочего реагента через 15 минут приобретает розовую окраску.

Результаты:расчёт концентрации глюкозы проводят по формуле:

С = Е_о/Е_ст × 10,

где Е_о– оптическая плотность опыта,

Е_ст– оптическая плотность стандарта,

10 – концентрация стандартного раствора глюкозы в моль/л.

Нормальное содержание глюкозы, определённое этим методом, в сыворотке или плазме крови здорового человека составляет 4,2-6,1 ммоль/л, в моче – <0,8 ммоль/л.

Выводы:

РАБОТА 10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОЛЕРАНТНОСТИ К САХАРНОЙ НАГРУЗКЕ

Цель работы: ознакомиться с методом диагностикиIиIIтипа сахарного диабета, принципами изучения толерант-ности к сахарной нагрузке.

Задачи:

• определить уровень сахара в предложенной сыворотке крови;

• по результатам построить сахарную кривую.

Изучение реакции организма на однократную нагрузку глюкозой представляет большой клинический интерес. У здорового человека одноразовый приём 50-100 г глюкозы вызывает временное повышение сахара в крови – пищевую, или алиментарную, гипергликемию.

Однократная проба с сахарной нагрузкой заключается в следующем. Утром натощак у обследуемого определяют содержание сахара в крови, после чего ему дают per osглюкозу (1 г на 1 кг веса) или сахарозу (1,5 г на 1 кг веса) с небольшим количеством воды. Повторно определяют концентрацию глюкозы в крови через каждые 15 минут в течение первого часа после приёма сахара и через каждые 30 минут – последующие три часа. Полученные результаты отражают графически и получают сахарную кривую. При анализе сахарной кривой обращают внимание на начальное содержание сахара, быстроту и высоту подъёма, продолжительность гиперглюкоземии и характер её снижения.

У здоровых людей уже через 15 минут после приёма глюкозы концентрация её в крови повышается и достигает максимума между 30 и 60 минутами. Этот максимум обычно не превышает почечный порог и не приводит к глюкозурии. Затем уровень глюкозы в крови снижается и к 120-й минуте возвращается к исходному, а иногда бывает ниже его вследствие избыточного выделения инсулина поджелудочной железой. Через три часа содержание глюкозы в крови возвращается к исходному уровню.

Гликемические кривые отличаются от нормы при сахарном диабете, повреждении паренхимы печени (при гипатитах, циррозе), гипо- и гипертиреозе, болезни Аддисона, тяжёлых анемиях, заболеваниях центральной нервной системы, инфекционных болезнях, токсических состояниях.

Ход работы.У испытуемого (добровольца) натощак берут из пальца 0,1 мл крови и определяют в ней количество глюкозы глюкозооксидазным методом (см. работу 13).

После взятия крови испытуемому дают съесть сахарозу в течение не более 5 минут. Сахар можно запивать небольшим количеством воды. Затем у испытуемого берут кровь из пальца через 30, 60, 90 и 120 минут после приёма сахара и определяют в ней содержание глюкозы глюкозооксидазным методом (см. работу 13).

Результаты:

Концентрация глюкозы в крови (ммоль/л)
До нагрузки глюкозой	После приёма глюкозы, мин
	30	60	90	120

Сахарная кривая

Выводы: