Методы обнаружения днк вирусов папилломы человека

(М.А.Башмакова, 1999)

Категории методов	Названия методов
Неамплификационные Амплификационные Сигнальные амплификационные	Дот-блот, саузерн-блот гибридизация, гибридизация insituна фильтре и в ткани Полимеразная цепная реакция – ПЦР, лигазная цепная реакция – ЛЦР Система гибридной ловушки – DigeneHybridCaptureSystemII

Неамплификационные методы определения ДНК папилломавируса в настоящее время с диагностической целью не используются (только в научно-исследовательских лабораториях). Среди амплификационных методов наибольшее распространение получила ПЦР, благодаря которой были получены ценные сведения о типах ДНК. Вместе с тем, в мире еще нет стандартных реактивов для всех типов папилломавирусов, практически используются праймеры и другие реактивы собственного лабораторного изготовления. Система гибридной ловушки или, как ее еще называют, система двойной генной ловушки использует РНК-ДНК гибридизацию в растворе с последующей «хвостовой» иммунологической реакцией между гибридом РНК пробы – ДНК мишени и специфическими антителами к этому гибриду.

В некоторых лабораториях используется цитологический метод. Обнаружение койлоцитарных клеток в биоптате считается наиболее достоверным признаком наличия папилломавирусной инфекции. Возможно, определить вирус в пораженной ткани с помощью электронной микроскопии. Вирус папилломы человека, в отличие от многих других вирусов, не размножается в культуре клеток (invitro) и не может быть получен в виде массы вирусных частиц.

Несмотря на очевидную иммуногенность основных антигенов возбудителей (особенно «ранних» неструктурных белков), титры образующихся антител весьма низки, и проведение серологической диагностики лишено всякого смысла.

Лечение.

В настоящее время ни один из методов не является 100% эффективным, т.к. при любом методе лечения или их комбинации наблюдаются частые рецидивы.

I. Кондиломы.

1. Противовирусные препараты - бенафтона в виде 0,5% - 1% - 2% мази; риодоксола (трийодрезорцина) – 0,25% и 0,5% мазь; 3% оксолиновая мазь.

2. Применение цитотоксических препаратов в виде местных аппликаций – подофиллина, подофилотоксина, 5-фторурацила.

3. Деструктивные методы – физические (криодеструкция, лазеротерапия, диатермокоагуляция), химичес­кие (трихлоруксусная кислота, ферезол, солкодерм).

4. Хирургические методы (в том числе и электрохирургическое иссечение).

5. Иммунологические методы. Эти препараты чаще всего используются в комбинированной терапии, хотя, в отдельных случаях может проводиться и монотерапия (интерфероны). В клинической практике применяют α-, β- и γ- интерфероны; индукторы интерферонов; рекомбинантные интерлейкины (ИЛ-2).

6. Комбинированные методы – сочетание различных методов лече­ния (криотерапия, лазерное иссечение, электрокоагуляция, диатермокоагуляция, озонотерапия, интерфероны, цитотоксические препараты).

II. Бородавки (кожные папилломы).

Довольно часто бородавки могут исчезать спонтанно, хотя риск рецидивов остается достаточно высоким в течение всей жизни. По косметологическим показаниям их можно удалять («выжигать») салициловой кислотой, настойкой йода, формалином, применением лазера, а также замораживанием или термокоагуляцией. Менее желательно их хирургическое лечение, т.к. в большинстве случаев бородавки или папилломы вновь появляются на прежнем месте.

III. Папилломатоз гортани. Лечение проводится ЛОР-врачом. В настоящее время в мировой практике лечения больных, страдающих ювенильным папилломатозом гортани, преобладает комбинированный метод, включающий хирургическое или лазерное удаление папиллом и иммуномодулирующее воздействие на организм препаратами интерферонов. Это связано с тем, что в патогенезе этого заболевания ведущую роль играют нарушения иммунной системы - снижение содержания Т-лимфоцитов, NK-клеток; угнетение их функциональной активности; деффектность системы интерферона и др.

Поскольку полного излечения от папилломавирусной инфекции в настоящее время достичь невозможно, ряд исследователей, целью терапии считает удаление кондилом и бородавок, а не элиминация возбудителя. Эффективность лечения кондилом составляет 50-94%, уровень рецидивирования исчисляется 25% в течение трех месяцев после лечения. Рецидивы по большей части связаны с реактивацией, а не реинфекпией.

Лечение беременных и детей.

Во время беременности видимые кондиломы часто рецидивируют, имеют тенденцию к разрастанию и становятся рыхлыми. Лечение беременных желательно проводить на ранних сроках бере­менности, соблюдая особую осторожность. Рекомендуется применять только физические деструктивные методы (криотерапию, СО₂-лазер). Цитологические препараты – подофиллин, подофиллотоксин и 5-фторурацил противопоказаны для лечения беременных.

Аналогичные подходы должны соблюдаться и при выборе метода лечения детей. Вирус папилломы человека 6 и 11 типов могут вызывать ларингеальный папилломатоз у детей. Путь передачи инфекции (трансплацентарный, при прохождении плода по родовому каналу или постнатальный) в каждом конкретном случае трудно или невозможно установить. Описаны случаи ларингеального папилломатоза у детей, рожденных с помощью кесарева сечения, поэто­му кесарево сечение не должно выполняться с единственной целью – предупредить заражение папилломавирусом новорожденного.

Особенности течения папилломавирусной инфекции на фоне ВИЧ-инфекции.

• Активация латентной инфекции.

• У больных имеется тенденция к тяжелому течению и генерализации процесса.

• Бородавки и кондиломы склонны к резкому увеличению размеров.

• Устойчивость к терапии.

• Частое обнаружение клеточных дисплазий вызванных папилломавирусом.

• Различные типы ВПЧ в сочетании с саркомой Капоши.

Профилактика и динамическое наблюдение.

Для женщин с генитальными кондиломами, вызванными вирусами низкого риска, после проведения лечения ре­комендуется осмотр гинеколога и исследование на папилломавирус через три и шесть месяцев и далее не реже одного раза в год. При выявлении клеточной дисплазии и положительных результатов на папилломавирусы, после лечения, диспансерное наблюдение проводится через три, шесть месяцев и далее не реже одного раза в шесть месяцев у гинеколога-онколога (цитологическое и вирусологическое исследование). Мужчины после лечения кондилом должны наблюдаться у уролога не реже одного раза в год. Дети после лечения ювенильного папилломатоза гортани должны находится под наблюдением педиатра и ЛОР-врача. Взрослые после лечения папилломатоза гортани подлежат наблюдению у ЛОР-врача. Лица с атипичным течением и устойчивой к терапии папилломавирусной инфекцией должны быть обследованы на вирус иммунодефицита человека.