3. Методы определения микрофлоры организма человека
Для изучения нормальной микрофлоры применяются бактериоскопический, бактериологический, генетический (ПЦР) методы.
Бактериоскопический методимеет большое самостоятельное значение для тех биотопов организма человека, в которых обитает большое количество различных видов микроорганизмов (полость рта, кишечник, влагалище). Он позволяет получить общее представление о составе микрофлоры (преобладание грам+ или грам- бактерий той или иной формы - кокки, диплококки, стрептококки, палочки, бациллы, стрептобациллы, фузиформные бактерии, наличие грибов и т.д.), а также выявить те микроорганизмы, которые не удается культивировать на питательных средах.
Бактериологический методдля биотопов с широким спектром микроорганизмов (полость рта, кишечник, влагалище) нужно выполнять с учетом данных бактериоскопии.
Основные принципы бактериологического исследования:
использование качественной (видовой состав) и количественной (количественное соотношение разных видов) оценки микрофлоры;
первичный посев материала без предварительного обогащения, так как обогащение нарушает количественные соотношения видов;
использование большого набора различных питательных сред, подбор условий культивирования (аэробные, анаэробные и др.).
Однако следует отметить, что из 1000 различных видов микроорганизмов толстого кишечника культивируется только 10%. В связи с этим актуальным является использование генетических методовизучения микрофлоры организма человека, позволяющих выявить некультивируемые виды и более точно охарактеризовать микрофлору различных биотопов.
В настоящее время некоторые лаборатории используют для диагностики дисбактериоза косвенные методы, направленные на определении некоторых метаболитов кишечной микрофлоры.
Для скрининговых исследований на дисбактериоз используются достаточно быстрые биохимические методы, легко осуществляемые на практике. На кафедре микробиологии Тверской ГМА модифицирован экспресс-метод диагностики дисбактериоза кишечника, принцип которого заключается в том, что при взаимодействии протеиназ бактериальных культур с казеином, содержащимся в агаровой среде, происходит его расщепление (Червинец В.М. и соавт., 2003). При добавлении коагулянта белка на мутном фоне агара выявляются зоны просветления вокруг лунок с казеинолитически активными микроорганизмами. Далее при использовании определенных критериев величины зоны просветления проводят оценку степени дисбиоза.
4. Определение понятия дисбактериоз и причины его возникновения
Дисбиоз (дисбактериоз)— это изменения качественного и/или количественного состава симбиотической микрофлоры кишечника, возникающие под воздействием различных причин. Дисбактериоз характеризуется исчезновением или снижением числа облигатных ее представителей с одной стороны и увеличением количества условно-патогенных микробов (энтеробактерий, стафилококков, грибов родаCandidaи др.), которые в норме встречаются в незначительных количествах. В итоге такие дисбиозные микробные ассоциации не в состоянии выполнить защитные и физиологические функции биотопа. Дисбактериоз не является самостоятельной нозологической формой заболевания из-за отсутствия специфического возбудителя и типичной периодичности процесса, представляя собой совокупность синдромных проявлений, объединенных рядом причинно-следственных связей.
К основным этиологическим факторам дисбактериоза относятся: экстремальные воздействия стрессовые ситуации, промышленные отходы, загрязняющие окружающую среду (воздух, почву, воду), воздействия радиоактивных веществ, антибиотики, резкая смена климата и географических регионов проживания, иммунодефицитные состояния, заболевания ЖКТ инфекционной и неинфекционной природы, злокачественные новообразования, анатомо-физиологические нарушения в кишечнике и другие (рис. 16). Развитие дисбактериоза приводит к отягощению течения основного заболевания и ухудшает его прогноз и исход. В ряде случаев дисбактериоз, развиваясь вторично, становятся затем доминирующим в формировании патологического состояния человека и могут явиться в последующем причиной самостоятельного заболевания человека.
Рис. 16. Факторы, влияющие на микробиоценоз