2. Приготовление мазка крови, окрашивание по Романовскому-Гимзе

Препарат крови больного готовят по следующей методике: предметным стеклом, отступая 1–2 см от края, прикоснуться к капле крови, выступившей после укола. Быстро, чтобы кровь не свернулась, ребром шлифованного стекла распределить ее по всей поверхности стекла.

Приготовление мазков. 

Взяв предметное стекло за длинные края, прикасаются его поверхностью (отступя 0,5—1 см от узкого края) к капле крови (но не к коже). Предметное стекло держат на столе или в левой руке за узкие края. Правой рукой приставляют шлифованное стекло узким краем к стеклу с кровью слева от капли под углом 45° и продвигают его вправо до соприкосновения с кровью.

Выжидают, пока кровь расплывется по всему ребру шлифованного стекла, и затем легким быстрым движением ведут его справа налево до тех пор, пока не будет исчерпана вся капля. Капля крови должна быть небольшой и соразмерена так, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1—1,5 см до его края. Нельзя прекращать размазывание и отнимать стекло раньше, чем капля будет исчерпана. Нельзя также сильно нажимать на стекло, так как многие клетки могут оказаться поврежденными. Хорошо сделанный мазок тонок, имеет желтоватый цвет и оканчивается «метелочкой».

Окрашивание по Романовскому-Гимзе.

На предметном стекле готовят мазок культуры бактерий (спирохет) или крови, фиксируют в жидком фиксаторе (метаноле, этаноле, смеси этанола с эфиром 1:1). На мазок наносят рабочий раствор красителя Романовского-Гимзе (1 капля красителя на 10 капель дистиллированной воды) на 10-20 минут. Затем препарат промывают водой и высушивают на воздухе.

Эритроциты крови окрашиваются в розово-коричневый, лейкоциты в сиреневый (их ядра – в фиолетовый), бактериальные клетки – в красно-фиолетовый.

2. Стерильный пересев микроорганизмов в жидкую среду

При посеве в жидкую питательную среду петлю погружают в среду или материал, растирают на стенке сосуда, а потом смывают жидкой средой, слегка встряхивая пробирку.

2. Стерильный пересев микроорганизмов уколом в столбик агара

При посеве в столбик плотной питательной среды иглой с посевным материалом прокалывают столбик по центру и осторожно вынимают, не повреждая получившийся канал.

7. Стерильный пересев организмов на скошенную поверхность

При посеве на скошенную поверхность плотной питательной среды петлю с посевным материалом вносят в конденсационную воду и скользящими движениями растирают его штрихом по поверхности среды снизу вверх, направляя штрих от одной стенки к другой.

8. проведение реакции аглютинации на стекле.

8. Оценка биохимической активности культуры микроорганизмов на средах Гисса

Прокариоты характеризуются неодинаковой способностью использовать в метаболизме различные соединения углерода. Чтобы выяснить такие особенности, микроорганизмы высевают на синтетические среды, содержащие в качестве единственного источника углерода различные моно-, ди- и полисахариды, многоатомные спирты, органические кислоты, углеводороды (среды Гисса или так называемый «пестрый ряд»). Рост микроорганизмов на таких средах часто сопровождается накоплением органических кислот и газов, что регистрируют по изменению рН среды. Для этого в среды добавляют индикаторы (чаще бромтимоловый синий) из расчета 2 мл 1,6 % спиртового раствора на 1 литр среды. Среды засевают суспензией клеток микроорганизмов и термостатируют 1–5 суток. Рост на среде с данным источником углерода определяют по помутнению среды, образованию пленки или осадка, изменению цвета питательной среды, которое указывает на образование кислых или щелочных продуктов метаболизма. Об образовании газа свидетельствует его накопление в поплавке (при посеве в жидкую среду) или разрывы в агаризованной среде. Для обнаружения фермента лактазы (расщепляющего молочный сахар – лактозу) используют плотные дифференциально-диагностические среды (Эндо, Плоскирева), содержащие лактозу и индикатор. Бактерии, способные сбраживать лактозу, дают на среде окрашенные колонии, вследствие изменения рН среды.

Среды Гисса (пестрый ряд). Состоят из питательного агараили или бульона (100 мл) с добавлением 1 % р-ра различных сахаров (лактозы, глюкозы, мальтозы, маннита, сахарозы) и красителя бромтимолового синего или индикатора Андреде (кислый фуксин в 1 н. р-ре гидроксида натрия). Готовые среды синего цвета (с индикатором Андреде бесцветные). При ферментации соответствующего сахара бактериями выделяются кислоты и цвет среды изменяется на зеленый затем на желтый (среды с индикатором Андреде краснеют).