Микротест–системы для определения чувствительности к антимикробным препаратам

Микротест–системы предназначены для быстрого определения клинической чувствительности к антибиотикам бактерий определенных видов или родственных групп. Тестируемые препараты в стандартных концентрациях находятся в лунках готовых пластиковых планшетов. Определяют чувствительность исследуемой культуры к двум концентрациям каждого антибиотика: средней терапевтической и максимальной. Материал из изолированной колонии с помощью мерной бактериологической петли (объем 1 мкл) вносят в 5 мл стандартной питательной среды, содержащей индикатор, и готовят суспензию. Готовую бактериальную суспензию разливают в лунки планшета по 0,1 мл и инкубируют при оптимальных для данного вида бактерий условиях температуры и газового состава среды. О росте бактерий судят по изменению цвета индикатора, что позволяет существенно сократить сроки исследования. Если бактерии сохраняют жизнеспособность в присутствии антибиотика, выделение продуктов метаболизма приводит к изменению цвета индикатора. Отсутствие изменения цвета свидетельствует о полном подавлении жизнедеятельности микроба. Результаты определяют через 4 ч инкубации с помощью спектрофотометра.

Количественное определение чувствительности бактерий к антимикробным препаратам с помощью е–теста

Е-тест представляет собой вариант диффузного метода, позволяющий определять МПК антибиотика. Вместо дисков используют стандартные полимерные полоски, приготовленные по специальной технологии (AB BIODISK) и содержащие иммобилизованные антимикробные препараты, нанесенные в виде непрерывного градиента концентрации. На другой стороне полоски Е-теста нанесена шкала значений МПК. При помещении полоски на поверхность агара регулируемый процесс диффузии обеспечивает создание в питательной среде вокруг полоски стабильного градиента концентрации препарата, соответствующего шкале. Процедура определения чувствительности с помощью Е-теста осуществляется аналогично тестированию методом дисков. После инкубации посева вокруг полоски образуется зона задержки роста, имеющая форму эллипса. Значение МПК соответствует месту пересечения эллипсовидной зоны с полоской Е – теста. Для интерпретации результатов (оценки клинической чувствительности) используют стандартные критерии

8. Описание культуральных свойств микроорганизмов на жидких питательных средах

Рост микроорганизмов в жидкой питательной среде более однообразен. Он сопровождается помутнением среды, образованием плёнки или осадка. Нередко рост микроорганизмов сопровождается появлением запаха, пигментацией среды, выделением газа. Последнее обнаруживают по образованию пены, пузырьков, а также при помощи «поплавков» – маленьких запаянных с одного конца трубочек. Поплавок помещают в пробирку запаянным концом вверх и следят, чтобы он полностью был заполнен средой. В случае выделения газа он скапливается в поплавке в виде пузырька.

Для описания характера роста микроорганизмов в жидких средах их выращивают на мясо-пептонном бульоне или другой среде, обеспечивающей хороший рост.

Бульонные культуры не взбалтывают и наблюдения ведут осторожно, сохраняя их в спокойном состоянии. При наблюдении отмечают:

1. наличие осадка и его свойства (скудный он или обильный, плотный, рыхлый, слизистый или хлопьевидный);

2. наличие плёнки на поверхности и её внешний вид (тонкая, плотная или рыхлая, гладкая или складчатая);

3. наличие и степень помутнения (слабая, умеренная или сильная).

На жидких питательных средах проявляются следующие культуральные свойства микроорганизмов:

- рост с равномерным помутнением жидкой среды характерен для факультативных анаэробов;

- придонный рост с образованием осадка на дне пробирки дают анаэробные микроорганизмы. Образующийся осадок может быть обильным или скудным, крошковидным, гомогенным, волокнистым или в виде крупных хлопьев. По консистенции осадок может быть вязким, слизистым, хрупким или пастообразным;

- пристеночный рост характерен для некоторых бактерий и актиномицетов. В этом случае образуются рыхлые хлопья или компактные зерна, прикрепляющиеся к внутренней поверхности стенок сосуда;

- поверхностным ростом отличаются аэробные микроорганизмы. Они образуют пленку различной плотности и консистенции. Пленка может быть нежной и тонкой, исчезающей при встряхивании пробирки (например, так растут клетки Bacillus subtilis). Для грибов свойственно образование плотной, сухой, кожистой пленки. Она мелко снимается целиком в виде круглого диска, соответствующего диаметру сосуда;

- бульон в присутствии палочковидных форм даёт после взбалтывания волнистость – по бульону как бы пробегают шелковистые нити.