Рецепторы и маркеры т-лимфоцитов
T-лимфоцит несет на своей поверхности специфический рецептор для распознавания антигена . Однако, тогда как рецептор B-лимфоцита - это мембраносвязанный мономер Ig , рецептор T- лимфоцита ( TCR ) представляет собой гетеродимер, состоящий из двух (альфа- и бета-) цепей (молекулярная масса каждой - 40-50 кДа), которые, безусловно, не являются продуктами иммуноглобулиновых генов.
Существует два типа TCR, каждый из которых связывается с разными типами T-лимфоцитов.
TCR1 , состоящий из гамма- и дельта-цепей, появляется на ранних стадиях онтогенеза.
TCR2 состоит из альфа- и бета-цепей. Каждая цепь образует два домена; один из них имеет относительно неизменную структуру, гомологичную характерной укладке цепи иммуноглобулинов а другой обладает большей структурной изменчивостью, поскольку по своему строению напоминает вариабельные домены Ig ( Fab -фрагмент). Вариабельный участок связывается с антигеном и молекулами MHC , однако структурная основа узнавания пока не ясна. TCR2 является рецептором большинства T- клеток.
Альфа и бета-цепи совместно обуславливают распознавание специфичности антигена. У всех иммунокомпетентных T-лимфоцитов антигенный рецептор нековалентно, но прочно связан в комплекс с молекулой CD3 ( T3 ), которая состоит из пяти пептидных цепей (CD3-гамма, -дельта, -эпсилон, -зета-зета и -зета-ню ( рис. 16 ) и участвует в передаче сигнала от узнающего антиген альфа,бета-гетеродимера внутрь клетки. Логично рассматривать весь рецептор как девяти-пептидный комплекс, образованный гетеродимером и CD3, и который может связываться с другими мембранными пептидами, такими как CD3-p21 и, возможно, CD4 и CD8 .
Помимо рецепторов, на т-лимфоцитах существуют специфические маркеры, которые появляются на т-лимфоцитах в процессе их дифференцировки так известно что: Основные молекулы-маркеры, имеющиеся на поверхности Т-лимфоцитов: CD2 (он же рецептор к эритроцитам барана), CD3, CD4 (у Т-хелперов), CD8 (у Т-супрессоров). На активированных Т-лимфоцитах появляются рецепторы для ИЛ-2, HLA-DR антигены, рецептор к трансферрину (CD71.
Эти маркеры были обнаружены благодаря специфических моноклональных антител- Получены моноклональные антитела, которые реагируют лишь с одним антигеном клеточной мембраны. С помощью набора моноклональных антител можно идентифицировать субпопуляции лимфоцитов. Имеются наборы антител к дифференцировочным антигенам лимфоцитов человека. Антитела составляют относительно немного групп (или «кластеров»), каждая из которых узнает один единственный белок клеточной поверхности. Создана номенклатура дифференцировочных антигенов лейкоцитов человека, выявляемых моноклональными антителами. Эта CD-номенклатура (CD — cluster of differentiation — кластер дифференцировки) базируется на группах моноклональных антител, реагирующих с одними и теми же дифференцировочными антигенами.
Методы идентификации т-лимфоцитов
Идентификация т-лимфоцитов основана на специфических маркерах и рецепторах т-лимфоцитов:
Использование для идентификации иммунокомпетентных клеток моноклональных антител (МКАТ) к различным СD-антигенам в настоящее время является наиболее точным методом
Принцип идентификации СD-антигенов заключается в следую-щем. Выделенные из крови мононуклеары обрабатывают соответствующими МКАТ. После этого визуализируют результаты реакции с помощью флуоресцентной или ферментной метки. При использовании флуоресцентной метки с люминесцентной микроскопией клетки с соответствующими СD-антигенами имеют светящиеся ободки. При визуализации ферментной меткой (например, пероксидазой) в световом микроскопе определяется цветная реакция взаимодействия СD-антигенов клеток и соответствующих меченых антител. Присоединение МКАТ к определенным типам клеток можно фиксировать также при помощи лим-фоцитотоксического теста. Последний основан на способности МКАТ класса IgM и IgG и комплемента оказывать цитотоксическое воздействие на соответствующую популяцию лимфоцитов, что выявляется с помощью красителя.
Универсальным методом исследования дифференцировочных антигенов лейкоцитов является лазерная проточная цитометрия, которая позволяет на основе иммунофлюоресценции определить численность различных популяций и субпопуляций лимфоцитов, а также плотность рецепторов на клеточной мембране.
Наиболее широко используемым в клинике и в то же время достаточно информативным и дешевым методом определения численности популяций лимфоцитов является метод розеткообразования.
Для идентификации Т-лимфоцитов человека используется способность Т-клеточного антигена (CD2) этих клеток взаимодействовать с эритроцитами барана и образовывать так называемые розетки в реакции розеткообразования Е-РОК. Послед-няя заключается в «прилипании» эритроцитов барана к поверхности Т-лимфоцитов человека при их смешивании с образованием розеток, в центре которых находится лимфоцит, а по периферии эритроциты. Аналогичным методом с помощью эритроцитов мыши определяются В-лимфоциты.
Как правило, определяют количество Т-общих лимфоцитов (общее количество лимфоцитов с маркерами CD2) и количество Т-активных лимфоцитов. Субкласс активных Т-лимфоцитов относится к менее зрелым клеткам, хорошо коррелирует с Т-клеточной функцией, клиническим течением заболевания, то есть отражает функциональную активность Т-клеточного звена иммунитета. Определяют данный субкласс путем изменения условий постановки реакции определения Т-общих лимфоцитов (соотношение между лимфоцитами и индикаторными частицами, время инкубации). Число Т-лимфоцитов в периферической крови здорового человека составляет 40-60%, или от 1200 до 1600 в 1 мкл крови. В норме величина соотношения общих и активных Т-лимфоцитов составляет 0,57+0,03.