3.2. Лейкоз крупного рогатого скота.

Лейкоз крупного рогатого скота – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы. Заболевание протекает бессимптомно, проявляется лимфоцитозом и опухолевыми образованиями в кроветворных и других органах и тканях. Первый случай лейкоза крупного рогатого скота изложен немецким исследователем O.Siedagrotzkyв 1916 г. Впервые термин «лейкоз», введенный по отношению к лейкемическим заболеваниям кур, перенесен в патологию крупного рогатого скота в 1958 г. А как заболевание опухолевой природы лейкоз впервые рассматривали с 1875 г. Это были работы русских ученых К.Славянского и А.Щастного. Они сравнивали лейкемические разрастания с опухолевыми как по внешнему виду, так и по биологическим свойствам тканевого роста.

В настоящее время твердо сложилось представление, что лейкоз отличается избыточным разрастанием патологической кроветворной ткани как в пределах органов и систем, где кроветворение осуществляется у здоровых организмов в период постнатального онтогенеза, так и вне их, где кроветворение имеет место у эмбрионов и плода.

Наиболее характерный признак лейкоза – изменение кроветворных органов и периферической крови, в связи с этим заболевание относят к болезни системы крови.

При лейкозе происходит размножение, как правило, недифференцированных клеток в экстрамодуллярных очагах кроветворения, что является одним из обоснований опухолевой природы лейкоза.

Распространение.

Лейкозы животных относятся к числу наиболее распространенных болезней, которые встречаются во всех странах мира. Приводимые ранее данные по распространенности лейкоза крупного рогатого скота, основанные на результатах клинико-гематологической диагностики болезни, не могли служить основой для достоверной оценки эпизоотической ситуации. Лишь открытие ВЛКРС, разработка серологических методов диагностики скрытой и явной инфекции позволяют иметь точные сведения о распространении болезни.

Наибольшая распространенность лейкоза установлена в странах с развитым молочным скотоводством. В России лейкоз крупного рогатого скота стали устанавливать в большинстве регионов в 60 - 70 гг. прошлого столетия. В последующий период отмечался резкий рост числа неблагополучных пунктов и заболевших лейкозом животных. В настоящее время среди инфекционных болезней крупного рогатого скота, лейкоз занимает первое место и встречается во всех субъектах РФ, наиболее неблагополучными являются зоны разведения черно-пестрых пород. По данным разных исследователей, в неблагополучных по лейкозу хозяйствах выявляют от 5 до 90% зараженных ВЛКРС животных. При первичном серологическом (РИД) исследовании на лейкоз в Ленинградской области у 41% коров были установлены антитела к ВЛКРС.

В последние годы просматривается четкая тенденция увеличения заболеваемости животных лейкозом, несмотря на ежегодное уменьшение поголовья. Инфицированность скота в среднем по стране остается высокой, и в разные годы составляла от 10,0 до 12, 3% от числа исследованных животных. Наивысший уровень инфицированности скота вирусом лейкоза отмечен в Краснодарском крае (44,5%), Тюменской (32,9%), Самарской (30,8%), Псковской(25,3%), Владимирской (25,0%), Ростовской (21,9) областях. В таблице 17 представлены данные всех имеющихся показателей за 12 лет.

Таблица 17.

Результаты гематологического и серологического исследований

крупного рогатого скота на лейкоз в субъектах Российской Федерации

за 1990-2001 г.г.

Год.	Поголовье крупного рогатого скота, млн. гол.		Число животных.
	Всего	В т. ч. коров.	Исследовано гематологически.	Выявлено больных лейкозом.	Убито на мясокомбинате.	Исследовано серологически (РИД).	Выявлено инфицированных.
1990	57,0	20,5	5090496	97417	59557	9042801	1708456
1991	54,7	20,6	5269165	94928	48509	8732808	1247774
1992	52,2	20,2	5313584	93483	48002	9281147	1352902
1993	48,9	19,8	5233000	93426	43962	9901687	1245198
1994	43,3	18,4	5239240	98159	46073	10466099	1287377
1995	39,7	17,4	5267434	111836	49546	11112567	1376520
1996	35,1	15,9	5098309	118208	48193	11516399	1476416
1997	31,5	14,5	4775174	108974	45660	10702289	1253921
1998	28,5	13,5	5050495	94239	44683	11403734	1410403
1999	28,0	13,1	5035846	104403	42199	11750643	1513403
2000	27,2	12,7	4891904	114717	47145	12995262	17787929
2001	26,9	12,2	4493398	111428	641	14146542	1457312

Так, поголовье крупного рогатого скота уменьшилось вдвое, а коров по сравнению с 1990 годом на 59,5%. Вместе с тем количество больных составило в 1990 г. 97417, а в 2001 г. 111428 голов. Увеличение количества инфицированного поголовья повлекло за собой появление животных, находящихся во второй, гематологической стадии болезни, у которых изменена морфологическая картина крови.

В ряде регионов РФ хозяйства, при массовой инфицированности животных ВЛКРС, не во всех случаях объявляют хозяйства неблагополучными по лейкозу, тем самым усугубляя эпизоотическую обстановку в стране.

Многие европейские страны сейчас считаются свободными от ВЛКРС.

Экономический ущерб.

Экономический ущерб от лейкоза крупного рогатого скота достигает значительных размеров и слагается из недополучении молока, приплода, ограничений в реализации молока и племенного молодняка, преждевременной выбраковке коров и быков производителей, утилизации туш, расходов на проведение оздоровительных мероприятий. Кроме того, установлено достоверное снижение питательной ценности молока инфицированных ВЛКРС коров из-за уменьшения показателей общего белка и большинства аминокислот, в том числе и 5 незаменимых. Продукты от больных лейкозом животных (молоко, мясо) содержат метаболиты триптофана и других циклических аминокислот.

Возбудитель.

ВЛКРС имеет структурное и генетическое сходство с вирусом Т-клеточного лейкоза человека NTLV-1 иNTLV-2, что позволило международному комитету по таксономии вирусов в 1990г. отнести эти вирусы к одному роду -NTL-ВLVсем.Retroviridae.

Клетками-мишенями для ВЛКРС служат В-лимфоциты. Интегрированный в геном В-лимфоцитов ВЛКРС остается недоступным для воздействия специфических антител и персистирует в организме на протяжении всей жизни животного.

У инфицированных животных вирус в свободном состоянии выявляют крайне редко, в самом начале инфекции. Поэтому, можно прийти к заключению, что в большинстве случаев крупный рогатый скот становится инфицированным благодаря контакту с инфицированными клетками.

Эпизоотология лейкоза крупного рогатого скота.

В экспериментальных условиях к ВЛКРС восприимчивы животные других видов, в частности: овцы, козы, свиньи, кролики, лошади, обезьяны, хомяки, морские свинки, однако в природе не выявлены животные гетерологичных видов, которые были бы естественными резервуарами, источниками и переносчиками ВЛКРС.

Источником возбудителя болезни являются животные, зараженные ВЛКРС и. животные, с изменениями крови, характерными для лейкоза. Последние представляют особую опасность в распространении инфекции.

Появление и распространение лейкоза в ранее благополучных хозяйствах связано с завозом животных из неблагополучных по этому заболеванию мест и зон. Совместное содержание больных или зараженных ВЛКРС животных со здоровыми ведет к постоянному увеличению в стаде серопозитивных животных.

Передача ВЛКРС восприимчивому крупному рогатому скоту может осуществляться со всеми секретами и экскретами при попадании в них лимфоцитов, зараженных ВЛКРС. Установлено, что для экспериментального заражения телят достаточно ввести им внутрикожно 2500 лимфоцитов крови от зараженного животного (такое количество лимфоцитов содержится примерно в 0,0005 мл цельной крови). Взаимодействие ВЛКРС с восприимчивым крупным рогатым скотом происходит на уровне генетического аппарата лимфоидной клетки и обуславливает пожизненную персистенцию вируса в макроорганизме.

Среди основных факторов, обуславливающих передачу вируса лейкоза, наибольшее значение имеет перенос возбудителя через кровь и препаратов из нее, при ветеринарных и зоотехнических обработках.

В сперме инфицированных быков-производителей ВЛКРС не выявлен. Не наблюдается определенного влияния передачи ВЛКРС потомству от серопозитивных быков-производителей при естественном оплодотворении серонегативных коров. Однако у быков с воспалением генитальных органов в сперме могут быть лимфоциты, инфицированные ВЛКРС. Экспериментально установлено, что коров можно инфицировать путем нанесения таких лимфоцитов на слизистую оболочку матки. Изучение возможности передачи вируса лейкоза при эмбриопересадках подтвердили отсутствие передачи ВЛКРС от коров доноров коровам-реципиентам через эмбрионы.

Механизм передачи ВЛКРС еще окончательно не изучен. Экспериментально подтверждена возможность заражения животных путем переноса ВЛКРС при ректальной пальпации в случае повреждения слизистой оболочки. Не получено достаточных доказательств о влиянии жалящих и кровососущих насекомых в распространении лейкоза.

В отношении роли секретов слюнных, слезных желез, мочи и кала в распространении возбудителя большинство исследователей приходит к выводу, что вирус лейкоза в них не обнаруживают, а при контаминации их кровью инфицированного ВЛКРС он не может в них сохраняться длительное время, т.е. эти секреты и экскреты не могут служить существенными факторами передачи ВЛКРС.

ВЛКРС может передаваться трансплацентарно с инфицированными лимфоцитами матери благодаря способности лимфоцитов мигрировать в межклеточном пространстве и таким образом преодолевать плацентарный барьер. До 20% телят от зараженных ВЛКРС матерей могут рождаться инфицированными. Вирус лейкоза присутствует в молозиве и молоке инфицированных коров. Инокуляция молока и молозива и присутствующих в них клеточных компонентов телятам индуцирует у них инфекцию.

Учитывая все это, надо полагать, что в практических условиях основной способ заражения восприимчивого организма сопряжен с нарушением правил асептики, т.е. с попаданием лимфоцитов в организм восприимчивого животного при инъекциях, нумерации, хирургических операциях, фиксации животных при проведении ветеринарно-зоотехнических манипуляций. Совместное проведение отелов здоровых, инфицированных ВЛКРС и больных животных способствует распространению инфекции.

Наблюдениями отмечена прямая корреляция заболеваемости лейкозом с концентрацией скота и плотностью его размещения. Серологический и эпизоотологический анализ данных о роли молока, как фактора передачи ВЛКРС, показал, что в естественных условиях заражение телят вирусом лейкоза этим путем происходит весьма редко и не позволяет относить молоко коров зараженного стада к основному фактору передачи ВЛКРС в естественных условиях. Молоко и молозиво могут являться фактором передачи вируса при условии, если эти секреты контаминированы кровью коров-вирусоносителей. Предполагается, что колостральные антитела предохраняют телят от заражения в течение времени их персистенции в организме, а именно до 4-5 месячного возраста.

Особая роль в эпизоотическом процессе при лейкозе отводится возрастному фактору восприимчивости животных к заражению ВЛКРС. Новорожденные телята в основном свободны от ВЛКРС. Среди молодняка наименьший уровень зараженных животных устанавливают в 6 месяцев, по сравнению со старшими по возрасту животными. С увеличением возраста и длительностью пребывания животных в неблагополучном по лейкозу стаде, отмечается увеличение уровня зараженности животных.

Наименьший уровень зараженности ВЛКРС установлен у коров 1-й лактации, в последующем у взрослых животных наблюдается увеличение числа инфицированных. Сезонность и климатические условия не оказывают влияния на распространение болезни. Заражение происходит как в стойловый, так и пастбищный период. Инцидентность (т.е. количество вновь зарегистрированных зараженных животных в течение 6-месяцев) проявления инфекции ВЛКРС сравнительно невысокая - 2,5-5% и характеризуется низким индексом ее горизонтальной передачи.

Интенсивность появления новых случаев заражения животных зависит не только от наличия всех элементов эпизоотической цепи, но также их активности и взаимодействия, что определяет характер эпизоотического процесса.

В целях обеспечения эпизоотологического мониторинга и надзора за течением эпизоотического процесса используют такие эпизоометрические данные как заболеваемость, смертность, летальность, инцидентность, превалентность и др. На их основе проводят оценку напряженности эпизоотического процесса и эпизоотологическое картографирование. Вместе с тем, следует отметить существенную особенность, что при отсутствии активного вмешательства человека, умения влиять и управлять этим сложным процессом, угасания эпизоотии не происходит. В этом случае требуется серьезная корректировка в проведении оздоровительных мероприятий и усиление контроля за их выполнением.

Считается, что для человека и других животных лейкоз крупного рогатого скота не опасен. Однако ученые на этот счет осторожны. После опубликования серии работ о близком генетическом и антигенном родстве вируса лейкоза крупного рогатого скота с вирусом Т-клеточного лейкоза человека диагностика и профилактика лейкоза приобрела особую актуальность. Вирус лейкоза крупного рогатого скота не вызывает лейкоза человека и не относится к возбудителям зоотропогенозных болезней. Но у больных животных в крови и молоке появляются различные метаболиты — вещества, обладающие лейкозногенной потенцией. При прогрессировании болезни они накапливаются, поэтому молоко от гематологически больных коров в пищу не допускается. Молоко от коров подозрительных на заболевание лейкозом разрешается употреблять в пищу и перерабатывать на молочные продукты после пастеризации или кипячения.

На степень поражения и распространенности лейкоза определенное влияние оказывает наследственный, зонально-географический, почвенный, радиационный и другие экологические факторы.

Патогенез.

Раскрытие процесса возникновения лейкоза, начиная от внедрения ВЛКРС в организм, и развития патологических изменений, обусловливающих клинический синдром болезни, позволяет выяснить сущность патогенеза.

Патогенез лейкоза крупного рогатого скота определяется характером взаимодействия микроорганизма с макроорганизмом, выраженным тропизмом к тканям и органам животного и роли эндо- и экзогенных факторов.

К ведущим факторам, которые обуславливают клиническую картину лейкоза у крупного рогатого скота, можно отнести состояние и иммунологическую реактивность макроорганизма, его чувствительность к этиологическому агенту, механизм заражения и массивность инфекта. Однако к настоящему времени ещё не все патогенетические показатели полностью изучены.

Патогенез лейкоза связан с эволюционным тропизмом ВЛКРС к кроветворным органам и тканям, а также состоянием макроорганизма. Взаимодействие микро- и макроорганизма проявляется или в виде инапарантной инфекции, или гематологических изменений белой крови, либо образования опухолей кроветворных органов.

Злокачественная трансформация клеток кроветворных органов характеризуется сложным процессом, который обусловливается как вирусными, так и клеточными генами и ферментными системами. Но ВЛКРС принадлежит роль инициатора эпигеномных нарушений процессов нормального созревания и дифференцировки этих клеток. На основании многолетних экспериментальных данных Л.А.Зильбера сложилось мнение, что онкогенный вирус, проникнув в клетку, не вызывает её гибели, как наблюдается при других вирусных инфекциях. Потребовались дополнительные эксперименты для расшифровки механизма взаимодействия опухолевого вируса с клеткой.

При лейкозе крупного рогатого скота выявлены изменения структуры в лимфоидных клетках рибонуклеопротеидных комплексов, ведущих к упрочению связи между РНК и белками.

Из биохимической характеристики патогенеза заболевания установлено, что развитие лейкоза у крупного рогатого скота, как правило, сопровождается гипоальбуминемией и диффузной гипергаммаглобулинемией. Снижается содержание в сыворотке крови альбуминов до 1,72% (норма около 4%), что связано со сложным комплексом изменений их метаболизма, с патологическим нарушением паренхимы печени, проницаемости и целостности стенок кровеносных и лимфатических сосудов в различных частях тела, специфическим влиянием злокачественного процесса, а в ряде случаев и с нарушением обменной функции желудочно-кишечного тракта.

У больного лейкозом крупного рогатого скота в связи с гипоальбуминемией, вызывающей комплекс недостаточности важных функций, выполняемых альбуминами как переносчиков метаболитов, гормонов (жирных кислот, билирубина, кальция, тироксина, гидрокортизона, эстрогенов и т.д.) и белков, усугубляется дискоординация физиолого-биохимических процессов в организме, обусловливая комплекс вторичных расстройств у животных. В некоторых случаях повышается уровень альфа-глобулинов, в основном гликопротеидов, принимающих активное участие в ответной реакции организма.

Выявлено нарушение метаболизма аминокислот, проявляющееся в изменении состава свободных аминокислот сыворотки крови, органов, а также плазмы и лейкоцитов. На глубокие расстройства нормального обмена аминокислот при лейкозе указывают результаты исследований, выявившие характерные изменения в содержании триптофана и его метаболитов. При этом указывается, что некоторые метаболиты триптофана обладают лейкозогенными свойствами.

Таким образом, злокачественная трансформация клеток представляет сложный процесс, обусловленный вирусами, функциональными нарушениями генетического аппарата и клеточных ферментативных систем. Однако инициатор и эпигеномный регулятор малигнизации – вирус. При лейкозе крупного рогатого скота первично повреждается звено ДНК-РНК, которое обеспечивает определённую устойчивость, фиксацию полученного повреждения. Затем после изменения характера и количества генетической информации возникают соответствующие нарушения энзимных систем, вызывающих расстройства регуляции и неуправляемый рост.

Злокачественный процесс, в своём развитии, претерпевает две фазы. В первой фазе под влиянием бластомогенных агентов нормальные клетки превращаются в латентные (дремлющие) опухолевые. Во второй фазе формируется опухолевый разрост, клетки длительное время находятся в латентном состоянии и имеют двусторонние связи с организмом. Дальнейшее развитие опухолевого процесса зависит от функционального состояния иммунокомпетентной системы, нарушения гомеостатических механизмов.

Есть данные, указывающие на то, что канцерогенный эффект вирусов проявляется в зависимости от иммунологического состояния организма, воздействия стресс-факторов, отмечается более выраженная генетическая устойчивость . В патогенетическом плане при изучении экспериментального лейкоза, развития инфекционного процесса и перечисленных теорий по основам злокачественной трансформации, можно сделать следующее заключение. Возникновение и развитие лейкозного процесса связано с внедрением в организм вируса лейкоза крупного рогатого скота. Внедрение вируса вызывает ответную реакцию организма, которую устанавливают выявлением в сыворотке крови животных антител к антигену ВЛКРС. На этой стадии абсолютное большинство животных пожизненно остаётся в состоянии бессимптомного вирусоносительства.

Стадии течения лейкоза крупного рогатого скота.

Эпизоотологические исследования с учётом анализа результатов серологического, клиникогематологического и патоморфологического контроля реакции взаимодействия ВЛКРС с макроорганизмом в конкретных условиях внешней среды позволяют определить следующие стадии инфекционного процесса при лейкозе : инкубационная, бессимптомного вирусоносительства, гематологическая, опухолевого проявления заболевания.

Инкубационный период.Экспериментально установлено, что после заражения телят лимфоцитами периферической крови от инфицированного донора вирус обнаруживали в селезёнке реципиента спустя 8 дней после инокуляции. В крови этот вирус выявляли через 14 дней и позже.

Результаты, полученные разными исследователями по выяснению сроков инкубационного периода у крупного рогатого скота при лейкозе и онковирусной инфекции, неоднозначны. Имеются сведения о заражении подопытных до появления специфических антител в период от 15 дней до 4-6 месяцев.

В инкубационном периоде антитела в сыворотке крови появляются в ответ на заражение организма ВЛКРС не сразу, а спустя определённое время.

Стадия бессимптомного вирусоносительства.Состояние антителоносительства не вызывает у животных видимых физиологических или патологических отклонений. У коров не наблюдается нарушений воспроизводительной функции и деятельности молочной железы, приросты массы молодняка соответствуют кормовым рационам, полностью сохраняются поведенческие рефлексы.

В состоянии вирусоносительства животные могут находиться на протяжении всей своей жизни. Только у незначительной части животных период сопровождается признаками болезни.

Гематологическая стадиялейкоза протекает на алейкемическом, суб- и лейкемическом уровнях.

Алейкемическая картина крови, которую устанавливают по процентному содержанию лейкоцитов в лейкоцитарной формуле, обычно проявляется без изменений общего количества лейкоцитов в единице объёма крови. По продолжительности чаще всего длится 1-3 года.

Более продолжителен период гематологического проявления болезни – фаза хронического течения с сублейкемическими показателями крови. Чаще всего сублейкемическое течение лейкоза устанавливают у коров 3-5 лет. У больных лейкозом коров с сублейкемической картиной крови отмечают постепенное нарастание общего количества лейкоцитов в периферической крови с преобладанием лимфоидных форм. Такое постепенное нарастание лейкоцитов обычно регистрируют постоянно, иногда – с явлениями чередования ремиссий и рецидивов.

Лейкемическая фазагематологической стадии лейкоза характеризуется гиперлейкоцитозом (более 40 тыс. в 1мкл крови) и повышением содержания в лейкоцитарной формуле молодых малодифференцированных клеток. По продолжительности лейкемическое течение лейкоза регистрируется 3-3-3,5 года.

Опухолевая (клиническая) стадияможет наблюдаться у животных разного возраста. Она чаще начинается в «недрах» суб- и лейкемической фазы гематологической стадии лейкоза. Продолжительность опухолевой стадии зависит от вовлечения в патологический процесс лимфатических узлов, регионарных жизненноважным органам.

Клинические признаки.

Симптомокомплекс при лейкозе крупного рогатого скота обусловлен функциональными нарушениями и морфологическими изменениями в органах и тканях кроветворной и негэмопоэтических систем. Характер симптомов зависит от опухолевого поражения той или иной системы органов, а полнота их проявления от стадии течения лейкозного процесса. В предлейкозном состоянии и в начальной стадии болезни симптомы обычно отсутствуют, сохраняется продуктивность и воспроизводительная функция животного. Первые клинические признаки появляются в развернутой стадии лейкоза и прогрессируют по мере его развития. Переход гематологической стадии в клиническую происходит после отела, при интоксикации, вторичной инфекции.

Помимо органов кроветворения, часто в патологический процесс вовлекаются другие органы, не имеющие непосредственного отношения к кроветворению. Поэтому клинические признаки подразделяются на специфические, характеризующие лейкоз, и неспецифические, отображающие функциональные нарушения той или иной системы органов в результате их опухолевого поражения.

Неспецифические симптомы представляют собой расстройства общего характера, которые могут наблюдаться при других болезнях (расстройство пищеварения, вялость, исхудание). Симптомы, отражающие опухолевые поражения внутренних органов, только в сочетании с показателями крови приобретают диагностическое значение.

Наиболее характерный признак - местное или регионарное увеличение лимфатических узлов и селезёнки, изредка экзофтальмия (фотография на титульном листе - левосторонняя экзофтальмия у коровы, подозрительной в заболевании лейкозом). У крупного рогатого скота чаще регистрируется лимфолейкоз, ретикулолимфосаркому.

Также имеет место и лейкоз молодняка с нередким опухолевым поражением зобной железы. При этом наблюдают затрудненное дыхание, хрипы, слизистое истечение из носовой полости. Диагноз ставят по увеличенным лимфоузлам.

В редких случаях обнаруживают кожную форму лейкоза, описанную H.Bendixеn(1963 г.). На теле животного появляются узелковые припухлости по 2,5 см в диаметре, хорошо заметные на шее, спине, крестце и бёдрах. В течении нескольких недель происходить облысение припухлости, её поверхность покрывается корочкой, состоящей из эпителия и экссудата. Корочки отпадают, облысевшие участки вновь покрываются шерстью. Однако через несколько месяцев после кажущегося выздоровления наступает рецидив с появлением тех же признаков болезни.

Патологоанатомические изменения.

У животных обращают внимание на величину органов, распространенность опухолевых разрастаний и их связь с лимфатическими узлами, системный характер поражения. Наиболее часто поражаются лимфатические узлы, селезёнка, костный мозг, печень, сердце, почки, сычуг, скелетные мышцы.

Проблемы диагностики и иммунитета.

В нашей стране, согласно утвержденным «Методическим указаниям по диагностике лейкоза крупного рогатого скота(2000г.)» диагностические исследования проводятся серологическими (РИД, ИФА), молекулярно-биологическими (ПЦР), гематологическими, патологоморфологическими методами, а также биопробой. Основным методом диагностики является РИД. Недостатки этого метода заключаются в ограниченном диапазоне чувствительности (выявление только преципитирующих антител), длительной постановки реакции (не менее 2-х суток), невозможность автоматического учета результатов. Использование её в качестве основного метода диагностики не приводит к полному оздоровлению хозяйства, региона, так как животные на ранней стадии инфицирования, а также со слабым гуморальным иммунитетом остаются не выявленными, а соответственно являются источниками возбудителя инфекции.

С использованием серологической диагностики в нашей стране разработаны эффективные методы оздоровления неблагополучных по лейкозу популяций крупного рогатого скота, основанные на выявлении инфицированных животных в стаде, выращивании здорового молодняка и постепенном вытеснении инфицированных коров здоровыми нетелями.

Эти методы прошли успешную, широкую апробацию в различных зонах страны. Они вошли в нормативные документы по борьбе с лейкозом.

Однако в процессе оздоровления хозяйств от лейкоза с использованием РИД в некоторых случаях возникают трудности, связанные с так называемым выпадением реакции. У отдельных животных, дававших положительную реакцию в РИД, в сыворотки крови в определенный период времени антитела с помощью РИД не выявляют. Это связано с тем, что антитела к антигенам ВЛКРС образуются волнообразно. У отдельных животных с малой иммунологической реактивностью в этот период времени антитела в сыворотке крови меньше уровня чувствительности РИД. Иногда снижение титра антител и даже «выпадение реакции» наблюдали у глубокостельных коров, когда иммуноглобулины накапливаются в секрете молочной железы.

В некоторых случаях, например в оздоровленном стаде, не имевшим контакта с другими, через несколько месяцев или даже лет выявляют единичных животных с антителами к ВЛКРС. Латентный период инфекции, индуцированной ВЛКРС , сравнительно короткий. Экспериментально установили, что при заражении овец и телят различными методами (подкожно, внутримышечно, внутривенно, на слизистую носоглотки) скрытый период инфекции (период с момента заражения до появления антител к вирусным антигенам) у различных животных продолжался от 2 недель до 1,5 мес. Поэтому выделение положительно реагирующих в РИД животных через длительный период времени, после удаления всех антителоносителей, можно объяснить характерным для некоторых хронических инфекций, к которым относится ВЛКРС, явлением иммунологической толерантности, когда наблюдается вирусоносительство без антителообразования.

Иммунологическая толерантность - это частичная или полная утрата организмом способности вступать в иммунную реакцию со специфическим антигеном.

В основе развития толерантности лежит несколько механизмов. Это состояние достигается прежде всего взаимодействием антигена с незрелыми лимфоцитами крови в перинатальном периоде. Существует правило: чем больше антигеноспецифических зрелых лимфоцитов присутствует в организме, тем сложнее индуцировать иммунологическую толерантность к этому антигену. В организме со сформировавшейся иммунной системой чужеродные антигены разрушаются и элиминируются до того, как к ним вырабатывается толерантность.

При лейкозе крупного рогатого скота состояние толерантности может возникнуть в случае внутриутробного заражения плода инфицированными лимфоцитами матери в период до появления иммунной компетенции, то есть в первые три месяца развития эмбриона.

Присутствие в стаде животных с толерантной инфекцией затрудняет процесс оздоровления хозяйства от лейкоза. Оставаясь опасными источниками инфекции, они не могут быть выявлены серологическими методами. С целью ускорения полного оздоровления популяции крупного рогатого скота от лейкоза целесообразно на последней стадии оздоровления, когда выявляют единичных положительно реагирующих в РИД животных, исследовать все поголовье методом, позволяющим определить непосредственно вирус или провирус у инфицированных животных. При этом наиболее перспективной является полимеразная цепная реакция (ПЦР). Применение прямого диагностического метода полезно также для установления диагноза у телят моложе 6 месячного возраста, когда антиелоносительство кроме персистенции вируса может быть обусловлено колостральными антителами, полученными с молозивом от инфицированной матери. Кроме этого существенным тормозом в оздоровлении является инфицированные животные, у которых длительное время (до нескольких лет) титры антител не выходят на уровень чувствительности серологических методов. Эти животные служат источником инфекции, оставаясь среди здорового поголовья.

Разработка в конце 80-х годов ХХ века полимеразой цепной реакции, ставшей основой нового направления диагностики наследственных болезней, вирусных инфекции и идентификации личности в криминалистике , несомненно, дала новый импульс развитию ВЛКРС – диагностики. В ветеринарную практику ПЦР – тест – системы были впервые внедрены для диагностики лейкоза, бруцеллеза, хламидиоза, листериоза, бешенства и др. Являясь самым чувствительным на сегодняшнее время методом прямого обнаружения инфекционных агентов, ПЦР не требует иммунологического ответа организма на проникновение в него возбудителя, что дает возможность следить за ранними стадиями проявления болезни.

В случае ВЛКРС – инфекции ПЦР позволяет выявить фрагменты провирусной ДНК, встроенные в геном инфицированного животного или вирусную РНК, тем самым представляя собой прямой метод диагностики в отличие от непрямых РИД и ИФА. Особенностью ВЛКРС – инфекции является отсутствие (за крайне редким исключением) в организме инфицированного животного зрелых вирионов или антигенов ВЛКРС , и наиболее характерным признаком инфекции, вплоть до появления гематологических изменений, служит наличие антител к структурным белкам ВЛКРС. ПЦР позволяет осуществлять диагностику ВЛКРС – инфекции независимо от наличия или отсутствия антител с высокой степенью специфичности и чувствительности. Существенно ограничивает применение метода его высокая стоимость и трудоемкость.

После завершения оздоровительных мероприятий необходим постоянный контроль благополучия. Вместе с тем проведение поголовных серологических исследований на этой стадии становится экономически нецелесообразным. Развитие ИФА как более чувствительного по сравнению с РИД метода серологической диагностики открыло новые возможности для контроля за оздоровлением скота. Этот метод позволяет выявить антитела в низких титрах, например в сыворотках крови на ранних стадиях развития инфекции, в индивидуальных и сборных пробах молока и сыворотки крови.

Но современные методы диагностики такие как ПЦР, молекулярная гибридизация с меченным ДНК-зондом – не смотря на проводимые серьезные исследования, мало используются в рутинной диагностике лейкозов.

Первичный диагноз в благополучном по лейкозу хозяйстве устанавливается на основании положительных результатов серологического и гематологического или патологоморфологического исследований. Для гематологических анализов на лейкоз используют «лейкозный ключ» (таблица 18), по которому учитывают отклонения от признанных показателей нормального количества лимфоцитов.

Таблица 18.

Модифицированный «лейкозный ключ».

Возраст животных, лет.	Здоровые животные.	Гематологически подозрительные по лейкозу животные.	Гематологически положительные по лейкозу животные.
	Число лейкоцитов тыс. в 1 мкл крови.	Абсолютное число лимфоцитов тыс. в 1 мкл крови.	Абсолютное число лимфоцитов тыс. в 1 мкл крови.
От 2 до 4	До 11	8-10	Свыше 10
От 4 до 6	>10	6,5-9	>9
6 и старше	>9	5,5-8	>8

Если количество лейкоцитов у исследуемых животных будет ниже числа, указанного во второй графе данной таблицы, то результат исследования считают отрицательным. Если выше, то готовят мазки и высчитывают лейкоцитарную формулу. Абсолютное количество лимфоцитов в 1 мкл крови определяют путем умножения количества лейкоцитов на процент лимфоцитов в лейкоцитарной формуле. Если абсолютное количество лимфоцитов будет в пределах, указанных в графе 3, животное считается подозрительным по заболеванию, а показатели 4 графы характерны для положительных, то есть больных лейкозом животных.

Животных, подозрительных в заболевании лейкозом, подвергают дополнительным 2-3 кратным исследованиям с интервалом в 2-3 месяца. Если при втором и третьем дополнительном исследовании будут получены отрицательные результаты, таких животных признают здоровыми, а при установлении изменений в крови, характерных для больных и подозрительных в заболевании животных, считают больными.

Следует отметить, что с помощью этого метода не удаётся обнаружить случаи с лейкопеническими и алейкемическими проявлениями болезни.

При лейкозе крупного рогатого скота может наблюдаться как универсальное вовлечение в опухолевый процесс лимфатических узлов многих областей тела животного, так и изолированное поражение отдельных или нескольких лимфоузлов грудной или брюшной полости с развитием некрозов. Поэтому при дифференциальной диагностике необходимо принимать во внимание возможное наличие у животных актиномикоза, туберкулеза, паратуберкулёза и бруцеллеза, при котором кроме лимфаденита, могут отмечаться некротический гепатит и мастит. Поэтому для уточнения диагноза проводят гистологическое исследование печени, почек, различных участков кишечника, селезенки, легких, сердца, скелетной мускулатуры, принимая во внимание, что наиболее характерные изменения обнаруживают в лимфатических узлах в сочетании с поражение различных органов.

Лечение.

До настоящего времени средств для лечения и профилактики лейкоза крупного рогатого скота, не смотря на серьезные исследования не найдено. В связи с этим поиски веществ, способных предотвратить патологический процесс на разных стадиях инфекции, защитить организм от заболеваний, связанных с понижением естественной резистентности, являются весьма актуальными. В настоящее время большой интерес у ученых вызвали препараты, получаемые на основе ультрадисперсных соединений. Ультрадисперсное порошковое железо относится к группе малотоксичных веществ с большой терапевтической широтой. Под действием препарата повышается естественная резистентность организма, выражающаяся в снижении заболеваемости и отхода молодняка, увеличении темпов роста и работоспособности, улучшении клинической картины, внешнего вида, экстерьерных особенностей. Кроме этого препарат активизирует лимфоидные образования имунокомпетентных органов, нормализует гемопоэз в красном костном мозге, оказывает определенное влияние на Т – и Б-систему иммунитета, выработку интерферона и фактора некроза опухолей. На показатели крови здорового и инфицированного ВЛКРС скота ультрадисперсное железо действует неоднозначно. Предполагают несколько вариантов его действия. Один из них таков – ультрадисперсное железо избирательно метит пораженные вирусом клетки, в результате чего меняется поверхностный заряд лимфоцитов, конфигурация клетки и её антигенные детерминанты. В результате лимфоцит становится чужеродным для данного организма и выводится из него. Таким образом, через 2,5 месяца применения препарата у животных, инфицированных ВЛКРС, отмечали некоторую стабильность гематологических показателей. Однако все вышеизложенное требует тщательной проверки и подтверждения на более широком материале с привлечением других методов исследования.