- •Министерство сельского хозяйства Российской Федерации
- •Методические указания к лабораторно-практическим занятиям по патологической физиологии
- •Тема 1. Физиологическая и патологическая регуляция функций
- •Общая этиология и патогенез. Действие болезнетворных факторов на организм животных
- •Тема 3. Действие повышенной и пониженной температуры окружающей среды на организм
- •Тема 4. Действие лучистой энергии
- •Тема 5. Влияние электрического тока на организм животных
- •Тема 6. Артериальная и венозная гиперемия. Ишемия
- •Тема 7. Тромбоз и эмболия
- •Воспаление
- •Тема 8. Расстройство кровообращения и эмиграция лейкоцитов при остром воспалении
- •Тема 9. Морфологические и биохимические свойства гнойного экссудата
- •Тема 10. Фагоцитоз
- •Болезнетворные факторы
- •Воспаление
- •Тема 11. Зависимость развития патологического процесса от состояния центральной нервной системы, факторов внешней среды и возраста
- •Тема 12. Изучение защитных свойств организма
- •Иммунопатология
- •Тема 13. Аллергия и аллергические заболевания
- •Тема 14. Местные проявления анафилаксии
- •Тема 15. Реакция антигена с антителом
- •1. Получение и обработка испытуемой сыворотки
- •2. Приготовление 2,5% взвеси эритроцитов
- •3. Приготовление гемолизина
- •4. Приготовление комплемента
- •5. Приготовление антигена
- •Тема 16. Лихорадка
- •Тема 17. Отек и водянка
- •Патология системы крови
- •Тема 20. Лейкоцитарная формула и ее изменение при патологии. Лейкозы (2 часа)
- •Патология общего кровообращения
- •Тема 22. Сердечная недостаточность кровообращения (2 часа)
- •Тема 23. Нарушение ритма сердечной деятельности (2 часа)
- •Тема 24. Нарушение внешнего и внутреннего дыхания
- •Тема 25. Нарушение дыхания при поражении головного мозга и грудной полости (2 часа)
- •Патология кровообращения
- •Раздел XII патология пищеварения
- •Тема 26. Патология пищеварения в желудке (2 часа)
- •Тема 27. Кислотность желудочного сока при различных секреторных нарушениях желудка (2 часа)
- •Тема 28. Влияние экстракта содержимого желудка, тонкого и толстого отделов кишечника на кровообращение и дыхание (2 часа)
- •Патология печени
- •Тема 29. Нарушение желчеобразовательной и желче-выделительной функции печени. Желтухи (2 часа)
- •Тема 30. Количественное и качественное изменение мочи при нефрозо-нефритах (2 часа)
- •Тема 31. Влияние на организм нарушений инкреторной функции гипофиза, надпочечников, щитовидной и поджелудочной желез
- •Тема 32. Нарушение движений и чувствительности
- •Тема 1. Физиологическая и патологическая регуляция, функций 4
- •Тема 3. Действие повышенной и пониженной температуры окружающей
Тема 10. Фагоцитоз
Цель занятия: изучить стадии фагоцитоза при воспалении и овладеть методикой определения фагоцитарного числа.
Фагоцитоз — активный физиологический процесс захвата и переваривания инородных тел фагоцитами с помощью ферментов. Фагоцитоз является одним из важнейших моментов иммунного ответа животных. Макрофаги — крупные клетки белой крови, способные к захватыванию и перевариванию микробов и инородных частиц. К макрофагам относятся и клетки PMC (ретикуломакрофагальной системы): ретикуло-эндотелий печени, селезенки, костного мозга, лимфатических узлов, гистиоциты и клетки белой крови — моноциты. Микрофаги — клетки белой крови (нейтрофилы), способные к захватыванию микроорганизмов. Хемотаксис — способность некоторых химических веществ притягивать или отталкивать лейкоциты. Фагоцитоз — защитная реакция организма. Активность фагоцитоза определяется фагоцитарным числом. Фа-гоцитариое число — отношение числа микробов, фагоцитированных лейкоцитами, к числу подсчитанных в мазке лейкоцитов, т. е. количество микробов, которое в среднем приходится на один лейкоцит. Фагоцитарная активность — отношение количества лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе, к числу подсчитанных лейкоцитов; выражается в процентах. Фагоцитарная интенсивность — отношение количества микробов, фагоцитированных лейкоцитами, к числу лейкоцитов, принимающих участие в фагоцитозе. Существуют следующие методы определения фагоцитарного числа: in vivo (в организме) и in vitro (вне организма).
Оснащение: микроскоп, предметные стекла с лункой, по-
35
кровное стекло, предметное стекло обезжиренное, 3% взвесь эритроцитов курицы в физиологическом растворе — 4 мл, шприц на 5 мл с иглой, хирургический пинцет, ножницы глазные прямые, пипетки пастеровские стерильные, 0,02% раствор краски нейтральрот — 4 мл, вазелин в чашечке, краска Романовского— Гимзы — 20 мл, йодная настойка, вата, лейкоциты лошади, сыворотка крови лошади, взвесь микробов, шлифованное стекло, чашки Петри, дистиллированная вода, термостат, спиртовка, иммерсионное масло, часовое стекло, мясопептонный бульон стерильный—10 мл, морская свинка.
Опыт 1. Фагоцитоз макрофагами эритроцитов курицы
Порядок работы. Морской свинке вводят в полость живота 10 мл стерильного мясопептонного бульона. Прокол производят иглой по средней линии живота, в нижней его части, в положении животного вниз головой. Спустя сутки в полость живота вводят 4 мл 3% взвеси эритроцитов курицы, затем каждые 15 мин стерильной пастеровской пипеткой набирают 1—2 мл экссудата из брюшной полости. Из экссудата изготовляют препарат висячей капли и мазки. Окрашенные мазки рассматривают под микроскопом под иммерсией. В тетрадях зарисовывают различные стадии фагоцитоза.
Опыт 2. Определение фагоцитарного числа in vitro
Порядок работы. Для выполнения данной работы необходимо иметь три компонента: лейкоциты, сыворотку крови лошади или какого-либо другого животного, взвесь микробов.
Получение лейкоцитов. У лошади из яремной вены берут 20—35 мл крови и разливают по 8—10 мл в центрифужные пробирки, в которые предварительно вносят 1—2 мл 4% р-ра лимоннокислого натрия, чтобы предупредить свертывание крови.
Осторожно перемешав содержимое, пробирки вставляют в гнезда центрифуги и центрифугируют 6—10 мин. По окон- чании центрифугирования плазму, находящуюся сверху, отсасывают пипеткой с расширением посредине. В центрифужные пробирки приливают физиологический раствор, вновь центрифугируют и отсасывают жидкость, скопившуюся над
36
лейкоцитами. Наконец, в пастеровскую пипетку насасывают лейкоциты, находящиеся над эритроцитами.
Получение сыворотки. Описанным выше способом берут у лошади 20—25 мл крови, сливают в сухие центрифужные пробирки, ждут, пока кровь свернется, после чего обводят тонкой стеклянной палочкой края образовавшегося сгустка. Затем пробирки с кровью центрифугируют. Сыворотка в пробирках образует верхний слой.
Получение эмульсии микробов. В пробирку с суточной культурой стрептококка, посеянной на агаре, наливают физиологический р-р, микробы смывают, взвесь их сливают в плоскодонную колбу и тщательно взбалтывают.
Ход определения. В пастеровскую пипетку до метки, нанесенной карандашом, в три приема последовательно всасывают равные объемы лейкоцитов, сыворотки и взвеси микробов. Перечисленные ингредиенты выдувают на часовое стекло и тщательно перемешивают (путем повторного насасыва-ния в пипетку с последующим выдуванием).
Полученную равномерную смесь лейкоцитов, сыворотки и микробов собирают в пипетку, запаивают тонкий конец ее над огнем спиртовки и ставят в термостат на 20—25 мин при температуре 38°С.
Вынув пипетку из термостата, отламывают ее тонкий конец и выдувают первую каплю смеси на часовое стекло, вторую и последующие капли наносят на предметные стекла, чтобы получить из них мазки. Высушивают мазки быстрым проведением через пламя горелки, фиксируют в р-ре спирт-эфира — смеси Никифорова — в течение 15—20 мин, окрашивают по Филипсону (используется краска Романовского— Гимзы, из нее готовят спиртовый р-р: 1 часть краски, 3 части спирта, а из спиртового готовят водный раствор в соотношении 1:1). Окрашиваются мазки вначале в спиртовом р-ре в течение 1 мин, затем 5—7 мин в водном р-ре.
Смыв краситель и высушив мазки, препарат просматривают под микроскопом с иммерсионной системой. Обращают внимание на лейкоциты с находящимися в их цитоплазме микробами. Отсчитывают 100 лейкоцитов, делают вывод о фагоцитарном числе, фагоцитарной активности, фагоцитарной интенсивности.
37
Опыт 3. Модель фагоцитоза (опыт Данилевского),
Порядок работы. В чашку Петри помещают кристаллик двухромовокислого калия, наливают 10% р-р азотной кислоты и вводят каплю ртути на расстоянии 1,5—2,0 см от кристаллика. По мере растворения кристаллика изменяется форма капли ртути — она становится амебовидной, передвигается по направлению к кристаллику, окружает его, что в некотором отношении напоминает процесс фагоцитоза.
Амебовидное движение ртути объясняется тем, что при растворении двухромовокислого калия в азотной кислоте образуются комплексные соединения, изменяющие поверхностное натяжение ртути в различной степени и в различных частях капли. Такие же соотношения имеют место между лейкоцитами и поверхностно-активными веществами в очаге воспаления.
Контрольные вопросы
Классификация фагоцитов.
Стадии фагоцитоза.
Учение И. И. Мечникова о фагоцитозе.
Факторы, способствующие фагоцитозу.
Контрольные вопросы по модулю № 1 Общее учение о болезни
Понятие о болезни, патологической реакции, патологи- ческом процессе и патологическом состоянии.
Основные этапы развития патологии. Задачи патологи ческой' физиологии. Взаимоотношение местного и общего в патологии.
Вклад отечественных ученых (С. П. Боткина, И. М. Се- ченова, iB. В. Пашутина, И. И. Мечникова, И. П. Павлова, Н. Н. Сиротинина и др.) в развитие материалистического учения о болезни.
Роль нервной и гуморальной регуляции в развитии бо- лезни. Типы высшей нервной деятельности и их значение в патологии.
Основные периоды и исход болезни. Факторы, опреде- ляющие особенности развития и исход болезни,
38
Ремиссия болезни, рецидив, обострение, осложнение.
Клиническая и биологическая, естественная и патологи- ческая смерть. Признаки смерти. Восстановление жизненных функций при оживлении-
Общие принципы классификации болезней (по проис- хождению и течению).
Наследственно обусловленные и врожденные болезни.
Влияние доместикации и промышленного животновод- ства на заболеваемость животных.
Общий адаптационный синдром. Роль гипоталамогипо- физарнадреналовой системы при состоянии напряжения (стресс).
Общая этиология и патогенез
Общее понятие об этиологии и патогенезе болезней. Методологические извращения в понимании причинности бо- лезни (монокаузализм, конституционализм, кондиционализм).
Роль этиологического фактора в развитии патологиче- ского процесса.
Основные понятия: патогенный фактор, причины и ус- ловия возникновения болезни, патогенез и саногенез.
Основное звено патогенеза и причинно-следственные связи.
Значение изменения функции нервной системы в раз- витии болезни (следовых реакций, доминанты, свойства сум- мировать раздражения, нарушения нервной трофики).
Влияние вида, породы, возраста, пола животных на возникновение и течение болезни.
Внешние и внутренние барьерные системы организма животных.
Защитные, компенсаторные и восстановительные реак- ции организма.