Лекции по биофизике

Методы изучения свободных радикалов

Метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР)

•Прямое измерение сигнала радикалов

•Сигналы стабильных радикалов

•Метод быстрого смешивания

•Стабилизация радикалов при низких температурах

•Метод спиновых ловушек

Прямое обнаружение радикалов липидов методом ЭПР в проточной кювете

	LH	O	2
	Fe 2++ LOOH Fe 3++ LO . L . LOO .
Fe2+	LOOH	LOH

S Магнит

Резонатор N

Сигнал ЭПР

Осипов А. Н., Моравский А. П., Шувалов В. Ф., Азизова О. А., Владимиров Ю. А. 1980,

Биофизика 25(2): 234-238.

Две реакции образования радикалов гидроксила

						CH3
.ОН +			C		N	CH3
			H
						CH3
Радикал					O
			Спиноваяловушка
гидроксила						ФБН

				CH3
			N	CH3
	OH O
				CH 3

Спиновыйаддукт ФБН

Реакция

Фентона

Реакция c HOCl

Fe 2++ H202 Fe3+ + OH- + HO•

Fe2+ + HClO Fe3+

.

+ Cl- + HO•

.

PBN-OH (аддукт)

..

PBN-OH (аддукт )

ФБН + HO•

ФБН + HO•

Сигнал ЭПР спиновых аддуктов радикалов олеиновой кислоты, образующихся в реакции ионов Fe2+ с гидроперекисью линоленовой кислоты

0.30 mT

N =1,62mT	H= 0,30mT	H=0,1mT
N =1,56mT	H = 0,34mT H=0,06mT
Fe2+ + LOOH Fe3+ + LO• + OH-		PBN + LO• PBN-LO (аддукт)

Биохимические методы изучения свободных радикалов

•Биомаркеры

•Диеновая конъюгация

•ТБК активные продукты

•Ингибиторный анализ

Биохимические методы изучения свободных радикалов

Биомаркеры

Биомарке

ры

Белки

Нуклеиновые

кислоты

de Zwart, L. L.,

Meerman, J. H.,	Липиды
Commandeur, J. N.
and Vermeulen, N. P.
(1999). Free Radic Biol
Med 26(1-2): 202-26.

Маркеры оксидативного повреждения нуклеиновых

кислот (слева) и белков (справа)

8-гидроксигуанозин

о-тирозин

тимидингликоль

Биомаркеры на окисление арахидоновой кислоты

Структура некоторых изопростанов

Структурные формулы метаболитов изопростана F2