Ход работы.

Устройство смесителя для красных телец

Меланжер или смеситель для эритроцитов имеет форму капилляра, который в верхней трети имеет шарообразное расширение. Выше это расширение опять переходит в капилляр с меткой 101, на который одевается резиновая трубочка. На длинном отрезке капилляра имеются метки 0,5 и 1. Кровь надо набрать до метки 0,5, а разбавляющую жидкость (физиологический раствор) до метки 101, кровь разбавляется в 200 раз (рис. 11).

Рис. 11. Камера для подсчета форменных элементов крови и смеситель для разбавления крови.

А — смеситель, Б — счетная камера (вид сверху), В — вид камеры сбоку, Д — распределение эритроцитов на сетке счетной камеры под микроскопом.

Устройство счетной камеры

Счетная камера Горяева состоит из толстого предметного стекла с желобками, образующими три поперечно расположенные плоские площадки. Средняя из них разделена желобком на две части. По обе стороны от желобка на стекле нанесены сетки. Сетка состоит из 100 больших не деленных квадратов и 25 больших, деленных на 16 маленьких квадратов.

Взятие крови и разбавление

Кровь для подсчета эритроцитов берется у животного путем прокола ушной вены. Место прокола дезинфицируется. Первая выступившая капля насухо удаляется, а для набирания крови в смеситель надо образовать большую каплю. Перед уколом заранее приготавливают 0,9% раствор поваренной соли в небольшом стаканчике. На смеситель надо надеть резиновую трубочку, насосать кровь в смеситель точно до метки 0,5, ваткой удалить кровь с поверхности капилляра, из стаканчика, держа смеситель вер­тикально, набрать физиологический раствор до метки 101. Кровь разбавили в 200 раз. Снять трубку со смесителя, оба конца смесителя закрыть пальцами и смеситель стряхивать 2…3 минуты.

Пробирочный метод разбавления

В маленькую пробирку набрать пипеткой и вылить 4 мл физиологического раствора. Туда же добавить 0,02 мл крови. Хорошо перемешать.

Подсчет эритроцитов

К камере Горяева притирают покровное стекло до появления радужных колец. Под малым увеличением микроскопа рассматривает сетку, и находят 5 больших квадратов, деленных на 16 маленьких квадратов по диагонали сетки. Из смесителя выпустить первые 2 капли на ватку, а третьей каплей заправить сетку, касаясь края притертого покровного стекла.

Подсчет эритроцитов производить при малом увеличении (окуляр 15х, объектив 20х), конденсор опустить. Найдя левый верхний угол сетки, установить в поле зрения большой квадрат, деленный на 16 маленьких, и начинать считать. Считают все эритроциты, которые находятся внутри маленького квадрата и лежащие на верхнем и левом ребре данного квадрата. Эритроциты, лежащие на других гранях этого квадрата не считают, они войдут в счет при переходе на соседние квадраты. Так сосчитать все эритроциты, находящиеся в 16 маленьких квадратах, Затем передвинуть камеру, чтобы в поле зрения был следующий большой квадрат, и так все 5 квадратов, деленных на 16 маленьких.

К полученной сумме эритроцитов приписать 4 нуля, что будет соответствовать количеству эритроцитов в 1 мм³ крови, в миллионах.

По международной системе измерения общую сумму эритроцитов умножить на 10¹⁰, что будет соответствовать количеству эритроцитов в 1 л крови.

Пример: в 80 малых квадратах подсчитали 700 эритроцитов, в 1 мм³ крови их будет 7000000, а в 1 л крови - 7 * I0¹² (СИ).

В среднем у крупного рогатого скота в 1 л крови содержится 5...7 * 10¹² эритроцитов. Коэффициент 10¹² называется «тера», и общий вид записи следующий: 5...7 Т/л (читается: тера на литр). У свиней в крови содержится 5...8 Т/л эритроцитов. У коз до 14 Т/л. У коз большое количество эритроцитов обусловлено тем, что они очень маленького размера, поэтому объем всех эритроцитов у коз такой же, как у других животных.

Содержание эритроцитов в крови лошадей зависит от их породы и хозяйственного использования (у лошадей шаговых пород - 6...8 Т/л, у рысистых - 8...10, а у верховых - до 11 Т/л).

У высокопродуктивных молочных коров уровень эритроцитов соответствует верхней границе нормы, у низкопродуктивных - нижней. У новорожденных животных количество эритроцитов в крови всегда больше, чем у взрослых. Так, у телят 1...6-месячного возраста содержание эритроцитов доходит до 8...10 Т/л и стабилизируется на уровне, свойственном взрослым животным, к 5...6 годам. У самцов в крови содержится больше эритроцитов, чем у самок.

Результат:

Вывод:

Работа № 2. Определение количества гемоглобина в крови.

Количество гемоглобина измеряется в граммах на литр крови (г/л).

У лошади уровень гемоглобина в среднем - 90...150 г/л, у крупного рогатого скота - 100...130 г/л, у свиней - 100...120 г/л.

Гемоглобин - дыхательный пигмент крови, содержащийся в эритроцитах. По химической структуре белок хромопотеид, который состоит из белковой части глобина и простетической группы – гема, содержащего железо.

Оборудование: гемометр Сали, дистиллированная вода, 0,1н раствор НС1.

Объект исследования: кровь животного.

Ход работы.

В среднюю пробирку наливают 0,1 раствор НС1 до нижней метки. В градуированную пипетку набирают 0,2 мл. исследуемой крови и выдувают ее в 0,1н раствор НС1. Не вынимая пипетку, споласкивают ее соляной кислотой, содержимое пробирки перемешивают стеклянной палочкой оставляют на 3-5 минут, для того чтобы гемоглобин перешел в солянокислый гематин, на что будет указывать коричневое окрашивание. Затем прибавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет совершенно одинаков с цветом стандарта (добавляя воду, раствор перемешивают стеклянной палочкой).

Цифра, стоящая на уровне полученного раствора, показывает относительный процент содержания гемоглобина в исследуемой крови.

Результат:

Вывод:

Работа № 3. Расчет цветового показателя крови.

Оборудование: исходные данные по подсчету эритроцитов и определения гемоглобина в крови.

Соотношение между количеством гемоглобина крови и числом эритроцитов носит название цветного показателя. Цветной показатель позволяет оценить степень насыщения эритроцитов гемоглобином.

В патологии цветной показатель может быть выше единицы (гиперхромазия) или ниже единицы (гипохромазия). В норме он составляет 0,8-1. Вычисление цветного показателя имеет большое диагностическое значение.

Ход работы.

Определив в исследуемой крови количество гемоглобина и число эритроцитов, высчитывают цветной показатель по формуле:

Ц.П. = найденное количество гемоглобина х найденное число эритроцитов/нормальное количество гемоглобина х нормальное число эритроцитов.

Результат:

Вывод:

Работа № 4. Определение скорости оседания эритроцитов.

Цель: ознакомиться с методиками определения скорости оседания

эритроцитов.

Задача: Определить скорость оседания эритроцитов (СОЭ);

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, прибор

Панченкова, 5-процентный раствор цитрата натрия.

Метод основан на определении высоты столба плазмы крови, стабили-

зированной цитратом натрия, над осевшими за 1 ч форменными элементами, среди которых преобладают эритроциты. Для этого используется капилляр Панченкова.