2.2 Клинические признаки

У большинства собак с паразитированием в их организме небольшого количества особей D. immitis, явных признаков заболевания не проявляется. И только при значительной инвазии отмечается нарушение функционирования кровеносной системы, прежде всего, ввиду затруднения тока крови, что приводит к хронической застойной правосторонней сердечной недостаточности. Наличие большого количества активных гельминтов может вызвать эндокардит сердечных клапанов и пролиферативный легочной эндартериит, вероятно, в связи с ответной реакцией организма на продукты выделения паразитов. Кроме того, мертвые или погибающие гельминты могут вызвать легочную эмболию. Через 9 месяцев развивающееся легочное повышенное давление компенсируется гипертрофией правого желудочка, что может привести к застойной сердечной недостаточности, сопровождающееся обычно признаками отека и асцита. На этой стадии собака апатичная, слабая. У зараженных собак наблюдается затрудненное дыхание, кашель и общее истощение. При интенсивном заражении появляется анемия, воспаление почек и мочевого пузыря, сопровождающиеся гематурией. Нередко заболевание сопровождается рвотой, припадками и параличами конечностей. Гибель собак чаще происходит летом при явлениях истощения, водянки грудной и брюшной полостей, в результате нарушения деятельности сердца. Иногда болезнь сопровождается лихорадкой, эпилептоидными припадками и даже явлениями, симулирующими бешенство. Смерть наступает обычно от асфиксии. Заболевание часто сопровождается поражениями кожи в области головы, шеи и на лапах в виде папулезного дерматита: кожа в этих местах гиперемирована, папулы с гнойным или серозным содержимым, в котором обнаруживают личинок дирофилярий. Острый синдром полой вены характеризуется гемоглобинурией, желтухой и коллапсом. При слабой инвазии у работающих собак может отмечаться снижение рабочих качеств в периоды длительных нагрузок. При высокой интенсивности инвазии с заражением кожи нарушается периферическая нервная система, % результате чего наблюдают стойкое искривление шеи в одну сторону и парезы конечностей. Наиболее часто при дирофиляриозе встречаются: гипохромная анемия, нейтрофилия (20-80% случаев), эозинофилия (85%) и базофилия (60%).

2.3 Патологоанатомические изменения

При вскрытии обнаруживают паразитов обычно в правом желудочке и легочных артериях (D. immitis). Интенсивность инвазии бывает различной; чаще всего обнаруживают паразитов в количестве от 1 до 50 экземпляров. Однако описаны случаи нахождения 150 и более экземпляров у одной собаки. Обычно паразиты образуют клубки, обвивая сердечные клапаны. При паразитировании D. repens половозрелых гельминтов находят в подкожной клетчатке или в полостях тела животного.

2.4 Диагностика дирофиляриоза

дирофиляриоз плотоядный собака болезнь

По данным многих авторов при постановке диагноза на дирофиляриоз необходимо учитывать следующие показатели:

Анамнестические данные - прибытие из эндемической области или нахождение в ней.

Клинические признаки болезни,

Выделение микрофилярий из крови животного.

Дополнительные лабораторные исследования

Личинок дирофилярий в крови можно обнаружить следующими лабораторными методами:

·Прямая микроскопия капли свежей крови под малым увеличением микроскопа наиболее легкий, удобный и быстрый метод диагностики дирофиляриоза. Подвижные личинки паразита заметны по их активному движению между эритроцитами. Этот метод дает надежные результаты только при высокой интенсивности инвазии. Недостатками этого метода являются: трудность диагностирования дирофиляриоза при низкой интенсивности инвазии, необходимость иметь под рукой микроскоп в рабочем положении и предметные стекла, исследование необходимо проводить сразу же после взятия крови, что создает неудобства в работе. Кроме того, при малой подвижности микрофилярий их бывает трудно обнаружить среди большого количества эритроцитов. При высокой температуре окружающего воздуха, свежий мазок крови быстро высыхает, что создает дополнительные трудности в исследовании.

·Исследование цельной сыворотки крови - для исследования сыворотки крови в пробирку берут несколько миллилитров венозной крови от собаки. Кровь сворачивается, и микрофилярии мигрируют в сыворотку. Сыворотка со сгустком должна постоять в пробирке несколько часов. После этого пастеровской пипеткой берут несколько капель сыворотки со дна пробирки или из места на границе сыворотки и сгустка крови. Эти капли помещают на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа на наличие подвижных микрофилярий. Если кровь до исследования находилась в холодильнике, то предметное стекло с каплями сыворотки выдерживают несколько минут при комнатной температуре для того, чтобы личинки дирофилярий восстановили свою подвижность. Недостатками этого метода диагностики являются: возможность постановки диагноза только через определенное время (около двух часов необходимо для отстаивания сыворотки крови). Преимущества метода: исследованиями на дирофиляриоз можно заниматься в свободное время, не отвлекаясь от основной работы; так как личинки дирофилярий сохраняют свою подвижность в сыворотке крови при комнатной температуре до трех суток, а в холодильнике при температуре +2...+4°С до одной недели. Даже после их гибели, при наличии определенного опыта, микрофилярии легко можно обнаружить в сыворотке крови. При сворачивании крови образуется сыворотка, объем которой почти в два раза меньше цельной крови, это способствует концентрации микрофилярий и облегчает их обнаружение при невысокой интенсивности инвазии. Кроме того, в сыворотке легче обнаружить микрофилярии, чем в цельной крови, так как в данном случае отсутствуют форменные элементы крови, мешающие исследованию.

·Метод Куликова - 20 мл венозной крови смешивают с 2 мл 3,8% водного раствора лимоннокислого натрия (цитрата натрия) и отстаивают 20-30 минут. По истечении этого времени в пробирке образуется 3 слоя: внизу - эритроциты, в середине - лейкоциты и микрофилярии, вверху - плазма крови. Берут пипеткой средний слой, каплями наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют при малом и среднем увеличении.

·Архиповой Д.Р. разработан количественный метод прижизненной диагностики дирофиляриозов собак основанный на применении меланжера для подсчета количества лейкоцитов и счетной камеры Фукс-Розенталя. Меланжер до метки I заполняют кровью и до метки II раствором, состоящим из ледяной уксусной кислоты, раствора фуксина и дистиллированной воды в соотношении 3:4:93. Для равномерного смешивания меланжер с кровью и раствором кладут на вибратор на 2-3 минуты. К чистой и сухой камере Фукс-Розенталя притирают покровное стекло до появления колец Ньютона. Затем раствор в меланжере встряхивают, и каплю (но не первую) раствора наносят на среднюю часть пластинки камеры и при увеличении микроскопа в 100 раз подсчитывают количество микрофилярий во всех квадратах. Полученное количество личинок умножают на 6,23, так как для 20 мм3 раствора потребовалось бы 6,23 объема камеры. Для определения количества микрофилярий в 1 мл крови число выявленных микрофилярий в 20 мм3умножается на 50.

·Исследование крови для обнаружения микрофилярий может быть облегчено добавлением вещества, вызывающего гемолиз. При этом методе периферическую кровь собак исследуют сразу после взятия (на месте). Каплю крови помещают на предметное стекло, добавляют две капли дистиллированной воды или 1%-ного водного раствора уксусной кислоты, накрывают покровным и исследуют под малым увеличением микроскопа.

·При использовании метода с применением уксусной кислоты к 1 мл венозной крови сразу же приливают 5 мл 2%-ного раствора уксусной кислоты. Смесь центрифугируют при 1000 об/мин. В течение 3-5 минут. Надосадочную жидкость выливают, а осадок микроскопируют для обнаружения микрофилярий. При этом методе личинки погибают, и их бывает трудно обнаружить в исследуемом материале.

·Метод Руже-Мюленса - к крови добавляют пятикратный объем раствора: 5%-ный формалина 95 мл, уксусной кислоты 5 мл и концентрированного спиртового раствора генцианвиолета 2 мл. Смесь центрифугируется, надосадочная жидкость сливается, а осадок опять центрифугируют с водой и смотрят под микроскопом. Этот метод можно упростить: каплю крови помещают в пробирку с раствором и микроскопируют на следующий день.

·Метод Шуффнера - 10 капель крови помещают в 10 мл физиологического раствора, к которому предварительно добавили несколько капель раствора сапонина. После гемолиза, производят центрифугирование. Живые, подвижные личинки обнаруживаются в осадке.

·Модифицированный метод Кнотта дает хорошие результаты при практической постановке диагноза на наличие микрофилярий у собак, Метод заключается в следующем: к 1 мл венозной крови добавляют 10 мл 2%-ного раствора формалина. Этот раствор хорошо перемешивают и центрифугируют при 1500 об/мин. в течение 5 минут. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок смешивают с равным объемом метиленового синего в разведении 1:1000 и оставляют для окрашивания на 5 минут. Окрашенный осадок микроскопируют для обнаружения фиксированных микрофилярий.

К дополнительным методам исследования относятся следующие:

. Морфологические и биохимические исследования крови - не позволяют поставить точный диагноз на дирофиляриоз, но помогают определить патологические изменения в органах и тканях, которые могут быть связаны с дирофиляриозом. Наиболее часто при дирофиляриозе отмечают нормоцитарную, нормохромную или гипохромную анемию (гематокрит <20-30%), гемолитическую анемию, нейтрофилию, эозинофилию (85% случаев), базофилию (60% случаев), моноцитоз, тромбоцитопению. В тяжелых случаях, особенно если присутствует сердечная недостаточность, повышается активность АлАТ и Ac AT, иногда отмечается гипербилирубинемия. Азотемия может быть внепочечного происхождения, если присутствуют дегидратация или порок сердца, или может быть вторична при гломерулонефрите. Гломерулонефрит может усложнять клиническую картину.

2.При исследовании мочи редко выявляют изостенурию, чаще наблюдается альбуминурия.

3.Рентгенография грудной полости - хотя и не является хорошим методом обнаружения дирофилярий, но позволяет косвенно определить степень инвазии по оценке легочных паренхиматозных изменений. Рентгенографические изменения, которые развиваются на ранних стадиях болезни (кардиомегалия правого желудочка, расширение легочных артерий, отчетливая демаркация легочных сосудов и периваскулярных уплотнений, особенно в каудальных долях), присутствуют в 85% случаев. Рентгенографические изменения включают увеличение правого желудочка (60% случаев), расширение легочной артерии и увеличение рентгенографической плотности легочных артерий (50%), а также извитость легочной артерии (50%). Если при этом имеет место сердечная недостаточность, то отмечается увеличение синуса полых вен, печени и селезенки, а также наблюдается плевральный выпот или асцит.

4.Эхокардиография - при высокой зараженности, когда гельминты локализуются в легочных артериях, правом желудочке и правом предсердии наблюдают: гипертрофию или расширение правого желудочка, перикардиальный выпот, парадоксальную подвижность перегородки, сплющивание и утолщение перегородки, недостаточность трехстворчатого клапана, повышение давления в легочных артериях. Электрокардиография - выявляет синусовую аритмию (тахикардию), признаки расширения правого желудочка и правого предсердия, нарушение проводимости.

5.Метод непрямой иммунофлюоресценции (МНИФ, IFA) используется для обнаружения антител к микрофиляриям и имеет специфическую полноценность при диагностике истинного дирофиляриоза, а так же тех случаев, когда личинки отсутствуют из-за иммунного разрушения. При помощи иммуноферментного анализа (ИФА, ELISA) можно обнаружить антитела к дирофиляриям или сам антиген. МНИФ и ИФА разработаны за рубежом, где получили широкое распространение благодаря их точности, чувствительности, специфичности и быстроте диагностики. После успешной терапии дирофиляриоза методы ИФА (1 год) и МНИФ (6 месяцев) дают положительный результат при определении антител.

6.Лаборатория IDEXX, США, разработала новый диагностический тест, Snap 3 Dx, который одновременно диагностирует заражение собак векторными инфекционными заболеваниями: дирофиляриозом, болезнью Лайма и эрлихиозом. Тест выполняется в клинике с получением результатов через 8 минут. На Украине сделаны первые шаги в разработке нового диагностикума инвазии D. repens с помощью ПЦР (полимеразной цепной реакции).