2.8. Определение количества лейкоцитов

Кровь для исследования брали из хвостовой вены. Первую каплю удаляли на вату, а следующую набирали в смеситель для подсчета лейкоцитов до метки 0,5 (объем капилляра до метки 0,5 в 20 раз меньше объема ампулы). Чтобы разрушить эритроциты, содержашиеся в крови и мешающие счету, пользуются для разведения 0,5 % раствором уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью.

В смеситель для лейкоцитов набирают до метки 2 % раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Содержимое ампулы смесителя тщательно перемешивают. На предметное стекло, в том месте, где на нем расположена сетка Горяева, помещают покровное стекло и притирают его большими пальцами рук до появления ньютоновских колец. Одну треть содержимого смесителя выпускают на вату, а следующую каплю выдувают на предметное стекло под покровное.

Предметное стекло помещают на столик микроскопа, находят под малым увеличением сетку.

Установив большое увеличение, производим подсчет.

Лейкоциты считают в 25 больших квадратах. Сторона одного большого квадрата составляет 1/5 мм, а его площадь – 1/25 мм². Общая площадь всех квадратов равна 1 мм². Объем пространства над этой площадью – 1/10 мм³. Следовательно, если в 25 больших квадратах найдено n лейкоцитов, то в 1 мкл разведенной крови их количество составит 10n. Тогда количество лейкоцитов в 1 мкл цельной крови будет = 200n, если кровь набиралась до метки 0,5. В норме в 1 мкл крови содержится 4-9 тыс. лейкоцитов или 4-9 х 10 в девятой степени / л.

2.9. Методы статистической обработки результатов исследований

Результаты экспериментов подвергались вариационно-статистической обработке в соответствии с принципами, изложенными в руководстве Лакина Г.Ф.(1990).

Для создания одномерного статистического отсчета, содержащего информацию о центральной тенденции и изменчивости входных данных, использовали описательную статистику Microsoft Excel на базе компьютера IBM PENTIUM.

Вариационные ряды, полученные в эксперименте, характеризовались по следующим показателям:

1) средняя арифметическая величина (М);

2) квадратическое отклонение (σ);

3) ошибка средней арифметической величины или средняя квадратическая ошибка (m).

Вычисляя показатель существенной разности (t) и учитывая число измерений по таблице t-распределения Стьюдента, определяли вероятность различий (Р). Различие считалось статистической достоверной, начиная со значений Р≤0,05. В этом случае правильность вывода о существовании различий величин может быть подтверждена в 95 % случаев.

При графическом изображении полученных данных для суждения о достоверности различий средних величин вариационных рядов вычислялись границы доверительного интервала, в котором при заданном уровне вероятности находится истинное значение средней арифметической величины. Границы доверительного интервала определяли по таблице t-распределения Стьюдента соответствовало заданному уровню вероятности Р=0,05 при числе наблюдений - n. Это давало возможность утверждать, что вероятность выхода за пределы этих границ не превышает 5 %.

Полученные цифровые ряды, характеризующие суточные колебания изучаемых физиологических ритмов животных, подвергали математической обработке. Вычерчивались групповые хронограммы. Изучали форму хронограмм и рассчитывали среднесуточные значения в различных условиях светового режима.