- •Министерство образования республики беларусь
- •Список сокращений
- •Реферат
- •РэФерат
- •Введение
- •Глава 1 Обзор литературы
- •1.1 Понятие стресса у растений
- •1.2 Оксидативный стресс. Механизмы образования активных форм кислорода
- •1.3 Биологическое значение активных форм кислорода
- •1.4 Антиоксидантная защитная система растений
- •1.5 Фенольная антиоксидантная защита
- •1.6 Роль элиситоров в защите растений от стрессовых воздействий
- •Глава 2 Объект и методы исследования
- •2.1 Объект исследования
- •2.2 Схема опыта
- •2.3 Определение содержания растворимых фенольных соединений
- •2.4 Определение содержания гидроксикоричных кислот
- •2.5 Статистическая обработка
- •Глава 3. Результаты и их обсуждение
- •Заключение
- •Список использованной литературы
2.3 Определение содержания растворимых фенольных соединений
Для экстракции взвешивали по 200 мг механически измельченного сырья (листья). Помещали навеску в фарфоровую ступку, добавляли на кончике скальпеля мел для нейтрализации кислотности вакуолярного сока и столько же кварцевого песка в качестве абразива, приливали 2 мл спирта и тщательно растерли. Затем к смеси добавили 8 мл 70% этилового спирта. После чего содержимое ступки профильтровали через фильтр Шотта.
В градуированную пробирку объемом 10 мл приливали 0,5 мл полученного экстракта, 8 мл дистиллированной воды и 0,5 мл реактива Фолина-Дениса, через 2 мин добавили 1 мл 10% раствора углекислого натрия. Полученную смесь оставляли на 40 мин до появления окраски. Затем измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра Cary Vin (Германия) при длине волны 720 нм. В качестве контрольного раствора использовали спирт. Расчет содержания фенольных соединений произвели с использованием калибровочного коэффициента (а=0,0058) по формуле:
С=( Р× V1)÷(а× V2× В), где
С-содержание фенольных соединений (мкг/г);
Р - оптическая плотность раствора;
а - калибровочного коэффициента (0,0058);
V1-объем экстракта (мл);
V2-общий объем пробы (мл);
В-навеска биологического материала для анализа (г).
2.4 Определение содержания гидроксикоричных кислот
Для определения содержания гидроксикоричных кислот использовали спиртовой экстракт из листьев тритикале, способ его получения описан выше.
В градуированную пробирку объемом 10 мл приливали 0,5 мл экстракта и 4,5 мл дистиллированной воды. Затем измеряли оптическую плотность с помощью спектрофотометра Cary Vin (Германия) при длине волны 330 нм.
Содержание гидроксикоричных кислот (в мг/мл) рассчитывали по уравнению калибровочной кривой, построенной для кофейной кислоты (рисунок 2.1).
Рисунок 2.1 – Зависимость оптической плотности от концентрации кофейной кислоты.
Пересчет на единицу сырого веса листьев (в мг/г) производили следующим образом: С=С мг/мл× 1000÷0,2, где С – содержание ГКК (мг/г).
2.5 Статистическая обработка
Статистическая обработка результатов опыта позволяет определить границы случайных колебаний полученных данных, то есть установить точность опыта, а также достоверность различий по средним значениям между вариантами опыта.
Представленные экспериментальные данные проводились в 3-кратной биологической повторности. Для обработки полученных результатов были использованы стандартные методы вариационной статистики. Основными статистическими характеристиками служили средняя арифметическая величина (х¯), среднее квадратное отклонение (δ) и ошибка средней величины (Sх).
Средняя арифметическая величина определяется по формуле:
где ∑xj – сумма всех повторностей измерения,
n – число повторностей.
Для определения среднего квадратичного отклонения использовалось выражение:
где ∑(xj-x)² - сумма квадратов отклонений от средней арифметической величины.
Ошибка средней величины определяется по формуле:
Данные величины рассчитывали с помощью пакета статистического анализа данных программы Microsoft Excel.