Опыт 3. Коагуляция белков концентрированными минеральными кислотами.

Концентрированные минеральные кислоты (серная, хлористоводородная, азотная и др.) вызывают денатурацию белка за счет удаления факторов устойчивости белка в растворе (заряда и гидратной оболочки). Однако при избытке хлористоводородной и серной кислот выпавший осадок денатурированного белка вновь растворяется. Это, по-видимому, происходит в результате перезарядки молекул белка и частичного его гидролиза. При добавлении избытка азотной кислоты растворения осадка не происходит.

В три пробирки наливают по 5 капель концентрированной серной, хлористоводородной и азотной кислот. Затем, наклонив пробирку под углом 45^о, осторожно по стенке пробирки (так, чтобы жидкости не смешивались) приливают такой же объем 1%-ного раствора яичного белка.

На границе двух слоев появляется осадок белка в виде белого кольца. Осторожно встряхивая пробирки, обнаруживают растворение белка в пробирках с серной и хлористоводородной кислотами, тогда как в пробирке с азотной кислотой растворения белка не происходит.

Опыт 4. Коагуляция белков органическими кислотами.

Трихлоруксусная кислота осаждает только белки, а сульфосалициловая кислота осаждает не6 только белки, но и высокомолекулярные полипептиды.

В две пробирки вносят по 5 капель 1%-ного раствора белка. В одну из них прибавляют 2 капли 10%-ного раствора сульфосалициловой кислоты, а в другую – 5 капель 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. В пробирках выпадает осадок белка.

Опыт 5. Коагуляция белков солями тяжелых металлов.

Белки при взаимодействии с солями свинца, меди, ртути, серебра и других тяжелых металлов денатурируются и выпадают в осадок. Однако при избытке некоторых солей наблюдается растворение первоначально образовавшегося осадка. Это связано с накоплением ионов металла на поверхности денатурированного белка и появлением положительного заряда на белковой молекуле.

В три пробирки вносят по 5 капель 1%-ного раствора белка. В первую пробирку добавляют 1 каплю 10%-ного раствора сульфата меди, во вторую – 1 каплю 5%-ного раствора ацетата свинца, в третью – 1 каплю 5%-ного раствора нитрата серебра. Во всех пробирках выпадает осадок.

Затем в первую пробирку добавляют 10 капель 10%-ного раствора сульфата меди и наблюдают растворение осадка. В третью пробирку вносят 10 капель 5%-ного раствора нитрата серебра – растворения осадка нет.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №6.

СЛОЖНЫЕ БЕЛКИ ИЛИ ПРОТЕИДЫ

Сложные белки или протеиды состоят из простого белка и небелковой части, которая независимо от ее химического строения называется простетической группой (фосфорная кислота, гетероциклические соединения, углеводы, липиды, нуклеиновые кислоты и др.).

В зависимости от состава небелковой части протеиды разделяются на нуклеопротеиды, фосфопротеиды, гликопротеиды, хромопротеиды, липопротеиды и др.

Опыт 1. Изучение состава нуклеопротеидов.

Нуклеопротеиды представляют собой сложные соединения, белковая часть которых представлена простыми белками в основном протаминами и гистонами, а их небелковая часть – нуклеиновыми кислотами – мононуклеотидами, в состав которых входят азотистые (пуриновые и пиримидиновые) основания, углеводы и фосфорная кислота.

Для изучения состава нуклеопротеидов используют дрожжи как продукт, богатый этими соединениями.

С гидролизатом дрожжей проводят следующие реакции:

1. Биуретовая реакция на полипептиды

В пробирку вносят 5 капель гидролизата дрожжей и добавляют 10 капель 10%-ного раствора гидроксида натрия и 2 капли 1%-ного раствора сульфата меди. Появляется розово-фиолетовое окрашивание.

2. Серебряная проба на пуриновые основания

В пробирку вносят 10 капель гидролизата дрожжей и добавляют 1-2 капли концентрированного раствора аммиака до щелочной реакции (контроль по лакмусу) и 5 капель 1%-ного раствора нитрата серебра. Через 3-5 минут образуется рыхлый осадок бурого цвета, вследствие образования комплексов пуриновых оснований с солями серебра.

3. Реакция Молиша на пентозу

Качественная реакция Молиша на пентозные группировки основана на взаимодействии тимола с фурфуролом, который образуется при нагревании пентоз с серной кислотой. В результате появляется окрашенное соединение.

В пробирку к 10 каплям гидролизата дрожжей прибавляют 2-3 капли 1%-ного спиртового раствора тимола и по стенке пробирки (осторожно!) – 20 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки появляется красное окрашивание.

4. Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

Приготовление молибденового реактива: 7,5 г молибдата аммония растворяют в 100 мл воды и добавляют 100 мл 32%-ного раствора азотной кислоты. Полное растворение молибдата аммония происходит после добавления азотной кислоты.

В пробирку с 5 каплями гидролизата дрожжей прибавляют 20 капель молибденового реактива и кипятят. После охлаждения на дне пробирки образуется желтый кристаллический осадок фосфорной соли молибдата аммония.