Ход работы

Оборудование и материалы. Культуры актиномицетов. Бактериологическая петля. Препаравальная игла. Предметные и покровные стекла. Спиртовка, спички. Микроскоп, кедровое масло. Раствор краски фуксина Пфейфера. Спирт. Промывалка с дистиллированной водой.

Приготовление препарата. Культуру, выращенную на плотной среде, извлекают препаровальной иглой или упругой петлей, наносят на предметное стекло, накрывают вторым таким же стеклом. Раздавливают, разъединяют стекла вдоль поверхности, в результате чего получается два мазка.

Очень важно добиться нужной толщины мазка. Мазок должен чуть опалесцировать и чаще оказывается слишком толстым,чем тонким. Необходимо также, чтобы толщина мазка по всей поверхности была одинаковая. Бактериологическую петлю снова прокалить во избежании заражения работающего и возжуха помещения исследуемой культурой микроорганизмов. Дайте мазку подсохнуть на воздухе.

Затем мазок сушат на воздухе при комнатной температуре или слабом нагревании, держа препарат высоко над пламенем горелки. Сильное нагревание препарата при сушке не рекомендуется, так как белки коагулируют, искажая структуру и форму клеток. До фиксации препарата следят за соблюдением расстояния от него до пламени спиртовки. Высушенный препарат фиксируют.

Фиксация мазка. Берут стекло с мазком в горизонтальном положении и три-четы

ре раза проводят его через желтую часть пламени горелки. Очень важно не перегреть стекло. Простейший способ проверки правильности нагрева - после каждого проведения через пламя слегка коснуться стеклом руки. Если неприятного ощущения нет,то все правильно. При фиксации бактериальные клетки гибнут в результате коагуляции цитоплазмы; кроме того, клетки прилипают к стеклу.

Другим распространенным методом фиксации является обработка препарата 96%-ным спиртом.

Окрашивание препарата. При окрашивании мазка препарат помещеют на предметодержатель над кристаллизатором. На мазок наносят несколько капель красителя фуксина Пфейфера. Через 1-2 минуты препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют воду, просушивают на воздухе и микроскопируют при малом, а затем при большом увеличении.

Задание:

1.Рассмотрите колонию актиномицетов на агаре. Опишите ее основные признаки (цвет, форма, края, поверхность и т.д.)

2. Рассмотрите колонию под бинокулярной лупой или под малым увеличением микроскопа, поставив открытую чашку Петри на предметный столик. На краю колонии можно рассмотреть спорангии и спорангиеносцы.

3. Рассмотрите и зарисуйте мазок сначала под малым, а затем под большим увеличением микроскопа.

Лабораторная работа №7 морфология и биология азотфиксирующих симбиотических бактерий

Запасы газообразного азота в атмосфере практически неисчерпаемы. Над каждым квадратным километром земной поверхности в воздухе содержится около 8 млн. т азота. Но этими огромными запасами азота не могут воспользоваться ни растения, которым необходим азот минеральных соединений.

Однако существуют микроорганизмы, способные питаться молекулярным азотом и строить из него все разнообразие азотсодержащих органических соединений своей клетки. Эти микроорганизмы свободно живут в почве или находятся в симбиозе с высшим растением. Азотфиксирующие микроорганизмы способствуют повышению плодородия почвы, и их изучению уделяется большое внимание.

Чистую культуру азотфиксирующего микроорганизма впервые выделил С.Н.Виноградский (1893). Это была анаэробная спорообразующая палочка, названная Clostridium pastereurianum. Несколько позднее голландский микробиолог М.Бейеринк (1901) открыл Azotobacter - аэробную бактерию, также способную усваивать молекулярный азот.

В последнее время было найдено, что функция азотфиксации присуща весьма многим микроорганизмам - бактериям, относимым к различным систематическим группам, некоторым грибам и актиномицетам, а также многим сине-зеленым водорослям.