- •Лабораторная работа №6 изучение строения и биологии актиномицетов как объекта биотехнологии
- •Ход работы
- •Лабораторная работа №7 морфология и биология азотфиксирующих симбиотических бактерий
- •Технология производства бактериальных удобрений
- •Технология получения сухого нитрагина.
- •Технология получения сухого азотобактерина.
- •Симбиотические азотфиксаторы
- •Ход работы
Симбиотические азотфиксаторы
Азотфиксирующие микроорганизмы, которые живут в симбиозе с корнями бобовых растений и образуют на их корнях клубеньки, называют клубеньковыми бактериями.
Растение обеспечивает бактерии необходимыми питательными веществами и создает для них оптимальные условия существования. Бактерии же, находясь в клубеньках, снабжают растение азотистым питанием. Ни растение, ни бактерии сами по себе не могут фиксировать азот.
Клубеньковые бактерии относятся к роду Rhizobium . Форма и величина клубеньковых бактерий изменяется в зависимости от стадии их развития. В молодой культуре они представлены короткими подвижными палочками, со временем они утрачивают подвижность и переходят в стадию так называемых опоясанных палочек. При окраске анилиновыми красителями ярко окрашенные участки цитоплазмы чередуются со светлыми полями, в которых концентрируются жировые включения, не воспринимающие окраску. При старении культуры опоясанные палочки переходят в стадию бактероидов, клетки ветвятся принимая причудливую форму кораллов. Стадии опоясанных палочек и бактероидов обычно совпадают с фазой бутонизации и цветения бобовых растений и характеризуются максимальной интенсивностью фиксации азота.
Бактерии рода Rhizobium в симбиозе с бобовыми культурами способны фиксировать свободный азот атмосферы, превращая его в соединения, легкоусвояемые растением. Эти бактерии являются строгими аэробами. Среди бактерий рода Rhizobium различают активные, малоактивные и неактивные культуры. Критерий активности клубеньковых бактерий связан с их способностью в симбиозе с бобовым растением фиксировать атмосферный азот и использовать его в виде соединений для корневого питания растения.
Фиксация атмосферного азота возможна только в образующихся в корневой системе растения клубеньках. Их возникновение связано с инфицированием корневой системы бобового растения бактериями из рода Rhizobium. Заражение корневой системы происходит только через молодые корневые волоски: после внедрения бактерии прорастают внутри них до самого основания в виде инфекционной нити. Выросшие нити проникают сквозь стенки эпидермиса в кору корня, разветвляются и распределяются по клеткам коры. При этом индуцируется деление клеток хозяина и разрастание тканей. В месте локализации бактерий на корне растения-хозяина образуются клубеньки, в которых они быстро размножаются и располагаются по отдельности или группами в цитоплазме растительных клеток. Сами бактериальные клетки увеличиваются в объеме в 10-12 раз и меняют свою форму. Если такие клубеньки имеют красноватую или розоватую окраску, обусловленную наличием пигмента легоглобина (легглобина)- аналога гемоглобина крови животных, то они способны фиксировать молекулярный азот. Неокрашенные ("пустые") или имеющие зеленоватую окраску клубеньки не фиксируют азот.
Бактерии, находящиеся в клубеньках, синтезируют ферментную систему с нитрогеназной активностью, восстанавливающую молекулярный азот до аммиака. Ассимиляция аммиака происходит, в основном, путем вовлечения его в ряд ферментативных превращений, приводящих к образованию глутамина и глутаминовой кислоты, которые в дальнейшем удут на биосинтез белка.
Клубеньковые бактерии обладают избирательной способностью вступать в симбиотические взаимоотношения с различными бобовыми растениями. На основании специфичности симбиоза все клубеньковые бактерии делят на виды: бактерии гороха, вики, чины – Rhizobium leguminosarum донника и люцерны - Rh. meliloti; клевера - Rh.trifolii; фасоли - Rh.phaseoli; люпина - Rh. lupini; сои - Rh. japonicum и др.
Клубеньковые бактерии отдельных видов имеют некоторые разнообразия морфологических форм. Так, Rh.trifolii толстые и короткие (до 2 мкм), покрытые слизью палочки; Rh. Leguminosarum длина палочек достигает 3,5-4 мкм; Rh.lupini сильно изогнутые, крупные покрытые слизью палочки.
Неодинаковые у бобовых растений и формы и размеры клубеньков, а также расположение их на корнях. У одних бобовых растений (горох, клевер, вика) клубеньки образуются в виде небольших вздутий на различных разветвлениях корней; у других (люпина) они имеют вид крупных бородавчатых наростов на главном корне.
Клубеньковые бактерии имеют очень большое сельскохозяйственное значение, так как, усваивая азот из воздуха, они способствуют повышению урожайности сельскохозяйственных и особенно бобовых культур.
ЗАДАНИЕ:
1. Рассмотреть и зарисовать корень люпина с клубеньками.
2. Сделать срез с клубенька и рассмотреть под бинокулярной лупой. Зарисовать: кору клубенька и бактероидную ткань.
3. Приготовить фиксированный препарат клубеньковых бактерий.
3. Рассмотреть электронную микрофотографию клеток клубенька, в которых находятся овальные азотфиксирующие бактерии Rizobium japonicum.