1 Этап – культивирование

На культурах клеток.

Культура клеток – это клетки, которые способные жить в пробирках на искусственных питательных средах (среда 199).

Разновидности культур клеток:

Название	Сущность	Примеры
первично-трипсинизированные	Получают из эмбриональной ткани	Первично-трипсинизированные
перевиваемые	Получают из опухолевых клеток	Hela, D-6, Hep-2
полуперевиваемые	Имеют двойной набор хромосом	фибробласты

На куриных эмбрионах.

Заражают 7-10 дневные куриные эмбрионы с учетом тропизма:

Тропизм	способ заражения
дермотропные	ХАО
респираторные	Амнион
нейротропные	Желточный мешок
энтеровирусы	Не культивируются

На лабораторных животных.

Культивирование проводят на мышах сосунках (до 2-х дней жизни), лабораторных крысах, морских свинках, кроликах. Заражают в зависимости от тропизма вируса:

Тропизм	способ заражения
дермотропные	н\к, п\к, в\к
респираторные	интронозально
нейротропные	интроцеребрально
энтеровирусы	внутрибрюшинно

2Этап - индикация

(обнаружение микроорганизма в материале больного).

На культурах клеток:

• Цветная проба.

Если цвет индикатора (красный) питательной среды 199 не изменяется, это свидетельствует о наличии возбудителя в материале. Если клетки живые и выделяют продукты метаболизма, то происходит изменение цвета индикатора на желтый.

• Цитопатическое действие (ЦПД) - разрушение монослоя .

Виды ЦПД:

Название	Сущность
Симпласт	Образование многоядерных конгломератов
Очаговое	Разрушение монослоя очагами
Диффузное	Равномерное разрушение монослоя

• Реакция гемадсорбции. Берем культуру клеток, зараженных вирусом, и вносим эритроциты. После некоторого времени контакта клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности клеток, пораженных гемагглютинирующим вирусом, остаются прилипшие эритроциты.

На куриных эмбрионах:

• Гибель эмбриона

• Отставание в развитии

• Цитопатическое действие на оболочках эмбриона (некроз, кровоизлияния)

• Гемагглютинация с жидкостями эмбриона.

На лабораторных животных:

• Отставание животных в развитии

• Развитие характерного симптомокомплекса заболевания.

• Гибель животного (из органов готовят мазки-отпечатки и смотрят в них включения: ядерные и цитоплазматические).

2Этап - идентификация вирусов (определение вида вируса в исследуемом материале)

проводится по антигенной структуре:

вирус ГА(+) - РТГА

вирус ГА(-) – РСК, РН на культуре клетки.

Самостоятельная работа.

Ответить на вопросы.

1. Классификация микроорганизмов по типам питания (гетеротрофы, фототрофы, хемотрофы). Прототрофность и ауксотрофность у бактерий.

2. Основные механизмы питания бактерий (пассивное и активное проникновение питательных веществ).

3. Основные питательные среды для выращивания бактерий, этапы приготовления МПА и МПБ, требования, предъявляемые к питательным средам.

4. Классификация питательных сред по составу, консистенции, назначению и источнику получения.

5. Фазы размножения бактериальной популяции в жидкой питательной среде. Влияние проточного культивирования и аэрации на фазы размножения, область применения.

6. Методы выделения чистых культур аэробных бактерий (методы механического разобщения бактерий, химический, физический, биологический, культуральный).

7. Способы культивирования анаэробов, питательные среды.

8. Бактериологический метод диагностики инфекций, его цель, этапы. Принципы идентификации бактерий.

9. Культуральные свойства бактерий, их изучение, значение.

10. Пигменты бактерий, их виды, классификация по химическому составу, роль в жизнедеятельности бактерий.

11. Классификация бактерий по типам дыхания (аэробы, анаэробы,

факультативные анаэробы, микроаэрофилы). Сущность аэроб ного и анаэробного дыхания.

12. Ферменты бактерий, их классификация по механизму действия, химическому составу. Конститутивные и адаптивные ферменты.

13. Сахаролитические и протеолитические свойства бактерий, методы и цель их изучения.

14. Понятия чистая культура, колония, клон, штамм бактерий.

15. Общая характеристика грибов, классификация их, методы выявления. Морфология плесневых грибов рода Mucor, Aspergillus, Penicillium.

16. Особенности строения вирусов, риккетсий и хламидий методы культивирования.

Основная литература

1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник для студентов медицинских вузов / Под ред. А.А. Воробьева М.: ООО «МИА». - 2006

Дополнительная литература

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред А.А. Воробьева, А.С. Быкова М.: МИА. – 2003.

2. Галынкин В.А., Кочеровец В.И., Заикина Н.А., Потехина Т.С., Бунятян Н.Д. Основы фармацевтической микробиологии СПб.: «Проспект Науки». – 2008.

3. Сбойчаков В.Б. Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований: учебник для средних медицинских учреждений СПб «Спецлит» - 2007

4. Практикум по микробиологии: Учебное пособие для студентов высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, М.А. Егорова, Л.М. Захарчук и др.; Под ред. А.И. Нетрусова М.: Издательский центр «Академия» - 2005

Тестовые задания по теме: ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ