Вопрос 19. Серологическая диагностика инфекционных болезней.

Структура ответа. Методы серологической диагностики, суть. Прави­ла забора крови. Трактовка результатов. Парные сыворотки.

Ответ. Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологичес­кую реакцию. В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля, ее разновидности, РИГА, РСК и более инфор­мативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.). PA — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РПГА и РИГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундиро­вать в геле. РСК титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. РН - способность антител нейт­рализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный ана­лиз — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.

| Забор крови для серологического исследования выполняется так же, как и при посеве, но в отличие от последнего, его лучше осуществлять самотеком, а не шприцом. Для этого берут иглу с более широким просветом и вводят в локтевую вену без шприца. В пробирку собирают 3—5 мл крови. При таком сборе эритроциты меньше травмируются и сыворотка крови реже бывает с явлениями гемолиза. После отстаивания и центрифугирования крови сыворот­ку с помощью пипетки переносят в другую пробирку или эпиндорф и хранят в холодильнике при температуре +4°С до постановки реакции. Поскольку им­мунный ответ при большинстве инфекционных болезней развивается с 5—7-го дня, а максимальное нарастание титра антител происходит лишь в периоде реконвалесценции, серологические методы менее пригодны для ранней диаг­ностики и используются главным образом в целях ретроспективной расшиф­ровки этиологии уже перенесенного инфекционного заболевания.

Однако кровь для серологических исследований берется и в первые дни болезни, что в дальнейшем дает возможность наблюдать за нарастанием титра антител в динамике заболевания. Повторные серологические исследо­вания при бактериальных инфекциях производятся не раньше, чем через 5—7 дней. При вирусных заболеваниях берутся «парные сыворотки» с интерва­лом 10—12 дней и при нарастании титра антител в 4 раза и более подтверж­дается диагноз предполагаемого заболевания.

ВОПРОС20. Аллергологическая диагностика инфекционных болезней. | Структура ответа. Сущность аллергологического метода диагностики. Наиболее часто используемый метод введения аллергена. Учет результатов айлергологической пробы. Примеры.

Ответ. Метод основан на регистрации реакции кожи в ответ на введение аллергенов возбудителей. Аллерген сохраняет антигенные свой­ства, но лишен инфекциозности. Постановка внутрикожных проб с аллер­геном производится на внутренней стороне предплечья, вводится 0,1 мл аллергена (бруцеллин, тулярин, токсоаплазмин). Ответ оценивается спустя 1—2 суток по диаметру папулы, зоны гиперемии и отека. Примеры: при туляремии — внутрикожная аллергическая проба становится положительной уже в конце 1-й нед болезни. Тулярин вводят внутрикожно в дозе 0,1 мл, результат учитывают через 24 и 48 ч. Положительная реакция проявляется в появлении гиперемии и инфильтрации кожи диаметром 0,5 см и более. При бруцеллезе —используют реакцию Бюрне — внутрикожно вводят бруцеллин — фильтрат бульонной культуры бруцелл. Эта реакция основана на способности сенсибилизированного организма специфически отвечать развитием местного процесса на введение бруцеллезного антигена в виде покраснения кожи и ее отечности. Реакцию учитывают по величине отека: при отеке диаметром до 1 см ее считают сомнительной; от 1 до 3 см — слабо положительной; от 3 до 6 см — положительной; более 6 см — резко положительной. При токсоплазмозе — использовалась внутрикожная проба с токсоплазмином, она считается положи­тельной, если на месте введения 0,1 мл токсоплазмина появляется гиперемия и инфильтрация кожи диаметром не менее 10 мм (более 20 мм — резко положи­тельная) и через 48 ч размер инфильтрата не уменьшается. Для суждения об активности процесса можно использовать титрационную пробу с токсоплазми­ном, при постановке которой внутрикожно вводят различные разведения ток­соплазмина (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10 000, 1:100000) по 0,1 мл каждого разведе­ния. При активном процессе реакция наблюдается на высокие разведения (до 1:100000 и выше), а диаметр инфильтрата на более слабые разведения может быть равен или даже больше чем на более концентрированные.