Устройство масс-спектрометра для Малди:

Вход для МАЛДИ отличается – тебует лазер и систему оптической наводки. В старых приборах прицел как в компьютерных игр. Если попросить у товарищей, можно даже в матрицу выстрелить. Автомат делает несколько выстрелов, и выбирает масс-спектры, которые воспроизводятся.

Место для помещения матрицы, микроскоп. Разгонная камера. Длинная пролетная труба, чем длиннее, тем лучше, т.к. тогда больше разница во времени прибытия. Иногда используется магнитная линза – для получения более длинного пути в более компактном приборе. Регистрируем время пролета, как видно из названия.

Вещество должно быть чистым!!!!!!! Иначе не удастся даже кристалл сделать.

Молекулярный дизайн соединения для матрицы прозрачен. Должно поглощать на длине волны лазера, чтобы перейти в газ. Низкомолеклярное.

IgG – сложный объект, много мест ионизации. Можно одолеть с помощью МАЛДИ, проблем особых не возникает, с тремя-то пиками. Можно еще уменьшить, поколдовав с матрицей.

Масс-спектрометры – большие комбайны, позволяют сделать большой анализвнутри одного прибора. Но требуют опытного квалифицированного оператора.

Анализ сложных смесей белков – одна из задач протеомики.

Сначала двумерный электрофорез – по изоэлектрической точке и по массе. Потом берем эту картину и разные области подвергаем МС. И – о ужас! В одной, казалось бы, монолитной полосе белков оказывается очень много. И как не увеличивай масштаб, добиться тдельных пиков удается очень редко.

Можно, например, сравнивать фенотипы, когда мы примерно знаем, какие белки нас интересуют.

Можно сравнивать разные аллельные варианты, для чего мы пытались приспособить Бикман и Такман.

Когда заказываем олиг, должны присылать масс-спектр.

Современные приборы для мс

Приборы – модульные;

Направляем разные источники ионов на вещество.

Уже на ионы БП можем напралять ионы других веществ, сталкивать их, проводить реакции.

Есть разные источники ионов; в некоторых можно получать больше ионов, в некоторых можно получать меньше, но в более узком диапазоне характеристик.

Можно получить ионы из разных классов веществ.

На пути частиц можно поставить фильтр – квадруполь. Частицы, когда входят в это пространство, совершают колебательные движения, засчет того, что перпендикулярно движению частицы прикладывается электрическое или магнитное поле, изменяющееся в зависимости, как устроен прибор. Если резонансная частота совпадает с частотой этих колебаний, то она двигаетс как на схеме.

Если не совпадает, частица просто покидает квадруполь.

При каждой комбинации RF/DC потенциалов только ионы с определённым m/z проходят через квадруполь, из-за того, что обеспечивается резонанс.

Дает возможность провести фильтрацию до регистрации.

Перед детекцией частицыможно накопить. И тогда низкая чавствительность компенсируется длительным временем.

Типичный тандемный прибор: помимо типичного МС, есть аж три квадруполя; 2 фильтра, на входе и а выходе, и ячейка, в которую мы запускаем ионы, которые для взаимодействия с веществом.

Можно нафильровать, а потом накопить.