100. Эф фракций крови и лп.

Плазменные липопротеины имеют сферическую форму. Внутри находится жировая «капля», содержащая неполярные липиды (триглицериды и эстерифицированный холестерин) и формирующая ядро ЛП-частицы. Оно окружено оболочкой из фосфолипидов, неэстерифицированного холестерина и белка.

Существует несколько методов определения липопротеинов в крови. Один из них - определение содержания холестерина в различных классах липопротеинов - рассмотрен выше. Другой метод исследования содержания липопротеинов - электрофоретический. При использовании этого метода отдельные фракции липопротеинов классифицируют, сравнивая их электрофоретическую подвижность с подвижностью обычных сывороточных белков. На основании электрофоретической подвижности липопротеинов были разделены на следующие фракции.

Хиломикроны. При проведении электрофореза хиломикроны остаются на старте (содержат очень мало белка) подобно у-глобулинам; представляют собой богатые жиром частицы, поступающие в кровь из лимфы и транспортирующие пищевые триглицериды. Они являются самыми крупными липопротеинами. Плазма крови здоровых людей, не принимавших пищи в течение 12-14 ч, хиломикроны не содержит или содержит их в ничтожном количестве.

Альфа-липопротеины. При электрофорезе а-ЛП движутся вместе с альфа-глобулинами и соответствуют ЛПВП. ЛПВП содержат до 50% белка, приблизительно 30% фосфолипидов, 20% ХС и очень немного триглицеридов. Образуются в печени и стенке тонкой кишки.

Бета-липопротеины. При электрофорезе на бумаге бета-ЛП движутся вместе с бета-глобулинами и соответствуют ЛПНП. ЛПНП содержат 25% белка, 50% ХС, 20% фосфолипидов и 8-10% триглицеридов. Предполагают, что ЛПНП образуются частично или полностью при распаде липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП).

Пре-бета-липопротеины. При электрофорезе пре-бета-липопротеины оказываются между альфа-липопротеинами и бета-липопротеинами, они соответствуют ЛПОНП.

Электрофорез плазмы крови

При изучении белкового спектра крови в качестве унифицированного метода используется зональный электрофорез с поддерживающей средой-носителем.

Под влиянием постоянного электрического поля белки сыворотки, имеющие отрицательный заряд, движутся по смоченной буферным раствором бумаге по направлению к положительному электроду со скоростью, зависящей от величины заряда и молекулярной массы частиц.

Вследствие этого белки сыворотки крови разделяются на пять фракций: альбумины, α1-, α2-, β-, γ-глобулины.

Альбумины обладают выраженным отрицательным зарядом и небольшой молекулярной массой, поэтому они продвигаются в электрическом поле с наибольшей скоростью и дальше других фракций отстают от линии старта. С меньшей скоростью движутся α1-, α2- и β-глобулины.

Наименьшей скоростью продвижения отличаются γ-глобулины, они практически остаются на линии старта.

γ-глобулины — крупные белковые молекулы, их заряд близок к нейтральному.

Окрашенные пятна белковых фракций, полученные методом электрофореза на бумаге или других носителях, носят название электрофореграммы.

Измерения и расчет содержания белковых фракций проводят при денситометрическом сканировании электрофореграмм. Получаемые денситограммы представляют собой графики зависимости оптической плотности и подвижности каждой фракции. Площадь пика пропорциональна количеству белков, находящихся в соответствующей фракции.