Автореферат Иммунология коров при эндометрите

На правах рукописи

Бондарчук Павел Михайлович

ДИНАМИКА ОСНОВНЫХ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ

У КОРОВ ПРИ ПОСЛЕРОДОВОМ

ЭНДОМЕТРИТЕ И ВОЗМОЖНОСТЬ

ИХ КОРРЕКЦИИ

16.00.03 - Ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией

и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата ветеринарных наук

Москва 2003

гаоота выполнена в московской государственной академии ве­теринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина.

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

Петров Алексей Михайлович

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Бурлаков Валентин Александрович; кандидат ветеринарных наук, доцент Дюльгер Георгий Петрович

Ведущая организация: Казанская Государственная академия ве­теринарной медицины им. Н.Э. Баумана.

Защита состоится « 20 » февраля 2003 года в

часов

на

заседании диссертационного совета Д-220.042.01 в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехноло­гии им. К.И. Скрябина по ад р е с у:

109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23;

тел.: [phone].

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.

Учёный секретарь диссертационного совета

Брылина В.Е.

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Обеспечение продовольственной незави­симости населения России, снижение потребления импортных продуктов питания является одной из приоритетных задач нашей экономики. Достижение этой цели невозможно без комплексного решения многих важных вопросов сохранения и развития животно­водства, значительного повышения продуктивности различных ви­дов животных.

По данным многих авторов, эндометриты являются одной из наиболее распространённых патологий гениталий в послеродовом периоде (К.Д. Валюшин, 1987; Н.И. Полянцев, А.Н. Синявин, 1989; Д.Н. Леквиевский, 1990; Д.Д. Логвинов, 1996; Н.Б. Кукушкин, 1999 и др.).

Предрасполагающим фактором развития воспалительного про­цесса является ослабление резистентности организма в результате неполноценного кормления, отсутствие моциона, содержание жи­вотных в помещениях, где нарушены основные параметры микро­климата. При данной патологии часто развивается лейкопения, по­нижается функциональная активность коры надпочечников, снижа­ется иммунобиологическая реактивность организма коров. По дан­ным Плященко С.И., Сидорова В.Т. (1979) у коров, больных гной­но-катаральным эндометритом, отмечается значительное снижение показателей как клеточного, так и гуморального иммунитета.

Следует отметить, что в последнее время рядом исследователей предложено много различных препаратов и методов для лечения коров, больных эндометритом, однако эффективность этих методов до сих пор остаётся низкой из-за быстрой адаптации микрофлоры к антибиотикам, а также в силу однотипности лечения без особого учёта воздействия лекарственных препаратов на защитные силы организма.

В связи с вышеизложенным наша работа посвящена изучению динамики основных параметров неспецифической резистентности и иммунитета у коров при послеродовом гнойно-катаральном эндо­метрите и поиску препаратов и схем для её коррекции.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы яви­лось изучение показателей клеточного и гуморального иммунитета у больных эндометритами коров, а также изучение динамики им­мунных реакций у животных в разные периоды развития болезни ив процессе выздоровления животного в послеродовой период. Изу­чить целесообразность использования саурелизина для коррекции параметров неспецифической резистентности и иммунитета у коров при эндометритах, а также возможность использования данного препарата в качестве лечебно-профилактического средства при данном заболевании.

В соответствии с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить состояние основных параметров неспецифической (естественной) резистентности и иммунитета у коров при эндомет­ритах.

2. Изучить динамику показателей неспецифической резистент­ности и иммунитета у коров в различные периоды течения болезни.

3. Выявить наиболее критический период для иммунной систе­мы при данной патологии и, исходя из полученных результатов ис­следования, определить возможность фармакоррекции основных параметров иммунитета с использованием саурелизина.

4. На основании полученных результатов исследования разра­ботать практические предложения по организации лечебно-профилактических мероприятий при эндометритах у коров с ис­пользованием иммунсстимулятора саурелизина.

Научная новизна. Впервые проведён комплексный сравнитель­ный анализ различных показателей неспецифической резистентно­сти и иммунитета у коров, больных эндометритом, в различные пе­риоды течения болезни. Выявлены наиболее характерные показате­ли иммунной системы, которые отражают динамику иммунодефи-цитного состояния организма животных при данном заболевании. Разработан и внедрён метод активизации иммунных реакций, про­текающих в организме коров при данной патологии с использова­нием нового иммуностимулятора саурелизина. Установлено, что лечение животных различными препаратами при одновременном использовании вышеуказанного иммуностимулятора способствует более быстрому выздоровлению животных, а также восстановле­нию в кратчайшие сроки их продуктивных и воспроизводительных качеств.

Теоретическое и практическое значение работы. Получен­ные данные о динамике основных параметров неспецифической резистентности и иммунитета позволяют прогнозировать развитие и исход эндометритов, способность к дальнейшему воспроизводст-

ву и возможность восстановления продуктивности животных, со­кратить продолжительность сервис-периода. Нами определены со­держание в крови Т- и В-лимфоцитов, уровень фагоцитарной ак­тивности нейтрофилов крови в разные периоды течения болезни, а также содержание в крови иммуноглобулинов классов G и М, лизо-цима, определена бактерицидная активность сыворотки крови. На основании проведённых исследований разработаны практические предложения по активизации иммунных реакций, протекающих в организме коров при эндометритах, с использованием иммуности­мулятора саурелизина.

Апробация работы. Основные теоретические положения и ре­зультаты докладывались на Всероссийской научно-методической конференции по зоогигиене, посвящённой памяти Даниловой А.К. (Москва, 2002 г.); Международной Ирано-Российской научно-практической конференции «Агрокультуры и натуральных ресур­сов» (Москва, 2002 г.).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Динамика основных параметров неспецифической рези­стентности и иммунитета у коров при послеродовом эндометрите.

2. 'Влияние препарата саурелизина на интенсивность иммунных реакций, протекающих в организме коров при эндометритах.

3. Возможность использования саурелизина в комплексе с хи-миотерапевтическими препаратами для лечения коров, больных эндометритом.

3. Использование саурелизина для коррекции иммунодефицит-ного состояния коров при эндометритах.

4. Рекомендации по комплексному лечению коров, больных эндометритами, на основе активизации основных параметров их неспецифической резистентности и иммунитета с использованием саурелизина по предложенной нами схеме и в указанных дозах.

Публикации. По теме диссертации опубликованы 4 научные работы, в которых изложены основные положения, выносимые на защиту.

Объём и структура работы. Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста; состоит из введения, обзора ли­тературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, вы­водов, рекомендаций по использованию научных выводов, прило­жения и списка литературы.

Работа иллюстрирована 16 таблицами и 11 диаграммами. Спи­сок литературы насчитывает 224 источника, в том числе 53-ино­странных.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования по теме диссертации проведены с 1999 по 2001 гг. на кафедре «Акушерство, гинекология и искусственное осеменение животных», в научно-исследовательской лаборатории инфекцион­ной патологии и биотехнологии Московской государственной ака­демии ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скря­бина и в СГЖ «Жегалово» - сельскохозяйственном кооперативе Щёлковского района Московской области.

С целью изучения эффективности лечения вышеуказанной пато­логии с использованием нового иммуностимулятора по принципу аналогов (живая масса, продуктивность, время отёла, продолжи­тельность от отёла до исследования) были подобраны группы жи­вотных по 10 голов в каждой. Диагноз устанавливали на основании тщательного ректального обследования половых органов живот­ных, при этом учитывали состояние матки и состояние яичников.

Схема опытов

На основании применяемых лекарственных средств перед по­становкой основного эксперимента сформировали следующие группы животных:

1-я контрольная группа. Здоровые коровы- 10 голов. Лекарственные препараты животным данной группы не приме­нялись.

2-я опытная группа. 10 коров, больных послеродовым гнойно- катаральным эндометритом. Для их лечения использовали:

1%-ный раствор ваготила, однократно вводили в дозе 100 мл внутриматочно; пенициллин вводили в/м 4 раза в день в дозе 3,5 млн.ЕД (в сутки); 8%-ный раствор гентамицина вводили в/м два раза в сутки с интервалом 12 часов в дозе 8 мл (в сутки)» тетра-

6

вит - 6 мл в/м в 1-й день лечения; прозерин вводили подкожно в форме 0,5%-ного раствора трехкратно в дозе 2 мл+ 2%-ный масля­ный раствор синэстрола в дозе 2 мл вводили в/м 3 раза с интерва­лом 48 часов для активизации моторной функции матки.

3-я опытная группа. 10 коров, больных послеродовым гнойно-катаральным эндометритом. Для их лечения, кроме выше­указанных препаратов, применяемых во второй группе, дополни­тельно использовали иммуностимулятор - саурелизин. Саурелизин вводили ежедневно утром, 1 раз в сутки в/м по 15-20 мл (45-60 ед.) в течение 5 дней.

Саурелизин - комплекс ферментов, способный лизировать кле­точные стенки микробных культур, относящихся к роду Staphylococcus, а также стимулировать иммунную систему орга­низма по отношению к неспецифическим возбудителям, увеличи­вая активность микрофагов и макрофагов, пролиферацию лимфо­цитов, а также спонтанную клеточную цитотоксичность.

Все животные находились под наблюдением, учитывалось время от отёла до 1 -го осеменения, от 1 -го осеменения до оплодотворе­ния, сервис-период, дни бесплодия, продолжительность стельности и межотельного периода, индекс осеменения, количество исследо­ваний и процент оплодотворения.

С целью изучения характера микрофлоры при эндометритах и определения её чувствительности к антибиотикам, были проведены бактериологические исследования.

На основании микробиологических исследований проб содер­жимого половых органов больных эндометритом коров установлен полимикробный состав среды, состоящий из стафилококков, ки­шечной палочки, протея и очень редко синегнойной палочки.

Гематологические исследования проводили согласно общепри­нятым методикам.

Определение количества Т- и В-лимфоцитов в периферической крови проводили согласно методическим рекомендациям под ре­дакцией Л.К. Эрнста (1998) с использованием антииммунных сыво­роток КРС.

Определение субпопуляций лимфоцитов производили электрон­но-автоматическим методом с использованием аппарата «Культер» (Gen-S), способного производить дифференциальный подсчет лей­коцитов, включая Т-хелперы и Т-супрессоры на основе VCS-технологии (изменение объёма, радиочастотных параметров и ла­зерного сэеторассеивания).

Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли модифи­цированные^ методом Лейрира с использованием взвеси суточной культуры Ё. coli шт. О 20.

Концентрацию лизоцима в сыворотке крови определяли с ис­пользованием ацетонового порошка Micrococcus Lysodeicticus от­носительно стандартного кристаллического лизоцима в концентра­ции от 0,5 до 100 мкг/мл.

Количественное определение иммуноглобулинев G и М классов в сыворотке крови телят проводили в реакции простой радиальной иммунодиффузии по методу Манчини (1965).

Определение бактерицидной активности сыворотки крови про­водили измерением, .степени задержки прироста биомассы Е. coli О 20 под влиянием сыворотки фотоколориметрическим методом при зеленом светофильтре.

Данные .результатов исследований обрабатывали методами ва­риационной статистики. Достоверными считались отличия при значениях Р < 0,05.

Для проведения иммунологических исследований пробы крови отбирали в утренние часы до кормления л лечения, а затем на 7, 14, 30-е сутки после лечения. . -

1. Динамика T+Q- лимфоцитов в крови коров (тыс/мкл)

Сроки ис­следований	Группы лечения
	Первая	Вторая	Р	Третья	г? — i
До лечения	2,150+0,2459	1,700+0,2109	Р<Х),05	1,705+0,2167	р<е,05
7-е сут .	2,160+0,2741	1,435+0,49,47	Р<0,05	2,055+0.337!	PXJ.05
1 4-е сут.	2,140+0,3 137 . . t i '	1,723+0,4031 ,-*** (*• , • 1 1 ^f '	Р<0,05	2,340+0,6489	Р>0,05
30-е сут.	2,150±0,2*ОТ	,ЦЯ*нф2449*.<	$*<0,05	2,330+0,40'62	Р>0,05

Из данных табл. 1 видно, что у животных 2-й и 3-й опытных групп'содержание Т-лимфоцитов до лечения было на 21% ниже (Р<0,05),- чем у контрольных животных (здоровых) 1-й группы. Это, вероятно, указывает на снижение показателей иммунитета во время

8

болезни. У животных 2-й группы содержание Т-лимфоцитов досто­верно снижалось (Р<0,05) в процессе лечения и к 7 дню было на 33% ниже по сравнению с животными контрольной группы. Из ре­зультата исследования также видно, что существенная разница (16%) в содержании Т-лимфоцитов у животных 2-й опытной груп­пы сохраняется некоторое время и после выздоровления животных. Через 7 дней после начала курса лечения у животных 3-й группы мы наблюдаем увеличение содержания Т-лимфоцитов до средних величин, характерных для здоровых животных.

2. Динамика содержания Т-хелперов в крови коров

/о

контрольной и опытных групп (———— )

кл/мкл

Сроки иссле­дований		Группы лечения
	Первая	Вторая	Р	Третья	Р
До ле­чения	35,6+2	29,1 + 1,5	Р<0,05	28,7+1,23	Р<0,05
	765,5+2,12	494,6+1,3		489,4+2,35
7-е сут.	35,4+2	30,0+0,21	Р<0,05	31,2+0,5	Р<0,05
	754,6+1,06	430,5+1,14		651,2+0,28
14-е сут.	34,9+3	30,8+0,5	Р<0,05	34,6+0,8	Р>0,05
	738,3±1,04	534,3+1,16		809,4+2,14
30-е сут.	35,5+J	31,3+0,21		34.6+0,5	Р>0,05
	763,3+1,21	561,1+2,03	Р<0,05	817+0,63

Из данных табл. 2 видно, что у животных 2-й и 3-й опытных групп содержание Т-хелперов до лечения было достоверно ниже (Р<0,05) на 19%, чем у контрольных животных (здоровых) 1-й груп­пы. Это указывает на снижение показателей Т-хелперов во время болезни. У животных 2-й группы, как это следует из табл. 2, содержание Т-хелперов незначительно повышалось в процессе ле­чения и к 7 дню было на 15% ниже по сравнению с животными контрольной группы. Из результатов исследования также видно, что существенная разница (12%) в содержании Т-хелперов у жи­вотных 2-й опытной группы сохраняется некоторое время и после выздоровления животных. Через 14 дней после начала курса лече­ния у животных 3-й группы мы наблюдаем увеличение содержания Т-хелперов до средних величин, характерных для здоровых живот-

9

ных, что, по нашему мнению, указывает на благотворное влияние саурелизина на иммунную систему в процессе болезни.

В конце исследования при клиническом выздоровлении живот­ных у коров 2-й опытной группы, которых лечили традиционным способом, содержание Т-хелперов было на 11,8% ниже, чем у здо­ровых животных в этот период, тогда как у животных 3-й опытной группы этот показатель приблизился к норме Р>0,05 (34,6%).

3. Динамика содержания Т-супрессоров

в крови коров

Сроки исследо­ваний	Группы лечения
	Первая	Вторая	Р	Третья	Р
До лече­ния	14,6±1,2	20,9+0,5	Р<0,05	21,3+1,54	Р<0,05
	313,9+1,52	355,3+2,02		363,2+0,31
7-е сут.	14,2+0,5	20,0+0,5	Р<0,05	1 8,8+0,5	Р<0,05
	306,7+1,21	287,2+1,14		386,4+0,24
1 4-е сут.	14,7+2,04	19,2+0,5	Р<0,05	15,4+0,18	Р>0,05
	314,6+2,04	331,3+1,16		360,4+0,34
30-е сут.	14,6+1,43	18,7+0,23	Р<0,05	14,2+0,5	Р>0,05
	309,2+0,51	338,5+1,21		330,9+1,37

Из данных табл. 3 видно, что у животных 2-й и 3-й опытных групп содержание Т-супрессоров до лечения было на 36,9% выше (Р<0,05), чем у контрольных животных (здоровых) 1-й группы. Это указывает на явно выраженное перераспределение субпопуляций в результате воспалительного процесса в матке после родов. У жи­вотных 2-й опытной группы содержание Т-супрессоров в процессе лечения оставалось постоянным и к 7 дню было значительно выше по сравнению с животными контрольной группы (Р<0,05). Из ре­зультатов исследования очевидно и то, что существенная разница в содержании Т-супрессоров у животных 2-й опытной группы со­храняется некоторое время и после выздоровления животных. Че­рез 14 дней после начала курса лечения у животных 3-й группы мы наблюдаем значительное снижение содержания Т-супрессоров до средних величин (Р>0,05), характерных для здоровых животных,

10

что, вероятно, связано с воздействием саурелизина на иммунную систему животных.

4. Динамика содержания В-лимфоцитов в крови коров (тыс/мкл)

Сроки иссле­дова­ний, сут.	Группы лечения
	Первая	Вторая	Р	Третья	Р
До ле­чения	0,990+0,2535	0,730±0,1856	Р<0,05	0;740+0,3636	Р<0,05
7-е	0,980+0,2157	0,780+0,3091	Р<0,05	1,150+0,3073	Р>0,05
14-е	0,970+0,3187	1,020+0,318	Р>0,05	1,240+0,2449	Р<0,05
30-е	0,980+0,3073	0,850+0,5701	Р>0,05	0,970+0,3842	Р>0,05

Из табл. 4 можно видеть, что содержание В-лимфоцитов у жи­вотных 2-й и 3-й групп до начала лечения было значительно ниже, чем у контрольных животных (Р<0,05) на 25,5%. В конце исследо­вания при клиническом выздоровлении животных у коров 2-й опытной группы, которых лечили традиционным способом, содер­жание В-лимфоцитов было на 13,3% ниже, чем у здоровых живот­ных, тогда как у животных 3-й опытной группы данный показатель приблизился к норме Р>0,05 (0,970+0,3842).

5. Динамика фагоцитарной активности нейтрофилов крови (%)

Сроки иссле­дова­ний, сут.	Группы лечения
	Первая	Вторая	Р	Третья	Р
До ле­чения	66,72+1,89	67,24+1,59	Р>0,05	66,54+1,80	Р>0,05
7-е	65,89+0,29	67,32+1,62	Р>0,05	67,37+1,24	Р>0,05
14-е	66,54+0,79	63,21 + 1,48	Р<0,05	66,88+0,78	Р>0,05
30-е	65,28+1,25	62,52+1,12	Р<0,05	66,28+0,29	Р>0,05