Биотехника размножения

Задание 1. Просмотреть препарат под микроскопом при увеличении 300-600 раз и зарисовать в тетрадь одно поле зрения (рис. 3). Отметить эозинотрицательные (активные, живые) и эозинположительные (неактивные, мертвые) спермии.

Рис. 3. Активные и неактивные спермии при увеличении в

300-600 раз.

Задание 2. Подсчитать количество окрашенных и неокрашенных спермиев, результаты занести в табл. 5. Сделать вывод о пригодности спермы для искусственного осеменения.

Таблица 5

Цвет				Поля зрения							Все-
спермиев	1	2	3		4	5		6	7	8	го
Белый
Розовый
Всего

31

Тема 8. Влияние на спермии физических и химических факторов

Приборы и материалы. Микроскоп, обогревательный столик Морозова, предметные и покровные стекла, пипетки, стеклянные палочки, чашка со льдом или снегом, горячая вода; 1%- и 3%-ные растворы хлористого натрия, дистиллированная вода, 1-2%-ный раствор бикарбоната натрия, 2,8-3,0%-ный раствор цитрата натрия, 1-2%-ный раствор уксусной кислоты, 10%-ные растворы серной кислоты и едкого натра, раствор марганцовокислого калия (1:5000), раствор фурацилина (1:5000), 70%-ный спирт, 5%-ный спиртовой раствор йода; салфетки.

С момента получения спермы спермии, находясь вне организма производителя, подвергаются воздействию ряда факторов окружающей среды. Семенная плазма, представляющая в основном совокупность секретов придаточных половых желез, действием растворенных в ней веществ активизирует спермии и сокращает их жизнь. Кроме того, при разбавлении и хранении спермы на спермии влияют такие факторы, как свет, температура, осмотическое давление, различные химические вещества, которые при определенных условиях могут способствовать удлинению их жизни вне организма самца или, наоборот, оказывать на них губительное действие.

1. Влияние осмотического давления

Осмос – диффузия растворенных веществ через проницаемую оболочку, разделяющую раствор и чистый растворитель или два раствора разной концентрации. Давление растворенного вещества называется осмотическим и исчисляется в атмосферах.

Сперма животных имеет постоянное осмотическое давление (7 атмосфер), причем осмотическое давление сыворотки спермы и протоплазмы спермиев примерно одинаковое. В том случае, когда осмотическое давление раствора равно осмотическому давлению спермиев, он является изотоническим. Гипотонический и гипертонический растворы губительно влияют на спермии.

32

Порядок работы

Приготовить три раздавленных капли спермы, определить активность спермиев. Под покровное стекло внести каплю дистиллированной воды, 1%-ного или 3%-ного раствора хлористого натрия. Сперму просмотреть под микроскопом при большом увеличении.

При внесении в сперму дистиллированной воды происходит быстрая гибель спермиев вследствие их гидратации (набухания головки), у части спермиев закручиваются хвосты. Под влиянием 3%-ного раствора хлористого натрия спермии погибают через 1-2 минуты вследствие обезвоживания. Головки спермиев сморщиваются, уменьшаются в размерах. 1%-ный раствор хлористого натрия изотоничен по отношению к спермиям.

Задание. Провести исследование влияния осмотического давления на жизнеспособность спермиев. Записать наблюдения, сделать выводы.

33

2. Влияние температуры

Температура является важнейшим условием, определяющим жизнеспособность спермиев вне организма. При повышении температуры все жизненные процессы в них усиливаются, при понижении – замедляются.

Порядок работы

Приготовить две раздавленных капли спермы, определить активность спермиев.

Сперму просматривать под микроскопом при малом увеличении.

Одно предметное стекло нагреть до 50-550С. Вначале отмечается усиление активности спермиев, затем наступает их гибель.

Предметное стекло с другой раздавленной каплей поместить на 1-2 минуты на лед и, протерев нижнюю часть стекла салфеткой, просмотреть под микроскопом. Затем подогреть предметное стекло до 400С на обогревательном столике. В первом случае все спермии будут неподвижны, при повышении температуры часть спермиев восстанавливает подвижность, остальные – мертвые.

Задание. Провести исследование влияния температуры окружающей среды на жизнеспособность спермиев. Записать наблюдения, сделать выводы.

34

3. Влияние химических веществ

Сперма чрезвычайно чувствительна к различным химическим веществам. Даже следы мыла на руках или посуде губительно действуют на спермии. Поэтому следует тщательно прополаскивать дистиллированной водой посуду и инструменты после мойки и дезинфекции. В помещении пункта искусственного осеменения запрещается хранить медикаменты и дезинфицирующие вещества, а также курить.

Порядок работы

После оценки активности выявляют влияние различных химических веществ на спермии. Для этого каждый раз на чистое предметное стекло наносят новую каплю спермы и действуют на нее тем или иным испытуемым раствором. Капли перемешивают, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом при малом увеличении. Устанавливают время, через которое прекращается движение спермиев. Для изучения влияния йода вокруг капли спермы нанести настойку в виде кольца и, не покрывая покровным стеклом, просматривать под микроскопом.

При внесении в сперму 70%-ного спирта, 10%-ных растворов кислоты и щелочи, марганцовокислого калия, фурацилина наступает гибель сперматозоидов через 1-2 минуты. Раствор кислоты малой концентрации вызывает замедление движения спермиев (кислотный анабиоз). При слабо щелочной реакции среды активность спермиев повышается.

Из настойки йода улетучивается свободный йод, который вызывает быструю гибель спермиев. Проникновение и накопление йода в сперме подтверждается пожелтением капли.

При работе со спермой в лабораториях станций и пунктов искусственного осеменения необходимо соблюдать условия, обеспечивающие длительный срок хранения спермы с сохранением оплодотворяющей способности спермиев.

35

Задание. Провести исследование влияния различных химических веществ и их концентрации на жизнеспособность спермиев. Записать наблюдения, сделать выводы.

36

Тема 9. Исследование глубокозамороженного семени

Приборы и материалы. Сосуд Дьюара с замороженной спермой, микроскоп, обогревательный столик Морозова, водяная баня с термометром, корнцанг, пинцет, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки, ампулы с 2,8-3,0%-ным цитратом натрия, 70%-ный спирт, салфетки.

Техника безопасности при работе с жидким азотом

Жидкий азот – прозрачная, бесцветная, легкоиспаряющаяся жидкость. Массовая плотность его 0,804 кг/л при давлении 760 мм ртутного столба. В обычных условиях химически инертен. Производят его путем сжижения газообразного азота.

Доставляют жидкий азот до потребителей с заводовпоставщиков транспортными цистернами различной емкости, установленными на соответствующих автомобилях.

Замороженную в жидком азоте сперму производителей закладывают на длительное хранение в сосуды Дьюара емкостью

50л и стационарные биохранилища на 200-500 л. Транспортировку замороженной спермы на пункты искусст-

венного осеменения и хранение ее там осуществляют в сосудах Дьюара емкостью 5, 20 и 30 л.

При попадании на открытые участки тела жидкий азот вызывает ожоги, при испарении большой массы жидкого азота изза снижения концентрации кислорода в воздухе возможны го-

ловокружение, обморок или удушье, поэтому при работе с ним необходимо соблюдать правила безопасности.

1.Общие правила при работе с жидким азотом: тщательная защита лица, глаз, рук; одежда, полностью закрывающая кожный покров тела; вентиляция помещения.

2.Особую осторожность следует соблюдать при оттаивании глубокозамороженной спермы в соломинках и облицованных гранулах, т.к. при плохой герметизации проникший внутрь жидкий азот при оттаивании быстро испаряется, увеличивает давление и разрывает оболочку.

3.Для извлечения из сосудов Дьюара замороженной спермы следует использовать предварительно охлажденные инструмен-

37

ты, чтобы предотвратить бурное кипение и разбрызгивание жидкого азота. Не следует заглядывать в сосуд Дьюара с целью определения уровня жидкости в нем, для этого используют специальную линейку.

При длительном хранении в жидком азоте на станциях и племпредприятиях сперму замораживают до температуры –1960С в однодозовых стеклянных или пластмассовых ампулах, облицованных и необлицованных гранулах, соломинках (пайеттах).

Этот способ позволяет хранить сперму многие месяцы и даже годы. Однако для этого требуется строгое соблюдение следующих правил:

1)не допускается преждевременное оттаивание спермы и

повторное ее замораживание. Даже кратковременное повышение температуры до –1250С, например, при перекладывании ампул со спермой из стационарного хранилища в транспортный сосуд Дьюара или из одного сосуда в другой, вредно отражается на качестве спермы. Поэтому до использования сперму постоянно хранят в жидком азоте. Нарушение этого правила приводит к гибели спермиев и снижению качества спермы;

2)перед использованием спермы оператор в защитных очках и в перчатках извлекает ампулу (гранулу или соломинку) из сосуда Дьюара и производит оттаивание, предварительно подготовив все необходимые для этой работы инструменты и оборудование.

Оттаивание спермы в гранулах. Гранулы бывают трех ви-

дов: 1) необлицованные гранулы малого объема, 0,1-0,2 мл (с высокой концентрацией спермиев и с разбавлением дозы изотоническими растворами перед осеменением); 2) необлицованные гранулы большого объема, 0,5-1,0 мл (со средней концентрацией спермиев, разбавления дозы не требуется); 3) гранулы, облицованные в полимерную оболочку (объем 0,25-0,33 мл).

38

Порядок работы

1.Для оттаивания гранул объемом 0,1-0,2 мл одну-две ам-

пулы с раствором цитрата натрия поместить на 1-2 минуты в водяную баню с температурой 38-400С.

2.К горловине сосуда Дьюара быстро подтянуть канистру или марлевый мешочек с гранулами. Стерильным и охлажденным в жидком азоте пинцетом извлечь нужное количество гранул и опустить их в подготовленные ампулы с раствором цитрата натрия.

3.Оттаивать гранулы спермы в течение 8-10 с до полного превращения их в жидкое состояние. После этого ампулы со спермой сразу же вынуть из водяной бани, не допуская дальнейшего нагревания спермы. Одновременно при размораживании быстро опустить канистру, закрыть сосуд крышкой.

4.Ампулы вытереть насухо салфеткой и поставить в штатив, где сперма постепенно приобретает температуру 18-250С.

5.Набрать сперму в инструмент. Сделать мазок, оценить качество спермы. Замороженную сперму быка используют после оттаивания при активности спермиев не ниже 3 баллов. В дозе спермы для осеменения коров и телок должно быть не менее 1012 млн. спермиев с прямолинейно-поступательным движением (при всех способах хранения).

Задание. Разморозить дозу спермы. Оценить ее качество (активность, густота, концентрация). Сделать выводы о пригодности спермы для осеменения.

39

Тема 10. Учет и отчетность в искусственном осеменении

Учет и отчетность должны быть простыми, краткими, но точно отражающими всю производственную деятельность и дающими возможность оперативно контролировать работу пунктов искусственного осеменения сельскохозяйственных животных.

Задание 1. Ознакомиться с документами учета и отчетности, применяемыми на пунктах искусственного осеменения для учета работы по воспроизводству стада на сельскохозяйственных предприятиях. Обратить внимание на назначение и срок составления каждого документа, какие показатели учитываются и кто ведет записи.

1. Ордер на отправку спермы производителя (форма №3-ио).

2. Информация о ходе искусственного осеменения.

40