2 курс / Микробиология 1 кафедра / Микра 6

Микробиологическая диагностика брюшного тифа.

1. Бактериологический метод: посев крови производят на желчный буль-

он, фекалии, мочу и желчь засевают на плотные питательные среды. Иденти-

фикацию чистой культуры проводят:

а) по биохимическим признакам (до рода) с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным признакам (до серогруппы, а затем до серотипа) в РА на стекле с диагностическими сыворотками;

в) фаготипированием (в эпидемиологических целях для установления ис-

точника инфекции).

2. Серологический метод: со 2-й недели заболевания сыворотку крови больного исследуют с помощью ИФА и в РНГА с O- и Vi-эритроцитарными диагностикумами.

Брюшной тиф – это заболевание, при котором нередко после выздоровле-

ния формируется носительство в связи с длительным сохранением сальмонелл в различных органах, чаще в желчном пузыре.

Современной особенностью эпидемиологии брюшного тифа является:

▪увеличение частоты завоза инфекции с эндемичных территорий;

▪высокий эпидемиологический риск за счет лиц без определенного места жительства, среди которых регистрируется высокая заболеваемость брюшным тифом.

С целью выявления брюшнотифозных бактерионосителей обследуют:

а) лиц, переболевших брюшным тифом и паратифом;

б) лиц, бывших в контакте с больными брюшным тифом и паратифом;

в) здоровых лиц (работников пищевых, детских и лечебных учреждений, а

также учреждений системы водоснабжения);

г) лиц с лихорадкой неясной этиологии более 5 дней.

Микробиологическая диагностика брюшнотифозного носительства.

1. Серологический метод:

30

а) ИФА – для определения IgG, как маркеров ранее перенесенного заболевания;

б) РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. Vi-антитела быстро исчезают после полного выздоровления, но при наличии брюшнотифозного носительства присутствуют постоянно.

Все лица, сыворотки которых дали положительный результат в ИФА и РНГА, подлежат тщательному многократному бактериологическому обследо-

ванию.

2. Бактериологический метод проводится по обычной схеме (см. выше бактериологическую диагностику брюшного тифа). На исследование забирают фекалии и мочу 5-кратно с интервалом 1-2 дня и однократно желчь. Оконча-

тельный диагноз брюшнотифозного носительства может быть установлен толь-

ко после выделения возбудителя из исследуемого материала.

Специфическая профилактика брюшного тифа проводится по эпидеми-

ческим показаниям химической сорбированной брюшнотифозной вакциной,

обогащенной Vi-антигеном (малоэффективна).

Существует фагопрофилактика с использованием брюшнотифозного

бактериофага.

2. Внутрибольничные (госпитальные) сальмонеллезы.

Основным возбудителем внутрибольничных сальмонеллезов является

S.typhimurium, который отличается множественной устойчивостью к антибио-

тикам, дезинфектантам, антисептикам и не лизируется типовыми сальмонел-

лезными бактериофагами.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель.

Пути заражения: воздушно-пылевой: при вдыхании воздуха, содержаще-

го пылевые частицы с адсорбированными на них сальмонеллами; контактно-

бытовой: через руки персонала и больных, аппаратуру (эндоскопы, зонды, ап-

параты для ИВЛ и др.), предметы ухода за больными; алиментарный. Наибо-

лее восприимчивы к инфекции дети до 1 года, поэтому заболевания чаще реги-

стрируют в детских стационарах среди новорожденных.

31

Клинические формы:

- гастроинтестинальная – гастроэнтериты с резким обезвоживанием ор-

ганизма и интоксикацией.

-генерализованная – септицемия, менингит с высокой летальностью.

3.Возбудители дизентерии, их свойства. Микробиологическая диагностика бактериальной дизентерии.

Возбудителей бактериальной дизентерии относят к роду Shigella. По меж-

дународной классификации выделяют 4 основных вида: S.dysenteriae (Григорь-

ева-Шига), S.flexneri, S.sonnei, S.boydii.

Морфология: грамотрицательные палочки средних размеров, неподвиж-

ны, спор и капсул не образуют.

Культуральные свойства: на средах Эндо и Плоскирева образуют лакто-

зонегативные колонии, т.к. не ферментируют лактозу. На селенитовой (накопи-

тельной) среде – диффузное помутнение.

Рост S.dysenteriae на среде Эндо.

Биохимические свойства: биохимически менее активны, чем эшерихии и сальмонеллы. Изучение биохимических свойств проводят с помощью энтеро-

тест-систем.

Антигенная структура шигелл:

О – соматический антиген;

К – оболочечные антигены.

32

Факторы патогенности шигелл:

1. Адгезины для прикрепления шигелл к колоноцитам с помощью pili, а также липополисахаридов наружной мембраны.

2.Инвазины (кодируются плазмидами) для проникновения в эпителиальные клетки толстого кишечника и размножение в них. В результате происходит разрушение эпителия и образование язв.

3.Белки внутриклеточного распространения вызывают лизис мембран колоноцитов, что обеспечивает межклеточное распространение шигелл.

4.Экзоэнтеротоксин. Его продукция наиболее выражена у S.dysenteriae (в 1000 раз выше, чем у других видов). Экзоэнтеротоксин шигелл состоит из 2 субъединиц: А и В. А-субъединица – собственно токсическая, нарушает синтез белка в клетках эпителия толстого кишечника и эндотелия капилляров; В- субъединица способствует прикреплению токсина к клеткам эпителия кишечника и проникновению в клетку А-субъединицы.

5.Эндотоксин (угнетает фагоцитоз и вызывает поражение слизистой оболочки толстого кишечника).

6.R-плазмиды кодируют формирование устойчивости к нескольким антибиотикам.

7.Перекрестно реагирующие антигены с тканью толстого кишечника.

Дизентерия – кишечное инфекционное заболевание, характеризующееся поражением дистальных отделов толстого кишечника и интоксикацией. Клас-

сическими симптомами заболевания являются жидкий стул с примесью слизи и крови («инфекционный гемоколит»), а также тенезмы (резкие болевые ощу-

щения в области ануса), которые создают ложные позывы к дефекации.

Источники инфекции: больной человек или бактерионоситель. Болеют чаще дети в возрасте до 10 лет.

Путь заражения: алиментарный через инфицированную воду и пищевые продукты. Заболевание имеет выраженную сезонность – летне-осенний период.

Материал на исследование: фекалии.

33

Микробиологическая диагностика дизентерии.

1. Бактериологический метод (основной): из фекалий для посева заби-

рают слизистые и гнойные комочки с примесью крови. Посев исследуемого ма-

териала производят на дифференциально-диагностическую среду Плоскирева и накопительную селенитовую среду.

Выделенную культуру идентифицируют:

а) по биохимическим признакам с помощью энтеротест-систем;

б) по антигенным свойствам (в РА на стекле с диагностическими сыворотками).

2. РНГА по Рыцаю, РИФ: для определения шигеллезного антигена в фе-

кальном материале.

После перенесенных брюшного тифа и дизентерии у человека формирует-

ся стойкий кишечный дисбактериоз, требующий длительной корригирующей терапии. Специфическое лечение и профилактика не разработаны.

4.Характеристика кампилобактерий и хеликобактерий, вызываемые за-

болевания. Микробиологическая диагностика кампилобактериозов и хеликобактериозов.

Возбудителей кампилобактериозов относят к роду Campylobacter, семей-

ству Campylobacteriaceae: C.jejuni, C.coli, C.fetus, C.upsaliensis.

Морфология: тонкие, грамотрицательные изогнутые палочки, имеющие форму запятой, латинской буквы S, крыльев летящей чайки. Спор и капсул не образуют, монотрихи.

Чистая культура кампилобактерий в окраске по Граму.

34

Культуральные свойства: микроаэрофилы, растут на специальных средах с добавлением крови при пониженной (5-10%) концентрации кислорода. Тем-

пературный оптимум 420С. Патогенные виды культивируют в присутствии га-

зовой смеси (5% О2, 10% СО2, 85% N2). Рост на плотной среде в виде росинок или капель прозрачной воды.

Факторы патогенности кампилобактерий:

1.Адгезины (для прикрепления к эпителию кишечного тракта).

2.Инвазины обеспечивают проникновение бактерий в эпителиальные клетки тонкого и толстого кишечника.

3.Токсинопродукция (выработка эндотоксина, экзоэнтеротоксина, цито-

токсина).

Источником инфекции при всех кампилобактериозах являются сельско-

хозяйственные животные и птицы, в некоторых случаях – собаки и кошки.

Пути заражения: алиментарный (через инфицированную воду и пищевые продукты), контактный (при уходе за животными).

Основные клинические проявления:

-гастроэнтериты с диареей, лихорадкой и болью в животе;

-колиты (боли в животе, имитирующие острый аппендицит);

-внекишечные формы – чаще реактивный артрит.

C.fetus вызывает сепсис, тромбофлебит, менингоэнцефалит. Может вы-

звать самопроизвольные аборты с внутриутробным инфицированием плода.

Материал на исследование: фекалии, кровь, ликвор.

Микробиологическая диагностика кампилобактериозов.

1. Бактериологический метод с идентификацией выделенной культуры по биохимическим и антигенным признакам.

2. Серологический метод: РСК, РИФ, ИФА.

35

Возбудителей хеликобактериозов относят к семейству Helicobacteriaceae,

роду Helicobacter: H.pylori, H.fenneliae (вызывает гастроэнтериты, колиты, сеп-

сис).

Морфология: спиральные грамотрицательные палочки, имеющие S-

образную форму. Спор и капсул не имеют. Лофотрихи.

H.pylori, лофотрихи.

Культуральные свойства сходны с кампилобактериями.

Факторы патогенности H.pylori:

1.Адгезины (для прикрепления к гастроцитам).

2.Ферменты инвазии: уреаза, муциназа и др.

3.Цитотоксины.

4.Острова патогенности (гены, кодирующие синтез цитотоксинов).

Источник инфекции: человек, а также домашние животные.

Пути передачи: алиментарный, контактный (со слюной), возможно зара-

жение контактно-бытовым путем.

H.pylori причастен к возникновению гастритов, язв желудка и двенадцати-

перстной кишки, аденокарциномы желудка.

Материал на исследование: биоптаты слизистой желудка.

Методы микробиологической диагностики.

1.Микроскопия биоптатов желудка.

2.Определение уреазной активности биоптатов желудка.

3.Молекулярно-биологический метод: ПЦР.

4.Бактериологический метод (малоэффективен).

36

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Характеристика возбудителей холеры. Микробиологическая диагности-

ка и специфическая профилактика холеры.

Возбудителями холеры являются: Vibrio cholerae, Vibrio El-Tor (основной)

и Vibrio О-139 «Бенгал», относящиеся к семейству Vibrionaceae, роду Vibrio,

виду V.choleraе.

Морфология: грамотрицательные, слегка изогнутые в виде запятой палоч-

ки средних размеров, монотрихи, спор и капсул не образуют.

Чистая культура V.cholerae		V.cholerae, монотрихи.
в окраске по Граму.

Культуральные свойства: облигатные аэробы, хорошо растут на щелоч-

ных средах (pH 8,5-9,0). В 1% пептонной воде через 6-8 часов образуют нежную пленку. На щелочном агаре образуют гладкие прозрачные с голубова-

тым оттенком колонии.

Биохимические свойства: по классификации Хейберга, на основании способности ферментировать сахарозу, маннозу и арабинозу, представители рода Vibrio разделены на 8 групп. Возбудителей холеры относят к 1 группе Хейберга: расщепляют сахарозу и маннозу, не расщепляют арабинозу.

Антигенная структура:

О– соматический антиген (специфический);

Н– жгутиковый антиген (неспецифический).

По различию строения О-антигена представители вида Vibrio cholerae под-

разделяют на 206 серогрупп, среди которых возбудителями холеры являются

40

серогруппы О1 и О139«Бенгал». V.cholerae и V.El-Tor относят к О1 серогруппе.

Они представлены 3 сероварами: Огава, Инаба и Гикошима. Чаще холеру вы-

зывают серовары Инаба и Огава.

Несмотря на общность морфологических, культуральных, биохимических

иантигенных свойств, V.cholerae и V.El-Tor являются разными биологическими вариантами (биоварами), т.к. отличаются по некоторым биологическим (фено-

игенотипическим) свойствам. Серогруппа О1 (V.El-Tor) вызывает холерные пандемии с высокой смертностью в развивающихся странах. Серогруппа О139«Бенгал» вызывает холероподобные заболевания.

Факторы патогенности возбудителей холеры:

1.Адгезины – pili для прикрепления к энтероцитам.

2.Нейраминидаза способствует прикреплению фракции В холерного эк-

зотоксина к рецепторам энтероцитов.

3.Экзоэнтеротоксин – белок, состоящий из двух субъединиц: А и В.

Субъединица В взаимодействует с рецепторами энтероцитов и обусловливает проникновение в них субъединицы А. А-субъединица – собственно токсиче-

ская, активирует аденилатциклазу, что приводит к увеличению цАМФ, гипер-

секреции солей и воды в просвет кишечника. Развивается диарея, сопровожда-

ющаяся резким обезвоживанием организма.

Холера – особо опасное инфекционное заболевание.

Источники инфекции: больной человек или вибрионоситель.

Путь заражения: алиментарный при употреблении инфицированной воды или пищевых продуктов.

Микробиологические и эпидемиологические особенности современной

холеры (Информационный бюллетень ВОЗ, 2014 г.):

1.Основной возбудитель (95-99%) V.El-Tor (серогруппы О1).

2.Антисанитарные условия окружающей среды в эндемичных районах и ме-

стах поселения мигрантов, беженцев и др., где не удовлетворяются потреб-

ности в чистой воде и средствах гигиены.

3.Последствия технических катастроф с разрушением систем водоснабжения.

41

4.Высокая скорость распространения заболевания (обусловлена скоростными транспортными средствами).

5.Значительный процент вибрионосительства в эндемичных очагах (Юго-

Восточная Азия, Африка, Латинская Америка) с легким клиническим тече-

нием холеры.

Клиническая картина заболевания: основными клиническими формами заболевания является холерный энтерит и гастроэнтерит. Первым клинически выраженным признаком является диарея. Частота стула от 3-10 раз (при легких формах) до 200-300 раз в сутки (при тяжелых формах). Может быть обильная рвота фонтаном, не сопровождающаяся тошнотой. Потеря жидкости без лече-

ния может достигать до 10-15% от массы тела больного и приводит к резкому нарушению водно-электролитного баланса организма. В результате возникает

холерный алгид – клиническая форма, которая характеризуется снижением тургора кожи, нарушением функции сердечно-сосудистой, дыхательной и мо-

чевыделительной системы, падением температуры тела ниже нормы. Отсюда название этой формы заболевания от лат. algidus – холодный.

Материал на исследование: испражнения и рвотные массы.

Микробиологическая диагностика холеры.

1. Бактериологический метод (основной): посев исследуемого материала

на 1% пептонную воду и щелочной агар.

Идентификация выделенной культуры:

1)по морфологическим признакам;

2)по культуральным и биохимическим признакам;

3)по антигенным признакам: постановка ориентировочной РА на стекле, а за-

тем развернутой РА (в пробирках) с О1-холерной сывороткой, сыворотками Инаба, Огава и О-139;

4) для дифференциации V.cholerae от V.El-Tor и V.О-139 «Бенгал» проводят фа-

готипирование и посев исследуемой культуры на среду с полимиксином.

42