Занятие 4. Лейкоцитарная формула. Морфология лейкоцитов.

Цель занятия:

освоение методики подсчета лейкоцитарной формулы; знакомство с морфологией лейкоцитов.

Работа 1. Классификация лейкоцитов.

Лейкоциты – белые клетки крови, имеющие ядро и цитоплазму.

Общее количество лейкоцитов в периферической крови значительно меньше, чем эритроцитов. У животных оно составляет примерно 0,1-0,2%, у птиц – около 0,5-1,0% от числа эритроцитов:

Крс 6-10 тыс/мкл

Лошадь 7-12 тыс/мкл

Мрс 6-11 тыс/мкл

Свинья 8-16 тыс/мкл

Различают несколько видов лейкоцитов, отличающихся друг от друга размерами, наличием или отсутствием зернистости в цитоплазме, формой ядра и др. признаками.

Зарисовать схему классификации лейкоцитов.

СХЕМА – классификация лейкоцитов

Работа 2. Знакомство с лейкоцитарной формулой.

Процентное содержание всех видов лейкоцитов в периферической крови называется лейкоцитарной формулой (лейкограмма, лейкоформула). У птиц вместо нейтрофилов учитывают соответствующие группы псевдоэозинофилов.

В нормальных условиях лейкоцитарная формула относительно постоянна для каждого вида животных (табл. 1) и зависит от индивидуальных особенностей организма с.-х. животных, времени суток, сезона года, условий кормления и содержания животных, породы, пола и др. условий.

Таблица 1 – лейкограмма с.-х. животных

Лейкоциты, %	лошадь	КРС	МРС	свинья
Базофилы	0-1,0	0-2,0	0,3-0,8	0-1,0
Эозинофилы	2,0-6,0	3,8-8,0	4,0-12,0	1,0-4,0
Миелоциты	-	-	-	-
Юные	0-0,5	0-1,0	0-2,0	0-2,0
Палочкоядерные	3,0-6,0	2,0-5,0	3,0-6,0	2,0-4,0
Сегментоядерные	45,0-62,0	20,0-35,0	35,0-45,0	40,0-48,0
Лимфоциты	25,0-44,0	40,0-65,	40,0-50,0	40,0-50,0
Моноциты	2,0-4,0	2,0-7,0	2,0-5,0	2,0-6,0

Отклонения лейкоцитарной формулы служат важным диагностическим признаком при различных заболеваниях.

Лейкограмма дает представление только об относительных величинах. Более объективное представление о составе лейкоцитов крови дает вычисление их абсолютного количества (лейкоцитарный профиль), т.е. содержание каждого вида лейкоцитов в определенном объеме крови.

Лейкоцитарную формулу определяют на основании дифференциального подсчета 200 лейкоцитов в окрашенном мазке [под микроскопом с иммерсией – объектив Х90, окуляр 7(10)] и последующего вычисления их процентного содержания.

Лейкоциты в мазке распределяются неравномерно: более тяжелые (базофилы, моноциты) располагаются по краю мазка, более легкие (лимфоциты) в середине. Поэтому микроскопию мазка следует вести в разных концах и в середине (рисунок 1).

Рис. 1 – подсчет лейкоцитов:

а- по четырехпольному методу Меандре (В. Шиллинг); б- по способу Филипченко; в- по середине мазка.

Для подсчета используют клавишный счетчик или специальную сетку Н. Н. Егорова (рисунок 2, 3).

Счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы имеет 11 клавиш с буквами, соответствующими названиям отдельных лейкоцитов (+ три клавиши для учета патологических форм). Над клавишами размещены табло, в которых при нажиме соответствующих клавиш появляются цифры. В крайних правых окошечках подсчитывается общая сумма нажатых при подсчете клавиш. При подсчете 200 клеток раздается звонок, указывающий на окончание подсчета. Сброс табло производится с помощью рукоятки.

Сетка Н. Н. Егорова изготавливается типографским способом или чертится от руки. Состоит из 100 квадратов (10Х10). Запись клеток проводят черточками. В каждую вертикальную графу записывают по десять клеток, располагая их в соответствии с наименованием форменных элементов крови.

Рис. 2 – клавишный счетчик для подсчета лейкоцитарной формулы:

А – общий вид; Б – схема клавиатуры.

Рис. 3 – сетка Н. Н. Егорова для выведения лейкограммы.

Работа 3. Знакомство с морфологией лейкоцитов.

При подсчете лейкоцитов необходимо определить структурные особенности их цитоплазмы и ядра: вид зернистости, форму ядра, величину клетки и др.

При окрашивании лейкоцитов по Романовскому-Гимзе ядра всех клеток приобретают вишнево-фиолетовый цвет, тогда как окраска цитоплазмы для разных типов клеток неодинакова.

Базофильные лейкоциты имеют лопастевидное ядро, в цитоплазме видны крупные зерна, окрашенные в синий цвет.

У эозифильных лейкоцитов ядро сегментировано, зерна цитоплазмы интенсивно окрашены в ярко-красный цвет.

Миелоциты представляют незрелые формы гранулоцитов и характеризуются большой величиной клетки и крупным ядром. Встречаются в крови при различных заболеваниях организма.

Нейтрофильные лейкоциты - крупные клетки с резко очерченным темным ядром. Цитоплазма слегка розового цвета, содержит мелкие зернышки розовато – фиолетового цвета. Юные формы имеют большое бобовидное или колбасовидное ядро. У палочкоядерных форм ядро в виде подковы или палочки, не сегментировано. У сегментоядерных ядро разделено на отдельные, не связанные друг с другом участки.

Лимфоциты – небольшие клетки, ядро округлое или бобовидной формы. Цитоплазма не зернистая, окрашивается в нежно – голубой цвет, вокруг ядра имеется светлая зона.

Моноциты – это большие клетки с ядром неправильной формы, цитоплазма серовато – голубого цвета.

Зарисовать различные виды лейкоцитов.

Занятие 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ

Цель занятия:

освоение методики определения групп крови

Перед началом выполнения задания заполнить таблицу

Группа крови	Агглютинины (белки плазмы)	Агглютиногены (белки эритроцитов)
I (0)
II (А)
III (В)
IV (АВ)

Предметное стекло помещаем на белую бумагу и наносим на него по одной капле стандартных сывороток I, II и III группы либо используем стекло с лунками (рекомендуется предварительно подписать соответствующие лунки). Затем каплю крови при помощи стеклянной палочки переносим в каплю сыворотки I группы и тщательно размешиваем до тех пор, пока смесь не приобретет равномерно розовый цвет. Аналогичным образом (используя каждый раз новую палочку) переносим каплю крови в стандартные сыворотки других групп. Реакция агглютинации наступает через 1-5 мин.

При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков. Группа крови устанавливается в зависимости от наличия агглютинации.

Заполняем таблицу, обозначая знаком «+» наличие агглютинации, знаком

«-» - ее отсутствие.

Группа крови	Лунка 1 (α и β)	Лунка 2 (β)	Лунка 3 (α)
I (0)
II (А)
III (В)
IV (АВ)

ВЫВОД (сделайте вывод о групповой принадлежности исследуемой крови)

• ___________________________________________________________________________________________________________________________

20