43. Гибридные клетки: получение, характеристика, использование для картирования.

Гибридо́ма — гибридная клеточная линия, полученная в результате слияния клеток двух видов: способных к образованию антител B-лимфоцитов, полученных из селезёнки иммунизированного животного (чаще всего мыши), и раковых клеток миеломы.

Характеристика: Слияние клеток производится с помощью нарушающего мембраны агента, такого, как полиэтиленгликоль. Поскольку раковые клетки миеломы способны делиться большое количество раз, после слияния и соответствующей селекции гибридома, производящая моноклональные антитела против антигена может поддерживаться долгое время.

Использование для картирования: техника экспериментального конструирования способных к размножению межвидовых клеточных гибридов. Гибридные клоны получают путем искусственного слияния культивируемых соматических клеток разных видов, в частности клеток человека и различных грызунов: китайского хомячка, мыши, крысы. Гибридные клетки, значительно превосходящие по своим размерам исходные родительские клетки, оказываются способны не только переживать в условиях культивирования, но и размножаться. Однако размножение этих тетраплоидных гибридов, как оказалось, сопровождается утратой хромосом, причем в первую очередь элиминируются хромосомы человека.

51. Картирование генов с использованием морфологических нарушений хромосом (транслокаций и делеций).

(Робертсоновские) транслокации-или центрические слияния, при которых происходит слияние акроцентрических хромосом с полной или частичной утратой материала коротких плеч.

Транслокация между 13 и 21 хр-й:

В норме у чел две-13 и две-21

Если в области центромеры 1-13 и 1-21 разрыв, то длинные плечи 13 и 21 соединятся друг с другом и образуют хромосому, похожую на хр-у группы С.

Короткие хр-ы образуют моторную хромосому, чем они теряются.

Если у человека 3 вместо 4 хр-м, будет фенотипически норм и являться носителем условно сбалансированной транслокации центрического слияния. Проблемы только у репродуктивному возрасту.

Делеция — хромосомные перестройки, при которых происходит потеря участка хромосомы. Делеция может быть следствием разрыва хромосомы или результатом неравного кроссинговера.

Типы делеции (по положению утерянного участка хромосомы)

• интерстициальные — отсутствует внутренний участок, не затрагивающий теломеру;

• концевые — отсутствует теломерный район и прилежащий к нему участок. Истинность таких мутаций в свете уникальной функции теломер поставлена под сомнение.

52. Картирование генов у человека: метод днк-зондов.

ДНК-зонд – это копия целого гена или части гена, к которой присоединена радиоактивная или флюорисцентная метка. Гибридную молекулу можно реплицировать  и получить большое количество копий генов. С помощью ДНК-зондов были картированы альфа- и бета- цепи гемоглобина. Из эритроцитов выделили иРНК (альфа и бета). Используя обратную транскрипцию синтезировали зонды и использовали их. Далее начали готовить хромосомные препараты. В определенный момент времени денатурировали ДНК, чтобы цепи ДНК отошли. Добавили культуру зонда. Затем денатурирующий фактор убрали и ДНК начала ренатурировать. Так как зонды более короткие и их много, они быстрее находят комплиментарные участки и спариваются с ними. Завершают приготовление препарата. В том месте, где находится ДНК-зонд флюорисцентное свечение.

Если хромосомы окрашены дифференциально, то можно сразу определить, в какой хромосоме и в каком локусе находятся данные гены.